蛋白质检查方法有哪些方法有哪些方法有哪些

⑴ 什么是尿蛋白

尿蛋白 尿蛋白定性试验是用以筛选和粗略估计尿蛋白含量的方法。试验的方法有三种：试纸法、磺柳酸法和加热醋酸法。磺柳酸法和加热醋酸法都是根据浊度反应将无混浊或无沉淀定为阴性(一)，将出现混浊或沉淀的定为阳性(+)。磺柳酸法操作简便，灵敏度高，可广泛用于普查，但其对白蛋白的灵敏度高于球蛋白，且影响因素较多，易造成假阴性或假阳性。加热醋酸法对白蛋白和球蛋白的灵敏度基本一致，影响因素少，准确性较高。
根据浊度反应估算尿蛋白的含量如下：
尿蛋白<0．1g／L：一；尿蛋白为0．1—0．2g／L：±；尿蛋
白为0．2—1.0g／L：+；尿蛋白为1．0～2．0g／L：++；尿蛋白
为2．0—4．0g／l： +++；尿蛋白>4．0g／L： +++十。
正常尿液中含有微量蛋白质(24小时尿蛋白定量<150mg)，普通检测方法不能发现，检查结果为阴性。超出此范围则可检出，称为蛋白尿。但由于尿蛋白试验只是测定一次尿的结果，易受尿液浓缩及稀释程度的影响，常常不能准确反映蛋白尿的程度。
当肾小球、肾小管发生病变时，如各期肾炎、肾病以及高血压发生肾动脉硬化时，均可出现蛋白尿；各种细菌性感染，如肾盂肾炎、肾结核、败血症等亦可出现蛋白尿；非感染性疾病，如肾结石、多囊肾、肾淀粉样变性以及休克、严重肌肉损伤、发热、黄疸、甲状腺功能亢进、溶血性贫血及白血病等，也可出现蛋白尿。
生理性蛋白尿常见于食高蛋白饮食后，精神激动、剧烈运动、长时间受寒、妊娠等，都可能出现暂性的蛋白尿，但尿蛋白定性一般不超过+。
一般说来，持续性的蛋白尿往往代表肾脏有病变。尿蛋白的多少反映了病变程度，临床可据此作疗效观察。然而，需要特别指出的是，肾小球病变到了晚期，由于大量肾单位废损，使蛋白滤出减少，尿蛋白检查反而减少或消失，这并不代表肾脏病变的减轻。 中医治疗肾病——独树一帜
血尿、蛋白尿虽然是判断肾脏病病情严重程度及其预后的重要指标，但是肾病患者不能一叶障目。数值固然重要，但更重要的是病情能得到真正好转。只要病情得到控制，潜血、尿蛋白数值自然会降下来。但现在有一些患者舍本逐末，一双眼睛死盯着数值不放，必然导致只见树木不见森林的后果。要想真正恢复健康，治病于本是最重要的。这就要求患者必须找到适合自己的方法，彻底治愈肾病。
目前现代医学对肾病治疗方法比较局限，只是应用激素、免疫抑制剂及抗菌素治疗，在病情转入尿毒症期以后，进行透析与换肾。这些是治疗肾病的常规方法，虽然在疗效上有一定优势，但其副作用较大，且费用昂贵。尤其进入尿毒症期，病人在治疗时会更加痛苦，这痛苦不仅来源于身体上，更多的是精神上的。它给患者及家庭带来巨大的思想压力和经济压力，一般家庭难以承受。
