去除血液中白细胞最佳方法

A. 全血中提取白细胞的方法

中性粒细胞分离的方法

1、 标准方法：Ficoll-泛影钠（Ficoll-Hypaque）密度梯度及红细胞裂解法

1） 取一50ml聚乙烯管，无菌采集人外周静脉血，加4.4ml3.8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min，离心，室温。

2） 吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制备无血小板血浆（platelet-poor Plasma, PPP）。

3） 余下的沉降全血加入5ml 6%Dextran (分子量500,000，用无菌生理盐水配制)，并用生理盐水（0.9%）调节最终体积至50ml，轻轻、彻底混匀。室温沉降30min。

4） 吸出富含白细胞的上层液，275gX6min。

5） 沉淀的细胞用8mlPPP-生理盐水（1：4）重悬，并移到15ml离心管中。

6） 悬液细胞上面加入3mlFicoll-Hypaque（密度1.077），750gX5min，室温。

7） 吸取富含中性粒细胞和红细胞层，用0.155M NH4Cl重悬细胞，使红细胞裂解，然后中性粒细胞用含0.25%BSA Hanks平衡液（HBSA，无钙）洗2次，最终用HBSA（含钙）重悬。

8） 用此法可得95%以上的中性粒细胞。

2、 不连续的密度梯度血浆－Percoll离心法

1） 先制备Percoll储存液：Percoll原液（100%）:0.9%NaCl的体积比为9：1。

2） 取一50ml聚乙烯管，无菌采集人外周静脉血，加4.4ml3.8%或5%的柠檬酸盐液定容至40ml。上述全血300gX20min，离心，室温。

3） 吸出富含血小板的上清，2500gX15min，制备无血小板血浆（platelet-poor Plasma, PPP）。

4） 余下的沉降全血加入5ml 6%Dextran (分子量500,000，用无菌生理盐水配制)，并用生理盐水（0.9%）调节最终体积至50ml，轻轻、彻底混匀。室温沉降30min。

5） 吸出富含白细胞的上层液，275gX6min。

6） 沉淀的细胞用2~3mlPPP重悬

7） 在一15ml离心管中依次加入2ml42%、2ml51%Percoll(均为用PPP新鲜配制)、2~3ml细胞悬液，275gX10min.

8） 单个核细胞及部分血小板位于血浆与42%Percoll液之间，中性粒细胞位于42%Percoll与51%Percoll之间。血小板可通过25%Percoll离心5min去除，也可在原密度梯度中加入第三个25%Percoll一起离心去除。

9） 中性粒细胞层用PPP液冼1次，再用含糖的Krebs-Ringer磷酸缓冲液（KRPD，PH7.23）洗1次。

10）用这种方法可得80%中性粒细胞，纯度在95%以上。

3、“无LPS”方法（LPS-Free method)

