有哪些方法可以区别不同的细菌

‘壹’ 细菌的分类方法有哪几种

细菌分类学（taxonomy）是指对细菌进行分类、命名与鉴定的一门学科。它的任务是在全面了解细菌的生物学特征的基础上，研究它们的种类，探索其起源、演化以及与其他类群之间的亲缘关系，进而提出能反映自然发展的分类系统，并将细菌加以分门别类。它包括三个方面：分类（classification）、命名（nomenclature）和鉴定（identification）。
一、基本概念
1.细菌分类 是根据每种细菌各自的特征，并按照它们的亲缘关系分门别
类，以不同等级编排成系统。分类有两种：①以细菌的形态和生理生化特性为依据的表型特征分类法，包括有传统分类法（classical classification）和数值分类法(numericalclassification)；②用化学分析和核酸分析，以细菌大分子物质（核酸、蛋白质）结构的同源程度进行分类称种系分类（phylogenetic classification）或自然分类（natural classfication）。
2.细菌命名 在分类基础上，给予每种细菌一个科学名称，使之在生产实践、临床实践和科学研究工作中相互交流成为可能。按照细菌命名的法规，能保证所有的科研工作者以同样方式给予细菌命名。
3.细菌鉴定 将未知细菌按分类原则放入系统中某一适当位置和已知细菌比较其相似性，用对比分析方法确定细菌的分类地位。若与已知细菌相同即采用已知菌的名称，不同者则按命名原则确定一个新名称。
二、分类等级
细菌的分类等级和其他生物相同，依次为界（kingdom）、门（division）、纲（class）、目（order）、科（family）、属（genus）、种（species）。细菌属于原核生物界（procaryotae），包括有细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体和螺旋体。
分类等级拉丁字尾比较固定，表示方法如下：目-ales、亚目-ineae、科-aceae、亚科-oideaae、族-eae、亚族-inae。
种是细菌分类的基本单位，将生物学性状基本相同的细菌群体归成一个菌种；性状相近、关系密切的若干菌种组成一个菌属；相近的属归为一科；依次类推。在两个等级之间，可添加次要的分类单位，如亚门、亚纲、亚属和亚种等。群和组不是正式分类等级，是泛指具有某种共同特性的某个集体，任何等级都可借用。
同一菌种的各个细菌，在某些方面仍有一定的差异，可再分成亚种（subspecies），亚种以下的分类等级为型（type），以区别某些特殊的特征。例如抗原结构不同而分的血清型（serotype）；对噬菌体敏感性不同的噬菌体型（phagetype）；对细菌素敏感性不同的细菌素型（bacteriocin-type），生化反应和某些生物学性状不同的生物型（biotype）。
由不同来源分离的同一种、同一亚种或同一型的细菌，称为株（strain）。株的建立是从一次单独分离物的单个原始菌落传代的纯培养物，例如从10个肺结核患者的痰液中分离出的10株结核分枝杆菌。具有某种细菌典型特征的菌株称为模式菌（typical strain）或标准菌株（standardstrain），它是该种菌株的参比菌株。在细菌的分类、鉴定和命名时以模式菌为依据，也可作为质量控制的标准。
三、细菌命名法
《国际细菌命名法典》（the international code ofnomencluture ofbacteria）1990年修订本（1992年ASM出版）是目前公认的命名法典，是在1975年出版的基础上，经历了10余年，3届国际微生物学会议的努力而通过的一部法典，它确认了1980年1月1日后，由国际系统细菌学杂志（IJSB）合法发表的细菌命名。
细菌的科学名称（学名）的生物双名式（binomen），具备拉丁化文字的形式和明确分类等级的两个特点，即有一个属名和一个种名构成。属名在前，是名词，首字母大写；种名在后，是形容词，不论是否为人名或地名均须小写；两者均用斜体表示。细菌学名的中文译名则种名在前，属名在后。例如Mycobecterium tuberculosis（结核分枝杆菌）、Salmonellatyphi（沙寒沙门菌）。属名也可用第一个字母代表，如M tuberculosis、Styphi等。有时某些常见的细菌也可用习惯通用俗名如tuberoulosis （结核杆菌）、typhoidbacilus（伤寒杆菌）等。有时泛指某一属细菌而不特指其中的某个细菌则可在属名之后加上sp，如Mycobacteriumsp，Salmonellasp，即表示分枝杆菌属和沙门菌属细菌（sp代表菌种species，复数用spp）；如果使用1个亚种的名称，则在种名后再加亚种名如Klesbsiella penumoniae subspecies pneumoniae。
命名法典规定，新的细菌名称必须在IJSB发表后，经过世界公认的国际细菌命名裁定委员会公布，菌名批准目录刊登后正式应用。凡有关细菌研究的学术论文必须使用上述正式命名的细菌学名。
细菌分类方法
细菌的分类是在对细菌的大量分类标记进行鉴定和综合分析的基础上进行的。用作细菌的分类标记有形态学、生理生化学、免疫化学和遗传学等方面的性状。近年来，应用各种现代化技术和设备研究细胞的化学结构和化学组成，分析它们的来源关系，为发展细菌分类学开拓了前景。