近年来，由于我国传统中医学理论得到了极大发展，在肾病治疗上，与世界先进科技接轨所衍生出的微化中药渗透治疗，在肾病治疗领域创造出神奇效果。对肾脏病的恢复、肾功能的改善及晚期肾病患者生命的延长上起到了明显作用。微化中药渗透治疗肾脏病就是运用中医理论对每一种肾脏疾病的病因、病机进行分析、归纳，辩证准确地用药，并在此基础上，应用先进的微化技术改善药物有效成份的吸收率，从根本上提高药效，迅速改善症状。
微化中药如何消除肾病引起的蛋白尿、血尿？
由上面的论述知道，肾脏病尿蛋白和红细胞的漏出，主要原因是肾小球滤过膜受损伤导致通透性增加造成的。在过去，我们只是针对原发病进行治疗，在肾小球滤过膜的修复上针对性很差。由此可知，即便尿蛋白、潜血在一段时间内减少甚至消失，但其最根本的病因没有解决，肾小球的滤过膜仍未得到修复。在药物作用消失后，或在某些原因诱导下，尿蛋白、潜血又怎会不卷土重来呢？
经过微化处理后的中药，具有更强的药物活性，它在充分发挥传统中药治病于本特点，使破碎的中药分子链再次有效链结，形成新功能的同时。还可针对受损伤的肾小球基底膜，去除沉积在基底膜上的免疫复合物与病变组织，修复受损的基底膜。这一方法主要是修复肾脏病变的基因和受损的肾脏病变细胞，并激活受损组织细胞内DNA复制，促使受损肾脏结构改变，使受损肾脏功能得到恢复。所以，修复之后，由于引起病变的根本原因被消弥于无形，尿蛋白、潜血必然会逐渐减少直到消失，且这种消失是随着病因的清除而消失的，所以很难出现反复，当然更不存在停药后症状的反弹。
所以，在肾病引起的蛋白尿、血尿的治疗上，关键是要治“本”，是去修复受损的基底膜，而不是一味的被表象所蒙蔽；病情的好坏病人本身是可以感觉到的，不必去刻意追求那一个个数字。只有这样，病情才会达到真正意义上的治愈！
以上是以前的，今天才发现有很多不足，目前保护肾太依赖中药未必是好事，中药确实不错，可是尿蛋白并不只是肾炎肾本身的问题，根据尿蛋白的成因，一般可以分为5类
1.肾小球性蛋白尿：肾小球性蛋白尿（glomerular proteinuria）是由于肾小球滤过膜对血浆蛋白通透性增高所致。是临床最多见的类型。见于多种原发或继发性肾小球肾炎。是由于缺血、中毒、免疫病理损伤破坏了滤过膜的完整性；或由于滤过膜电荷屏障作用减弱而致。
2.肾小管性蛋白尿：在正常情况下经肾小球滤出的中小分子蛋白质，几乎全被肾小管重吸收。当肾小管疾病时，蛋白质重吸收受障碍，小分子蛋白质就会从尿中排出，包括β2-微球蛋白、溶菌酶、核糖核酸酶等。由于血液中小分子蛋白质浓度很低，故此类病人尿蛋白总量一般不超过2g，有时仅10mg，也可以蛋白尿存在。