1）已有用变形细胞（如白细胞）裂解的方法表明，容器及溶液的不含LPS，也就是说，LPS的含量小于0.1ng/ml。

2) 无菌采集静脉血，用10%柠檬酸钠抗凝。

3）抗凝血中加入6%的Dextran(mol wt 70,000)，比例为3：1（vol/vol,blood/dextran），室温，1小时。

4) 收集白细胞的血浆，离心，去上清。

5）红细胞用低渗的0.2%NaCl裂解15秒（此步也可用0.155M NH4Cl 15秒代替）

6）离心前立即加入10ml 1.6%NaCl（含糖(dextrose) 2mg/ml）

7) 离心后用KRPD洗2次。

8）此法得到中性细胞数与方法2类似，但纯度只有80-85%，余下为淋巴细胞及单核细胞。

8）此法得到中性细胞数与方法2类似，但纯度只有80-85%，余下为淋巴细胞及单核细胞。

4 从3中所获得的中性粒细胞进行纯化

1） 因为方法3只能获得80－85%纯度的中性粒细胞，可以把方法2与方法3联合对中性粒细胞进行纯化。

2） 收集从方法3 dextran沉降所得到的富含白细胞的血浆，275g*6min，离心。

3） 管底沉淀用2ml PPP重悬

4） 在一15ml离心管中依次加入2ml42%、2ml51%Percoll(均为用PPP新鲜配制)、2~3ml细胞悬液，275gX10min。

5） 分别用PPP及KRPD各洗1次

6） 用这种方法所得的中性粒细胞纯度高达99%以上，并且中间不需要红细胞裂解的步骤。

krebs-Ringer phosphate（KRPD缓冲液）的配制： 130 mM NaCl, 5mM KCl, 1.27 mM MgSO4, 0.95 mM CaCl2, 5 mM glucose, 10 mMNaH2PO4/Na2HPO4, pH 7.4

配制方法：

A液：NaCl 7.5985g ; KCl 0.3727g ; CaCl2 0.1054g，glucose-H2O 0.9495g, 加ddH2O 100ml溶解；

B液：NaH2PO4-2H2O 0.2964g Na2HPO4-12H2O 2.9011g，加100mlddH20溶解后加入MgSO4-7H2O 0.3130g，充分溶解。

将A、B混合，用ddH20将体积调节至990ml左右，用1M NaOH或1M HCl调节pH至7.2~7.4，定容至1000ml。

B. 怎么从人的血液中提取白细胞

1、新鲜全血，红细胞裂解液（1：1），颠倒混匀数次，静置5min。10000g，4度，10min。此时可见白细胞沉淀和上层亮红色的液体。
2、加入TRIzol,(106－107细胞加500ul)，反复抽吸，直至有大量泡沫产生（细胞裂解的标志之一）。常温孵育5min。
3、加入氯仿（氯仿：TRIzol＝1：5），剧烈混匀15s, 室温静置10 min。
4、离心,12,000g 15min, 4℃。
5、小心吸取上清液，转移到新EP管中, 加入异丙醇（异丙醇：TRIzol=1:2）,充分混匀（8－10次）, 室温孵育10min。
6、离心,12,000g 10min, 4℃。
7、可见管底有凝胶状沉淀, 弃去上清液, 加入 75%乙醇（乙醇：TRIzol=1:1），温和混匀。7500g，5min。
8、弃尽上清液,倒扣在滤纸片上（放在玻璃皿中）室温干燥5 min（不要干透，即RNA略微出现透明时），加入60ul DEPC水溶解沉淀。

C. 目前最实用的去除血液中的白细胞的最佳方法是

如果诊断明确为白血病，可以对症的应用一些药物来进行治疗，同时需要完善骨穿的相关检查，来明确骨髓造血的情况。定期的复查血常规来观察相关指标的变化，如果出现并且加重，需要输血和血小板进行治疗。另外，如果出现合并有发热感染的情况，积极的给予抗生素应用。

D. 怎样降低白细胞

可以先自服一些消炎药或止吐药。

E. 有什么方法降低白细胞值的

白细胞高是说明孩子有炎证，消炎了白细胞自然就降下来，无需刻意去降这个值。有些炎证在体内，没有表象反映了，但还有慢性炎证没消完，那么血项也下不来。如果之前是吊水治疗的，那么停水之后根据医嘱再吃五到七天消炎药配合估计可好了。供参考。这种脓毒证还是要就医检查的。