‘贰’ 菌种鉴定常用的分离方法有哪些

菌种质量检测的目标包括菌丝形态、菌落特征以及子实体形态等方面。质量检测常用方法如下：

（1）建立标准的培养和观察方法

对于一个栽培品种各菌种的质量检测，实际上是以该品种典型的生物学特性（包括形态特征、生理生态特性、栽培习性）为参照标准进行比较，以检验菌种是否存在品种退化、菌种老化、病菌侵染、杂菌污染和品种混杂等质量问题。同时，菌种质量检测不仅要考虑从哪些方面来评价一个菌种的质量优劣，也要考虑用怎样的标准方法对菌种质量进行评价的问题。因为一定的结果来源于一定的方法和一定的条件。方法和条件不同，结果就失去了可比性，也就无法鉴别，因此，需要建立标准。这些标准包括：培养基、培养条件（温度、湿度、pH、光照等）、菌种的菌龄等。

（2）连续观察

在菌种生长过程中，要连续观察，一切不正常的现象只有在生长过程中才能表现出来。而当菌种长满培养基表面后，其不正常现象往往会被菌种的过龄而掩盖。

（3）宏观检查

对食用菌母种、原种及栽培种的宏观检查要根据其培养特征来进行（参见前述有关内容），这是菌种生产者及使用者普遍使用的方法，简单易行，但需要有多年的从业经验与技术沉淀。如被检菌种表现出菌落生长速度不一致、气生菌丝变稀疏或出现扇变菌落、菌落上过早出现色素、或不同特征的菌落混杂共存、或菌落上出现黑褐色、青灰色、黄褐色或红色的孢子堆，均可以确定该菌种存在质量问题。优质菌种外观菌丝洁白、密集粗壮，生长速度一致，齐发并进。

在生产实践中，广大菇农和专业工作人员总结出“纯、正、壮、润、香”的质量检查方法。这种应用感官识别菌种优劣，是经验的总结，能大致、快速地鉴定出菌种的优劣。具体方法是：

“纯”指菌种的纯度高，无杂菌感染，无斑块、无抑制线，无“退菌”、“断菌”现象等。

“正”指菌丝无异常，具有亲本正宗的特征，如菌丝纯白、有光泽，生长整齐，连结成块，具弹性等。

“壮”指菌丝发育粗壮，长势旺盛，分枝多而密，在培养基上恢复、定植、蔓延速度快。

“润”指菌种含水量适中，基质湿润，与瓶壁紧贴，瓶颈略有水珠，无干缩、松散现象。

“香”指具该品种特有的香味，无霉变、腥臭、酸败气味。

通过检测各种食用菌菌丝生长的色泽、速度、均匀度等特征是否正常，来判断菌种生长是否正常、是否可用，但辨别不了是否优质高产。

（4）显微镜检查

对菌丝体进行显微观察，可以确定菌丝粗细、分枝、隔膜、锁状联合等特性是否均一，是否与该栽培品种的典型特征一致（参见前述相关内容）。具有不同形态特征的菌丝体存在于同一菌种体中，表明该菌种存在质量问题；如果出现菌丝体重寄生现象，常表现出不同特征的菌丝体相互缠绕，或菌丝体中空变细，或在寄生点出现吸器等不正常现象。