3.溢出性蛋白尿：在某些疾病中，血中小分子蛋白浓度增加，如本周氏蛋白、血红蛋白、肌红蛋白等：若滤液中浓度超过肾吸收阈限，就可以排出，见于骨髓瘤、血管内溶血性疾病。
4.分泌性蛋白尿：尿中IgA排泄增多，见于肾小管间质性肾病；髓袢升支厚段受炎症及药物刺激时，分泌粘液蛋白（Tamm Horsfell蛋白，T-H蛋白）增多。
5.组织性蛋白尿：组织遭受破坏后可以释放胞质中各种酶及蛋白质，若分子量小，肾小球滤液中浓度超过肾小管吸收阈限，就则可自尿中排出。该项蛋白液可以直接从肾小管排出，如癌胚抗原——aFP、溶菌酶、肾小管基膜抗原等。
因此，测定蛋白质的大小及性质对临床很有意义。SDS据丙酰胺凝胶电泳的应用更有实际价值。
总之，如果你没有学过医，那我告诉你，蛋白尿只是一个症状而不是病，治疗蛋白尿关键是认识他，为什么会有蛋白尿。糖尿病高血压是不是控制好了。
尿蛋白测定，包括尿蛋白定性和尿蛋白定量。
尿蛋白定性的临床意义：
尿蛋白定性有生理性的，也有病理性，其阳性程度与肾损害程度不一定成正比。糖尿病患者尿中持续出现尿蛋白阳性，除外泌尿系感染、原发性肾病外，应考虑糖尿病肾病的诊断。有专家认为，糖尿病肾病早期蛋白尿呈间歇性，只在劳动或运动后为阳性反应。因此，运动后尿蛋白检验对诊断糖尿病肾病的早期发现有一定的意义。
尿蛋白定量的临床意义：
（1）24小时尿蛋白定量的正常参考值为10～150毫克。若在150～500毫克，为微量蛋白尿，＞500毫克为临床蛋白尿。微量蛋白尿提示糖尿病肾病早期，需长期控制血糖，对逆转或延缓肾病和视网膜病变的发生发展有一定意义。
（2）尿白蛋白排泄率（uAE）正常参考值＜15微克/分。糖尿病肾病早期，肾小球基底膜受损较轻，故只有微量白蛋白漏出。早期糖尿病肾病uAE为15～200微克/分，临床糖尿病肾病＞200微克/分。有专家报告，糖尿病肾病有明显蛋白尿者，几乎100%有糖尿病视网膜病变。当糖尿病患者uAE30微克/分，可能是糖尿病微血管合并症防治的关键时刻。严格控制血糖后，早期糖尿病肾病尿白蛋白可逆转或部分逆转。目前，常用测定微量尿蛋白的方法是放射免疫法。
什么是尿蛋白？正常人尿液中有无蛋白？
尿蛋白是尿液通过酸化加热后混浊而检出的。正常人每天尿中排出的蛋白质一般为40～80毫克，上限为150毫克，称为生理性蛋白尿。由于量少，常规化验检测为阴性，超过150毫克/日，即属于异常蛋白尿。人体在剧烈运动、重体力劳动、情绪激动、过冷、过热及在应激状态时，尿蛋白的排出量均可增多，称一过性蛋白尿，在几小时或数天后即可恢复正常。
肾病患者的尿验常识
留尿化验应注意的问题：
收集尿液的时间：任何时间排出尿都可以做常规化验检查。一般肾病病人为观察前后结果则规定一律采用清晨起床第一次尿液送检。
送检尿量：一般5～10ml，如要测尿比重则不能少于50ml。
