① 如何筛选和鉴定DNA重组体
通过目的基因的特性来筛选、
比如用青霉素或者其他抗性环境来择选载入成功的重组体、
活下来的就是目的基因表达成功的、
② DNA克隆重组体的筛选
在生物技术中,DNA克隆重组体的筛选是一个关键步骤。首先,通过转化、转染或者感染的技术,将重组DNA分子导入到受体细胞中。这些细胞在特定条件下,如培养在涂布了适当培养基的培养板上,会形成大量的转化子菌落或者转染噬菌斑。
每个重组体DNA分子都携带着特定的外源基因,而受体菌在接纳过程中通常只能接受一个重组体。因此,要从众多的菌落或噬菌斑中识别出携带目的基因的那些,就需要进行筛选或选择。这个过程旨在确定哪些菌落或噬菌斑中的DNA具有预期的功能或特性。
筛选策略根据不同的载体体系、宿主细胞特性和外源基因在受体细胞中的表达情况,可以采用直接选择法或非直接选择法。直接选择法通常是基于目的基因的表达产物,如特定颜色的菌落或具有特定表型的细胞。而非直接选择法则可能涉及到基因表达的间接标志,需要后续的实验验证。
总之,DNA克隆重组体的筛选是一个精密的过程,通过合理的筛选方法,科学家能够有效地分离出具有目标基因的受体细胞,为后续的实验研究提供关键的起点。
应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质——同源或异源、原核或真核、天然或人工的DNA与载体DNA相结合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子,继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子,即DNA克隆。
③ DNA克隆的重组体的筛选
通 过转化、转染或感染,重组体DNA分子被导入受体细胞,经适当涂布的培养板培养得到大量转化子菌落或转染噬菌斑。由于每一重组体只携带某一段外源基因,而 转化或转染时每一受体菌又只能接受一个重组体分子,如何将众多的转化菌落或转染噬菌斑区分开来,并鉴定哪一菌落或噬菌斑所含重组DNA分子确实带有目的基 因,这一过程即为筛选或选择。根据载体体系、宿主细胞特性及外源基因在受体细胞表达情况不同,可采取直接选择法或非直接选择法。
④ 重组体和空载体的颜色分别是什么
白色和蓝色。蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。白色菌落为DNA重组子,蓝色菌落为空载体。
⑤ 抗性平板是什么意思
是指根据抗生素抗性基因插入失活原理而设计的培养基,插入失活法是重组体常用的筛选方法。
⑥ 插入失活法和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么
【答案】:主要差别是:
(1)插入失活法是直接根据失活基因的表型变化来筛选重组体。
(2)插入表达法是根据一个基因的失活引起另一个基因的表达表型来选择。