镜检的方法是：挑取少量菌丝，置载玻片中央的水滴上，用解剖针或接种针拨散，盖上盖玻片，也可加碘酒或美蓝等染色后进行镜检。正常的菌丝一般透明、分枝状，有横隔和明显的锁状联合；异宗结合的食用菌，如仅有单核菌丝，不具结实性，不宜作菌种用；双核菌丝中，锁状联合多而密，则结菇力强，一般可认为是好菌种。如：

①双孢菇 观察双孢菇单孢子萌发后的菌丝生长形态。凡菌丝洁白、健壮，保存时间较长时菌丝颜色不变，较耐28℃以上气温，生长在基质上平贴培养基表面，气生菌丝不多的，为同化能力较强，产量较高的菌株。相反，菌丝生长初期好，很快变黄变稀，如蜘蛛丝一样，长出培养基表面菌丝较多的菌株产量较低。

②香菇 观察香菇的双核菌丝，在斜面培养基上生长速度达到1.2厘米/天以上的，菌丝不十分粗壮和洁白，锁状连合频繁，锁状连合在菌丝间相距较近，且在观察面上分布均匀，一般均是高产和抗杂能力较强的菌株。香菇出菇的密度与锁状连合有一定关系。

③草菇 观察草菇菌丝，发现菌丝分枝角度大的，出菇率高，产量高。菌丝分枝角度小、平行排列的，产量低。

各种食用菌的菌丝生长是否正常、是否可用，一般都以色泽、速度、均匀度等特征加以检测，但这并不能说明其是否优质高产。

（5）拮抗试验

也称对峙反应。同一种食用菌，经分离或杂交，将选育出许多不同的菌株，这些菌株的菌丝在形态上很难区别。如不同编号的香菇菌种，都是白色绒毛状菌丝，镜检时均具有锁状联合等。在当前菌种管理工作尚不十分健全的情况下，“同名异种”、“同种异名”的现象普遍发生，要识别异同，可采用“拮抗试验”加以区别。具体方法是：

用1支20毫米×200毫米的无底试管，中央部位装入长 5～7厘米的木屑麸糠培养基，两端压平并盖棉塞，灭菌后，两端各接入两株受检的菌种 1小块，25℃左右条件下培养，当两端菌丝往中央生长并相互接触后，把试管移至20℃、约300勒克斯的漫射光下继续培养，观察菌丝接触区有无对峙反应。若无褐色的带线出现，表示两个受检菌株的基因极相似或相同，是相同的菌株，仅编号不同，即同种异名。如果受检菌株间形成带线，则表示是不同的菌株。

用平板进行拮抗试验测试，方法是在无菌的PDA培养基平板上各接入2个或多个被检菌株的菌种，在上述条件下培养，观察菌丝相接触部分有无带线，以区别相同或不同的菌株。也可用菌种瓶（袋）进行拮抗测试（图2-11）。

图2-11 拮抗现象

（6）菌丝长速测定

在适宜的条件下，若菌丝生长迅速、粗壮有力、浓密整齐，一般为优质菌种。若菌丝生长缓慢、中断或长速极快、稀疏无力、参差不齐和易枯黄萎缩，则为不良菌种。菌丝生长速度测定，可在PDA平板中心接种培养，测量菌落两个直交直径，取其平均值。同理，还可在原种、栽培种瓶（袋）壁上划线测定。

（7）菌丝生长量测定

将等面积的菌苔接入无菌的液体培养基内，在相同的条件下，进行摇床振动培养，经过一定时间后，过滤收集菌丝，反复冲洗干净后置容器内，80～100℃烘箱中烘干至恒重后称重。凡菌丝增殖快、重量重的为优质菌株，而增殖慢、重量轻的为不良菌株。

（8）耐高温测定

以双孢菇为例，把菌种置于20～22℃下培养，待菌丝长到1/2试管斜面时，每一菌株取出2～3支试管，置于35℃温度下，经24小时作抗热性试验，然后放到22～23℃下培养，观察菌丝恢复情况。若菌丝恢复萌发快，仍健壮、旺盛生长，则表明该菌株具有耐较高温的优良性状；如果菌丝生长缓慢，出现发黄倒伏，萎缩无力，则为不良菌株。