留尿标本应取中段尿：即先排出一部分尿弃去，以冲掉留在尿道口及前尿道的细菌，然后将中段尿留取送检。
应注意不要把非尿成分带入尿内：如女性患者不要混入白带及月经血，男性患者不要混入前列腺液等。
正常值与其变动
○健康的人也会排出一些尿蛋白
健康的人也会出现极少量的尿蛋白，但在定性检查时只要试纸不变色呈阴性(一)就属正常。
此外，定量检查尿蛋白量，只要在100毫克以下时皆属正常的范围。
另外，即使身体并无障碍，只要有激烈运动、酷寒、精神兴奋、强烈压力时，也会出现尿蛋白。
被怀疑为异常值的疾病
○疑阳性及阳性就是异常
定性检查呈疑阳性(+ -)、或阳性(+)时就被认为是异常值。
此外，定量检查时，一日数值超过100毫克就是异常值。
尿蛋白显示异常值时的疾病，有的是肾脏本身的疾病，有的则是肾脏病以外的原因所引起的疾病。
○肾脏病以外的原因所引起的蛋白尿
肾脏病以外的原因所引起的蛋白尿多数为良性，当其疾病治愈后，蛋白尿也就随之消失。
[热性蛋白尿] 感冒等疾病引起发烧至摄氏三十八度以上时就会出现蛋白尿。
[起立性蛋白尿] 年轻人脊椎向前弯屈压迫到肾脏血管时就会有蛋白尿的情形。如果不治疗，在三十岁前后也会自动消失。
[瘀血肾] 心脏衰竭等肾静脉瘀血时会出现尿蛋白，但瘀血消失时蛋白也会消失。
○肾脏疾病所引起的蛋白尿
每次做尿液检查就会出现蛋白时，很明显的就是患有肾脏疾病。
[肾炎] 急性肾炎或慢性肾炎，其一日的尿液蛋白量从少量到数十公克都有。
[肾变病症候群] 一日量尿液会出现三公克以上的多量尿蛋白。症状严重时，尿液渗出的蛋白会使血液中的蛋白浓度降低。另外，也有因糖尿病性肾症、淀粉样变性病(AJnyloidosis)、胶原病等而引起的情形。
[肾硬化症] 随着本态性高血压引起的肾硬化症，尿蛋白量会减少，多半在300毫克以下。
此外，多发性骨髓瘤、全身性红斑狼疮、慢性风湿性关节炎、痛风、水肿病等水银中毒、铅中毒疾病，也会出现尿蛋白。
出现异常值时该怎么办？
○不能以一次检查就下诊断
第一次检查出现尿蛋白时，必须再做检查。再检查仍出现异常时，就要接受尿沉淀、红细胞数、白细胞数等的检查，也要实施肾脏与泌尿道的精密检查，然后综合全身症状来诊断是否有肾脏疾病或是其他疾病。有肾脏疾病时，还要做其他肾功能检查，再做综合的诊断。
○治疗的基本在于饮食疗法
诊断为膀胱炎、肾盂肾炎等泌尿道感染症、肾炎、肾病变时，必须保持平静，服用医师所指示的药物。
诊断为肾炎、肾病变时，必须接受肾机能检查。其检查结果不良时，就要限制运动，并实施饮食疗法。肾障碍的治疗基本在于饮食疗法，由此可知饮食疗法是十分重要的，所以必须遵守医师指示，控制一日内食盐与蛋白质的摄取量。