F. 白细胞过高，要怎么才能降低

以前做过手术或化疗吗?有炎症的时候，血液，尿液里面的白细胞就会增加。一般来讲感染会引起白细胞增高。多喝点水，吃点氟派酸可能会有帮助!
白细胞计数(WBC)和白细胞分类计数(DC)
血液中的白细胞包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞。化验单中的白细胞计数(WBC)是指测定血液中白细胞的总数，而分类计数是指各种白细胞的百分比。由于各种白细胞的生理功能不同，所以在不同的病理情况下，可引起不同类型白细胞的数量发生变化。一般而言，我们只要掌握白细胞计数、中性粒细胞(N)和淋巴细胞(L)的分类就可以了，因为在平常的生活中，医生是根据白细胞的数量来判断身体是否有感染发生，然后再根据白细胞分类来判断是什么类型的感染，应该使用什么类型的药物。一般而言，如果中性粒细胞的数量增多是细菌性的感染，淋巴细胞数量增多是病毒性的感染。
另外可以尝试青霉素V钾片，每日三次，每次一片 白细胞计数正常范围在4000---10000/立方毫米。白细胞技术高于正常时也有生理性增多。比如剧烈运动后，饱餐后，过度寒冷等。病理性增多可见1：感染。也就是有炎症。当然就首选消炎药。当然任何药都有副作用。你要选择的用。保健药品在有炎症期间是不主张吃的。因为按中医理论，分虚实二证。炎症是实症。实则泻之。虚则补之。所以保健药品在有炎症期间不该用。当然你可以多吃点水果之类的保健食品。
你应该是属于炎症,做一下尿检看一下!

G. 如果用白细胞去除术治疗慢性粒白血病有什么伤害老人是否适用

您好！
“白细胞分离术”是慢粒白血病急变患者抢救治疗时为快速降低白细胞水平的临时措施，不是主要治疗办法。老人只要身体不是很虚弱的，可以做。
慢粒白血病有3个阶段：1-慢性期CP（不正规治疗情况下可持续1～3年,也有5-6年的）；2-加速期AP；3-急性变期BP/BC。
慢粒患者必须抓紧在慢性期积极治疗、控制住病情，否则一旦急变、转成急性白血病那就麻烦了，可能几个月人就不行了。
请问患者现在是否已经急变了？白细胞特别高、脾脏肿大疼痛啊？
对于慢粒急变患者，现在首要疗方案是：1-用血液细胞分离机和化疗快速降白；2-然后1天吃6粒格列卫来缓解病情，将病情重新拉回慢性期；3-拉回慢性期后，改为1天吃4粒格列卫来控制病情。
慢性粒细胞白血病（CML）现在全世界主流治疗方案是吃格列卫（甲磺酸伊马替尼，有瑞士诺华公司的或印度NATCO公司的两种）。格列卫能将病情始终控制在慢性期，也就是说能不断延长慢性期、不发生急变。
瑞士诺华公司格列卫24000元1个月，买3赠9后是72000元1年。
印度NATCO公司格列卫现在1000元左右1个月。
现在格列卫2代药也有了（达希纳、达沙替尼等），但价格很高。
羟基脲和干扰素来降低白细胞只能短期表面维持，不是实质性治疗。只能降低白细胞以避免白细胞过高导致并发症，不能不断延长慢性期，不能阻止急变的发生。

H. 去白细胞过滤器的简介

方法体外培
养肠肿瘤细胞LOVO和胃肿瘤细胞SGC，并采集非肿瘤患者术野血液，制成浓缩红细胞。将肿瘤细胞计数后混入
浓缩的红细胞中，用白细胞过滤器过滤，观察过滤对血样中肿瘤细胞的影响并与未经过滤处理的对照组进行比
较。结果过滤后的血样中未发现肿瘤细胞，而对照组血样中可见到肿瘤细胞。培养14d后观察，经白细胞过滤
器过滤后的血样未见肿瘤细胞生长，而对照组血样中有大量肿瘤细胞生长。结论应用自体血液回收机配合白
细胞过滤器，可有效去除血液中的肿瘤细胞。
应用白细胞过滤器去除白细胞输血的技术在国外已普遍应用。在我国近年来也取得很大进展，受到了临床医务人员的重视旧。目前，白细胞过滤器以其去除白细胞效率高、操作简便、价格合理且无不不良反应， 而成为最有效的去除白细胞的方法，在预防输血不良反应的产生及输血相关病毒的传染方面已取得了较为 满意的效果。但应用白细胞过滤器去除血液中肿瘤细胞国内报道较少。