（9）均一性测定

将母种接种于标准培养基的平板上，并置于标准的环境条件下，每批做30～50个重复，进行长势和长速的连续观察记录。均一性好的品种，每个重复之间长势和长速几乎没有肉眼可见的差异。如果长势和长速不一，则表明原始的母种的遗传均一性不良，不宜作生产用种。

（10）纯度测定

菌种纯度高低是鉴定菌种质量好坏的关键环节。优质菌种要求同一管、瓶或袋内只含有所需要的菌种菌丝体，而不能含有其他种类的杂菌。这里所说的杂菌包括细菌、放线菌、酵母菌和各种霉菌，以及含有两种食用菌菌丝体或同一种食用菌的两个品种菌丝。凡是被杂菌污染的菌种都是不纯菌种，必须予以淘汰。在三角瓶内装入浅层液体培养基，灭菌后接入经捣散的菌种，25℃条件下培养，约1周观察，若有气泡和菌膜发生，并具酸败味，说明菌种不纯，混有杂菌；如果无上述现象则菌种纯正无杂。

（11）长势测定

菌丝长势包括菌丝生长的状态和速度。凡是菌丝生长迅速、整齐浓密、健壮有力的菌种为优良菌种。如果菌丝生长缓慢，或长速特快、稀疏无力、参差不齐、易于衰老，则表明是劣质菌种。在鉴别菌丝长势时，必须注意，在不同培养基上、不同培养条件下，同一种食用菌菌丝的长势不同，因此，判断食用菌的菌种长势，应采用相同的培养基，这样，结果就可靠一些。在外界环境条件相同的情况下，菌丝生长旺盛、生长量多、生长速度快的要好于菌丝生长弱、生长量少、生长速度慢的菌种。还有一种方法是在三角瓶内装入浅层液体培养基，灭菌后接入经捣散的菌种，25℃条件下培养，约1周观察浮在液面的菌种。如果菌丝向旁边迅速生长、健壮有力、边缘整齐，且不断增厚，说明该菌株生长势强；若表面生长慢、稀疏、菌丝层薄，说明长势弱，不宜用于生产。

（12）抗霉性测定

以木耳为例：制备平板，在平板的一边分别接入不同的木耳菌株，每一菌株3个重复，在26～28℃下培养。待木耳菌丝长到平板一半左右时，在平板的另一边接上木霉菌丝，继续培养。之后注意观察木霉菌丝与木耳菌丝的交界处，出现拮抗线的表示木耳菌株抗霉能力强，木霉菌丝无法长过去，为抗霉能力强的菌株。如果木霉菌丝很快盖过木耳菌丝，说明这个木耳菌株的抗霉能力差或没有抗霉力。

（13）出菇试验

对引进或分离的同一品种的若干菌株进行出菇对比试验，必须是在各级菌种的培养基成分、培养温度、培养时间及栽培条件基本一致的情况下进行。出菇试验可按菇类的常规栽培方法进行，数量可少些。为使试验准确，每一菌株设3～4个重复，以避免试验的偶然性。在位置排放上尽可能按菌名拉丁文排列，以相同的措施管理，在管理过程中对环境因子的变化、管理措施及生长历程、品种本身性状等要详细全面记录。以香菇为例记载内容如下：

①母种菌丝生长情况，如菌丝浓淡、生长快慢、菌苔韧性等。

②原种、栽培种中菌丝生长情况，如菌丝萌动、吃料、生长快慢；菌种表面有无菌皮或菌皮厚薄，白色颗粒状物有无或多少；培养基转色情况等。

③栽培阶段应记载：菇木转色快慢、颜色深浅；出菇快慢、菇生长密度；子实体经济性状，包括菇的大小、厚度、色泽、圆整程度、菌柄长度、粗细等；转潮快慢；对水分的敏感程度；产量及产量分布；出口菇比例等。

通过对记载资料分析，选出综合性状符合要求的菌株，供大面积生产或出售。

出菇试验因季节推迟或其他原因，可采用一种较简单的方法来弥补，即直接将接有各菌株并已发好菌的瓶（袋）装菌种，小心地敲破瓶颈或打开塑料袋口，使培养料外露（如果是双孢菇，则要覆土调好土粒的湿度），置最适宜的温、湿度条件下进行出菇（耳）管理，观察记载各项指标，最后进行评比。但这种方法的结果只能提供参考。