⑵ 蛋白质及氨基酸的测定有哪些方法求大神帮助

楼主你好： 测定蛋白质最基本的方法是定氮法，即先测定样品中的总氮量，再由总氮量计算出样品中蛋白质的含量。蛋白质含量测定最常用的方法是凯氏定氮法，它是测定总有机氮的最准确和操作较简便的方法之一，在国内外应用普遍。此外，双缩脉法、染料结合法、酚试剂法等也常用于蛋白质含量测定，由于方法简便快速，故多用于生产单位质量控制分析。 蛋白质及氨基酸的测定 蛋白质是生命的物质基础，是构成生物体细胞组织的重要成分，一切有生命的活体都含有不同类型的蛋白质。人体内的酸碱平衡、水平衡的维持；遗传信息的传递；物质的代谢及转运都与蛋白质有关。人及动物只能从食品得到蛋白质及其分解产物，来构成自身的蛋白质，故蛋白质是人体重要的营养物质，也是食品中重要的营养指标。 蛋白质是复杂的含氮有机化合物，分子量很大，它们由20种氨基酸通过酰胺键以一定的方式结合起来，并具有一定的空间结构。不同的蛋白质其氨基酸构成比例及方式不同，故各种不同的蛋白质其含氮量也不同。蛋白质可以被酶、酸或碱水解，最终产物为氨基酸。氨基酸是构成蛋白质的最基本物质，在构成蛋白质的氨基酸中，亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸等8种氨基酸在人体中不能合成，必须依靠食品供给，故被称为必需氨基酸，它们对人体有着极其重要的生理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病，或通过补充而增强了新陈代谢作用。所以食品及其原料中蛋白质和氨基酸的分离、鉴定和定量具有极其重要的意义。 蛋白质的测定 测定蛋白质最基本的方法是定氮法，即先测定样品中的总氮量，再由总氮量计算出样品中蛋白质的含量。蛋白质含量测定最常用的方法是凯氏定氮法，它是测定总有机氮的最准确和操作较简便的方法之一，在国内外应用普遍。此外，双缩脉法、染料结合法、酚试剂法等也常用于蛋白质含量测定，由于方法简便快速，故多用于生产单位质量控制分析。 微量凯氏定氮法 本法适用于各类食品中蛋白质的测定。 1．原理 食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸胺。然后碱化蒸馏使氨游离，用过量硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。反应过程分为三个阶段，用反应式表示如下。 ①消化 2NH2(CH2)2COOH 4-13H2S04一(NH。)2S04+6C02+12S0=+16H20 (NH4)2S04+2Na()H一2NH3十+2H20+。Na2S04 2NH3+4H3803—，(NH4)2 B207+5H20 ③滴定 (NH4)2 B2 07+2HCl+5H20—NH4C1+4H3803 2．仪器 ①消化炉。 ②凯氏定氮蒸馏装置。 3．试剂 所用试剂均用不含氨的蒸馏水配制。试剂均为分析纯。 ①CuS04。 ②K2SO。 ③浓H2SO。 ④2％H。BO。溶液。 ⑤混合指示剂：1份O．1％甲基红乙醇溶液与5份O．1％溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份O．1％甲基红乙醇溶液与1份0．1％次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 ⑥饱和氢氧化钠：500 g氢氧化钠加入500 mL水中，搅拌溶解，冷却后放置数日，澄清后使用。 ⑦0．01 toolI．一’或0．05 toolL叫HCl标准溶液(需用无水碳酸钠标定后使用)。 4．操作步骤 ①样品消化：精密称取O．2～2．0 g固体样品或2～5 g半固体样品或吸取液体样品5～20mI。，放人500 mI。干燥凯氏烧瓶中，加人O．2 g硫酸铜、3 g硫酸钾及20 mL浓HzSOa，于凯氏瓶口放一小漏斗，并将其以45。角斜支于有小孔的石棉网上。（更多详细咨询请参考国家标准物质网 www.rmhot.com ）用电炉以小火加热，待内容物全部碳化，泡沫停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微沸，至液体变蓝绿色透明后再继续加热微沸30 min。冷却，小心加入20 mL水，再放冷至室温，移人100 mL容量瓶中，并用少量水洗烧瓶洗液并人容量瓶，在加水至刻度，混匀备用。除不加样品外，取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸，按同一方法做试剂空白消化。 ②水蒸气发生瓶内装水至约2／3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 ③向接收瓶内加入10 mL 2％硼酸溶液及混合指示液l滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取lO mI。样品消化稀释液由小玻璃杯流人反应室，并以10 mL水洗涤小烧杯使之流人反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将3～10 mL饱和氢氧化钠溶液倒人小玻璃杯中，提起玻璃塞使其缓缓流入反应室，立即将玻璃塞盖紧，并加水于小玻璃杯中以防漏气。加紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸汽通人反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏2～5 min，移动接收瓶，使冷凝管下端离开液面，然后用少量中性水冲洗冷疑管下端外部，再蒸馏1 min取下接收瓶，以0．01 molI．叫或O．05 molL1HCl标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。同时吸取10 mI_，试剂空白消化液按③操作。 5．计算 6。说明 ①干样用称量纸称重连纸一同消化，空白管同样放称量纸消化。 ②含糖量高和油脂高的样品消化时容易溢出，加热要缓慢。 ③氨是否蒸馏完全，可用pH试纸测试馏出液是否为碱性来判断。 ④实验前必须仔细检查蒸馏装置的各个连接处，保证不漏气。所用橡皮管、塞子须浸在氢氧化钠(10％)中，煮沸10 min，然后水洗、水煮，再用水洗。 ⑤小心加样，切勿使样品沾污凯氏烧瓶口部和颈部。