（14）栽培指标

采用一定的栽培规模，通过不同地区、不同原料、不同栽培方式，进行多次反复栽培观察，详细记录、评比后，具有优质、高产、高抗、高效和遗传性、稳定性强的菌株，才是优质和可推广的品种。其鉴定的内容、方法和指标有：

①吃料能力鉴定 将菌种接入最佳配方的原种培养料中，置适宜的温、湿度条件下培养，1周后观察种菇（耳）菌丝的生长情况。如果菌种块能很快萌发，并迅速向四周和培养料中生长伸展，则说明该品种的吃料能力强；反之，菌种块萌发后生长缓慢，迟迟不向四周的料层深处伸展，则表明该品种对培养料的适应能力差。对菌种吃料能力的测定，不仅用于对菌种本身的考核，同时还可以作为对培养料选择的一种手段。

②成活率 将菌种接在适宜的培养基上，若菌丝能很快恢复、定植和蔓延生长，成活率很高，是质量好的菌种；反之，接种后恢复慢，成活率不高是质量差的菌种。

③出菇快慢 一般说，高温型的出菇快，低温型的出菇慢，中温型的介于两者之间。而以菇的质量来说，高温型的质量差，低温型的质量好。但同一温型食用菌品种的不同菌株，其菌种接种后若菌丝分解培养料能力强，培养前后培养料失重大，出菇快而多，总产高，即是好菌种；否则为劣质菌种。

④菇峰间隔 在一个生产周期中，子实体发生可分数潮次，产菇最多时称菇峰，最低时称菇谷，每个菇峰和菇谷构成一潮菇。凡菇潮多，间隔时间短，说明菌丝分解能力强，供子实体发生的养分积累多，因此转潮快，是好的菌种；反之，菇潮间隔时间长，或不明显，零星出菇，产量低，即为劣质菌种。

⑤干燥率 鲜菇经干制后干燥率高，说明转化率高，子实体含水分低，为优质菌种。

⑥生物学效率 生物学效率，指每100千克干料可产多少千克鲜菇。生物学效率高，则菌种质量好，反之为劣质菌种。

（15）经济指标

高产不一定高效、丰产不等于丰收，要占领市场，获得较高利润，还必须具备商品的要求，如产品的色、香、味、形，档次，上市时间，货架期和保质期等。凡是鲜菇上市时间早，产量高、品质好、档次高、含水量低，不易变色、变质、破碎、失重，无农药残毒、残臭，符合食品卫生标准和得到的利润高等，均表示经济指标高，则为优质菌株；而上市有效时间短，易变色、变味、变质，含水量高，失水严重，易破碎，利润低的菌种均为劣质菌种。如香菇以大小适中、肉厚、色深、边缘内卷，柄短细为优良；双孢菇以色白、子实体大小适中，菌柄短，不易开伞等为优良；银耳以色白、开片好、蒂头小、松泡率高为优良等。

‘叁’ 细菌鉴定办法有哪些, 常见细菌的鉴定办法就可以~

一 淀粉水解试验
（一）实验原理
细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用,必须靠产生的胞外酶,如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解.胞外酶能分泌扩散到细胞外,将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸.这些小单位的物质能被细菌吸收和利用.水解过程可通过底物的变化来证明,如细菌水解淀粉的区域,用碘测定不再产生蓝色；水解明胶可观察到明胶被液化；脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH,其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色.
（二）实验方法
将淀粉培养基溶化后,冷至45℃左右,以无菌操作制成平板.
取18-24h的纯培养物点于平板上,每皿可点种3-5个菌株,适温培养2-4d,形成菌落后,在平板上滴加卢戈氏碘液,以铺满菌落周围为度,平板成蓝色.如果菌落周围有无色透明圈出现,说明淀粉已经被水解,实验为阳性,否则为阴性.透明圈的大小一般说明水解淀粉的能力.
（三）实验试剂的配制
肉汤蛋白胨琼脂成分：蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,琼脂17g,蒸馏水1000mL,pH7.2.
淀粉培养基制法：在肉汤蛋白胨琼脂中添加0.2％的可溶性淀粉,校正pH值至7.6,分装三角瓶,121℃ 20min灭菌备用.
卢戈氏(Lugol)碘液：碘片1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml,先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,混匀,定容.
二 糖发酵试验
(一)实验原理
单糖发酵是将葡萄糖,乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内,使其最终浓度为0.75-1％.并加入一定量酚红指示剂及小倒管,制成单糖发酵管,接种细菌经37℃培养18-24小时,若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄,若能分解甲酸有CO2和H2等气体形成,小倒管内则聚集有气泡；不分解,则指示剂不变色.
(二)实验材料
1．菌种：大肠杆菌,伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物.
2．培养基：葡萄糖发酵管,乳糖发酵管等.
(三)实验方法
1．将伤寒杆菌,大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内.
2．置37℃孵箱培养18-24小时.
3．观察结果：由于一些细菌能分解某种糖类产酸,所以培养基中pH下降到7.0以下,在酚红指示剂的显示下,培养基颜色由红变黄.产酸者以“+”表示,如果同时产生气体,则培养基中小倒管内有气泡出现,此乃产酸又产气,以“♁”表示,不分解,则指示剂不变色,用“-”表示.
(四)实验结果
伤寒杆菌 大肠杆菌
葡萄糖 + ♁
乳 糖 - ♁
(五)实验试剂的配制
1.单糖发酵管的制备： 成分：蛋白胨水培养基 100ml ,0.2%酚红 1ml ,所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g
制法：
（1）将上述成分溶化,混匀分装于内含有倒置小玻璃管的小试管中,每管约2ml,加塞.
（2）小倒管排气,灭菌（8-10磅,20-30分钟）,贮存备用.
用途：供单糖发酵试验用.
2.0.2%酚红配制法
酚红（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ,蒸馏水 92ml
将酚红入研钵徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨,再补足蒸馏水即成.若需长时间保存,可高压灭菌后贮存备用.
三 甲基红（M.R）试验
(一)实验原理
某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸,继而分解为甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基pH值降至4.5以下,加入甲基红指示剂呈红色,此为阳性反应；若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等,则培养基的酸碱度仍在pH 6.2以上,加入甲基红指示剂呈现黄色,为阴性反应.
(二)实验材料
1. 菌种：大肠杆菌,产气杆菌18-24h琼脂斜面培养物.
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基.
3. 试剂：甲基红试剂.
(三)实验方法
1. 分别将大肠杆菌,产气杆菌接种于两支葡萄糖蛋白胨水培养基中.
2. 置37℃培养2-3天取出,分别滴加甲基红试剂2-3滴,混匀,观察结果.