⑶ 尿常规有蛋白质是什么意思

尿常规有蛋白质，说明病人已经有蛋白尿。尿常规检查其中就有一项查尿蛋白，检查的方法一般是采用定性的方法或者是半定量的方法，定性的方法给出的结果是(+)、(-)，一直到(++++)。半定量的方法可以给出一定的数值，但这个数值的准确性并没有那么高。如果在尿常规检查的时候发现尿蛋白阳性，往往提示病人出现蛋白尿，首先要排除生理性蛋白尿。
生理性蛋白尿最常见的就是运动性蛋白尿和直立性蛋白尿等等，排除生理性蛋白尿，才可以考虑病理性蛋白尿。这个时候会要求病人去做24小时尿蛋白定量和尿蛋白分类，看看尿蛋白的总量到底有多少，尿蛋白从哪来，从而找到病人的尿蛋白的具体的原因，给他相应的治疗。

⑷ 尿蛋白微量的尿蛋白检验方法

定性试验是用以筛选跟粗略估计尿蛋白含量的方法。检查的方法有着三种：试纸法、磺柳酸法跟加热醋酸法。磺柳酸法跟加热醋酸法都是根据浊度反应将无混浊或无沉淀定为阴性（一），将出现混浊或是沉淀的定为阳性（+）。磺柳酸法操作比较简便，灵敏度高，可广泛用于普查，但是对白蛋白的灵敏度高于球蛋白，且影响因素较多，易造成假阴性或是假阳性。加热醋酸法对白蛋白跟球蛋白的灵敏度基本一致，影响因素少，准确性较高。
根据浊度反应估算的尿蛋白含量如下：
尿蛋白<0.1g/L：一；
尿蛋白为0.1-0.2g/L：±；
尿蛋白为0.2-1.0g/L：+；
尿蛋白为1.0～2.0g/L：++；
尿蛋白为2.0-4.0g/L：+++；
尿蛋白>4.0g/L：++++。
正常尿液中含有微量蛋白质（24小时尿蛋白定量<释程度的影响，常常不能准确反映蛋白尿的程度。人体在剧烈运动、重体力劳动、情绪激动、过冷、过热及在应激状态时，尿蛋白的排出量均可增多，称一过性蛋白尿，在几小时或数天后即可恢复正常150mg），普通检测方法不能发现，检查结果为阴性。超出此范围则可检出，称为蛋白尿。但由于尿蛋白试验只是测定一次尿的结果，易受尿液浓缩及稀。
尿蛋白是肾病出现一定会出现的症状之一，可是慢性肾病出现的尿蛋白，患者朋友都不太了解。因为在生活中的不注意，常常忽略它的危害。专家提醒患者，尿蛋白引起的小管细胞生物学变化是十分严重的，出现尿蛋白的许多肾脏病都存在着细胞过度增生，代表着一种非适应性反应，严重的会导致肾衰。

⑸ 蛋白质组学主要包括哪些分析技术及各自特点

双向凝胶电泳
双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。由于双向电泳技术在蛋白质组与医学研究中所处的重要位置，它可用于蛋白质转录及转录后修饰研究，蛋白质组的比较和蛋白质间的相互作用，细胞分化凋亡研究，致病机制及耐药机制的研究，疗效监测，新药开发，癌症研究，蛋白纯度检查，小量蛋白纯化，新替代疫苗的研制等许多方面。近年来经过多方面改进已成为研究蛋白质组的最有使用价值的核心方法。

等电聚焦
等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。等电聚焦凝胶电泳依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时，其静电荷数为零，在电场中不再移动，据此将蛋白质分离。

生物质谱
生物质谱技术是蛋白质组学研究中最重要的鉴定技术，其基本原理是样品分子离子化后，根据不同离子之间的荷质比（M/E）的差异来分离并确定分子量。对于经过双向电泳分离的目标蛋白质用胰蛋白酶酶解（水解Lys或Arg的-C端形成的肽键）成肽段，对这些肽段用质谱进行鉴定与分析。目前常用的质谱包括两种：基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和电喷雾质谱（ESI- MS）。