(四)实验结果
大肠杆菌：+,产气杆菌：-.
(五)实验试剂的配制
1．甲基红试剂的配制
甲基红 0.04g, 95%酒精 60ml , 蒸馏水 40ml .
先使甲基红溶解于酒精中,再加入蒸馏水,混合,摇匀即成.
2.葡萄糖蛋白胨水培养物
成分：蛋白胨5g 葡萄糖5g
制法：
（1）将上述成分溶解于蒸馏水中.
（2）调节pH至7.6,用滤纸过滤除渣.
（3）分装中试管,每管约3-4ml,灭菌后备用.
用途：供甲基红及V-P试验用.
四 产吲哚（indole）试验
(一)实验原理
某些细菌如大肠杆菌,变形杆菌等具有色氨酸酶,能分解蛋白胨水培养基中的色氨酸,产生靛基质（无色吲哚）,再与欧立希试剂（对二甲基氨基苯甲醛）反应,形成红色化合物—玫瑰吲哚,即为阳性反应.
(二)实验材料
1. 菌种：大肠杆菌,伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物.
2. 培养基：蛋白胨水培养基.
3. 试剂,欧立希（Ehrlich）试剂（对二甲基氨基苯甲醛）
(三)实验方法
1. 分别将大肠杆菌,伤寒杆菌接种于两支蛋白胨水培养基中.
2. 置37℃培养2-3天后,每管沿管壁各加欧立希试剂0.5-1ml于培养液面上,待1-2分钟后观察结果：在交界面出现玫瑰红色环即为吲哚试验阳性,无红色环即为阴性.
(四)实验结果
大肠杆菌：+ ；伤寒杆菌：- .
(五)实验试剂的配制
1.蛋白胨水培养基的制备
成分：蛋白胨10g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml
制法：
（1）先用少量蒸馏水将蛋白胨和氯化钠相混合溶解,再加足蒸馏水量.
（2）调节pH至7.6、用滤纸过滤.
（3）分装中试管,每管约3-4ml,加塞灭菌后备用.
2. 欧立希（Ehrlich）试剂的配制
对位二甲基氨基苯甲醛 4g
95%酒精 380ml
浓硫酸或浓盐酸80ml
三种成分混合即成,瓶口要严密,以免挥发.
五 硝酸盐还原试验
(一)硝酸盐还原试验原理：
硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中,硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨,再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中,硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体.能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物.但硝酸盐还原的过程因细菌不同而异,有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐,如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮,如假单胞菌等.硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸盐.
(二)培养基：
硝酸盐培养基.
(三)试剂：
甲液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100ml）；乙液（α-奈胺0.5g + 5mol/L醋酸100ml）.
(四)方法：
被检菌接种于硝酸盐培养基中,于35℃培养1～4d.将甲、乙液等量混合后（约0.1ml）加入培养基内,立即观察结果.
(五)结果：
出现红色为阳性.若加入试剂后无颜色反应,可能是：①硝酸盐没有被还原,试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果,这时应在试管内加入少许锌粉,如出现红色则表明试验确实为阴性.若仍不产生红色,表示试验为假阴性.
若要检查是否有氮气产生,可在培养基管内加一小倒管,如有气泡产生,表示有氮气生成.
(六)应用：
本试验在细菌鉴定中广泛应用.肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性.
(七)实验试剂的配制
硝酸盐液体培养基
蛋白胨5.0g,KNO3 0.2g, 蒸馏水1000 mL,pH7.4,每管分装4-5mL,121℃灭菌15-20min.
六 产氨实验（尿素分解实验）
(一)实验原理
某些细菌如变形杆菌,具有尿素分解酶,能分解尿素而产生氨,氨溶于水变成氢氧化铵,使培养基变碱而呈红色即为阳性.
(二) 实验材料
1. 菌种：变形杆菌,伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物.
2. 培养基：尿素培养基.
(三) 实验方法
1. 分别以斜面接种法将变形杆菌,伤寒杆菌接种于两支尿素斜面培养基上.
2. 置37℃培养18-24小时.
3. 取出观察结果,培养基变为红色,即尿素分解试验阳性,若不变色,即为尿素分解试验阴性.
(四) 实验结果
变形杆菌：+ ；伤寒杆菌：- .
(五) 实验试剂的配制
1.尿素培养基的制备
成分： 蛋白胨1g 、氯化钠5g、葡萄糖1g、蒸馏水900ml、琼脂15-20g 、0.1%酚红 12ml 、20%尿素水溶液（无菌）100ml .