飞行时间质谱
MALDI 的电离方式是 Karas和Hillenkamp于1988年提出。MALDI的基本原理是将分析物分散在基质分子（尼古丁酸及其同系物）中并形成晶体，当用激光（337nm的氮激光）照射晶体时，基质分子吸收激光能量，样品解吸附，基质-样品之间发生电荷转移使样品分子电离。它从固相标本中产生离子，并在飞行管中测定其分子量，MALDI-TOF-MS一般用于肽质量指纹图谱，非常快速（每次分析只需3~5min），灵敏（达到fmol水平），可以精确测量肽段质量，但是如果在分析前不修饰肽段，MALDI-TOF-MS不能给出肽片段的序列。

电喷雾质谱（ESI-MS）
ESI- MS是利用高电场使质谱进样端的毛细管柱流出的液滴带电，在N2气流的作用下，液滴溶剂蒸发，表面积缩小，表面电荷密度不断增加，直至产生的库仑力与液滴表面张力达到雷利极限，液滴爆裂为带电的子液滴，这一过程不断重复使最终的液滴非常细小呈喷雾状，这时液滴表面的电场非常强大，使分析物离子化并以带单电荷或多电荷的离子形式进入质量分析器。ESI-MS从液相中产生离子，一般说来，肽段的混合物经过液相色谱分离后，经过偶联的与在线连接的离子阱质谱分析，给出肽片段的精确的氨基酸序列,但是 分析时间一般较长。 目前，许多实验室两种质谱方法连用，获得有意义的蛋白质的肽段序列，设计探针或引物来获得有意义的基因。随着蛋白质组研究的深入，又有多种新型质谱仪出现，主要是在上述质谱仪的基础上进行改进与重新组合。

⑹ 国家标准检测蛋白质含量测定方法

蛋白质含量测定方法就是检测N元素的含量，像三聚氰胺的问题，就是通过增加N的含量使“蛋白质”含量提高的。

国家标准检测蛋白质含量的方法叫做凯氏定氮法，食物中的蛋白质在催化加热条件下分解，导致氨和硫酸结合产生硫酸铵。 碱蒸馏采用无硫，硼酸吸收，用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸耗计算氮含量，再乘以转化系数，即蛋白质含量。

具体操作步骤如下：

1.样品处理

精确称量0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸收10-20ml液体样品（约30-40mg氮当量）。将其转移至干燥的100毫升或500毫升氮气固定瓶中，加入0.2克硫酸铜，6克硫酸钾和20毫升硫酸，轻轻摇动，在瓶口放置一个小漏斗，将瓶子倾斜石棉网上有45度角，有小孔。

加热小火后，内容物碳化，泡沫完全停止，加强火力，保持瓶内液体稍微沸腾，直至液体呈蓝绿色澄清透明，然后继续加热0.5小时。取出并冷却，小心加入20毫升水，冷却，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗净氮气瓶，洗净液放入容量瓶中，然后用水冲洗至刻度，混匀备用。

取相同量的硫酸铜，硫酸钾和浓硫酸作为试剂进行空白试验。然而，这种方法很危险，很难在实验室中证明。大多数实验室都有一个消化器，可以一次处理16个以上的样品和一个可以自行设定温度的呼吸机。它更安全，更可操作。

(6)蛋白质检查方法有哪些方法有哪些方法有哪些扩展阅读

除了凯氏定氮法以外，标准的测量方法还有：

• 分光光度法

食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，在pH4.8的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。在波长400nm 下测定吸光度值，与标准系列比较定量,结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。

• 燃烧法

样品在900~1200℃下燃烧。在燃烧过程中，产生混合气体。 诸如碳，硫和盐的干扰气体被吸收管吸收，氮氧化物被还原成氮。 形成的氮气流由热导检测器（TCD）检测。