制法：（1）除尿素、琼脂和酚红外,其余成分溶于水中,加热溶化,矫正pH至6.8-6.9.
（2）加入琼脂和酚红,115℃磅灭菌10min.
（3）冷却至60℃后加入无菌尿素溶液,摇匀.
（4）分装中试管（无菌）,每管3-4ml,置成斜面备用.
说明：（1）尿素不耐热,也不能久存,只能用滤器除菌.
2.无菌尿素溶液制备：称取尿素20g,混合于100ml蒸馏水中,充分摇匀,用G6滤菌器过滤除菌,以达到无菌的目的.
七 柠檬酸盐利用试验
(一)实验原理
本试验用于检测细菌利用柠檬酸的能力.细菌利用柠檬酸盐的能力不同,如各种肠细菌可利用柠檬酸为碳源,而大肠埃希氏菌则不利用柠檬酸盐.因此,能否利用柠檬酸盐是一项鉴别性特征.培养基中含有柠檬酸钠时,如将柠檬酸分解为CO2,则培养基中由于有游离钠离子呈碱性,使培养基中酚红指示剂（pH6.8-8.4,黄→红）由淡粉红色变为玫瑰红色以识别之.
(二)材料
柠檬酸钠 2g、K2HPO4 1g、NH3H2PO4 1g、NaCl 5g、MgSO4 0.2g、琼脂 1.5 2g、1%溴麝香草酚蓝(酒精溶液)或0.04%苯酚红 10ml、水 1000ml
将上述各成分加热溶解后,调PH6.8,然后加入酚红指示剂,摇匀,用脱脂棉过滤.制成后为黄绿色,分装试管.121℃灭菌20min后制成斜面.
(三) 实验内容
1.将试验菌在斜面上划线接种,适温培养3-5天.
2.若该菌能利用柠檬酸盐,则可在此斜面上生长并将培养基由原来的淡粉红色变为玫瑰红色,此为阳性；颜色不变者为阴性.
八 油脂水解试验
(一)原理
某些细菌能够分泌脂肪酶（胞外酶）,能将培养基中的脂肪水解为甘油和脂肪酸.所产生的脂肪酸,可通过预先加入油脂培养基中的中性红加以指示[指示范围pH6.8（红）～pH8.0（黄）].当细菌分解脂肪产生脂肪酸时,培养基中出现红色斑点.
(二)实验内容
1.将装有油脂培养基的锥形瓶置于沸水浴中融化,取出并充分振荡（使油脂均匀分布）,再倾入培养皿中,待凝固后制成平板.
2.翻转平板使底皿背面向上,用记号笔在其背面玻璃上划成两半.一半用于接种金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌,另一半用于接种实验菌大肠杆菌或产气肠杆菌.接种时用接种环取少量菌在平板两边各划线接种.
3.将接种完的平板倒置于37℃恒温箱中,培养24h.
4.观察结果时,注意观察平板上长菌的地方,如出现红色斑点,即说明脂肪已被水解,此为阳性反应.
（三）培养基配制
油脂培养基：蛋白胨10g,牛肉膏5g,氯化钠5g,香油或花生油10g,中性红（1.6%水溶液）约0.1ml,琼脂15-20g,蒸馏水1000mL,pH7.2,121℃灭菌20min.
九 接触酶试验
(一)实验原理
本试验用于检测细菌是否具有接触酶活性.接触酶又称为过氧化氢酶,是一种以正铁血红素作为辅基的酶,能将过氧化氢分解为水和氧.一般好氧细菌与兼性厌氧细菌（除某些链球菌、乳酸杆菌等外）都能产生接触酶,而厌氧细菌不产生接触酶,这是用以区别好氧和厌氧菌的方法之一.
(二)材料
牛肉膏、蛋白胨琼脂培养基,3%过氧化氢.
牛肉膏、蛋白胨琼脂培养基：牛肉膏 0.3g、蛋白胨 1g、氯化钠 0.5g、琼脂 2g、自来水 100mL、pH 7.0～7.2 、灭菌.
(三)实验内容
1.接种试验菌,适温下培养18-24小时.
2.将3%的过氧化氢滴于斜面菌苔上（或涂有菌苔的载玻片上）,静置1-3分钟后,如有气泡产生即为阳性.不产生气泡者为阴性.
(四) 应用
革兰阳性球菌中,葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶,而链球菌属为阴性,故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群.
十 革兰氏染色
(一)实验原理
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法.通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.
(二)实验方法
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是：
1.涂片固定.
2.草酸铵结晶紫染1分钟.
3.自来水冲洗.
4.加碘液覆盖涂面染约1分钟.
5.水洗,用吸水纸吸去水分.
6.加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分.
7.蕃红梁色液（稀）染2分钟后,自来水冲洗.干燥,镜检.
[染色的结果]：革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色.
(三)应用
其重要的临床意义在于：1.鉴别细菌 2.选择药物 3.与致病性有关：：革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素,两者的致病作用不同.

‘肆’ 形态染色相似的肠杆菌科细菌通过什么手段进行鉴别和区别

这个问题要回来答内容很长,肠杆菌科细菌鉴定专着早已经有了,看看这本书问题就解决了,你只给5分,我要化个把钟头打字不值,你悬赏50分,我明晚来详细讲给你听.
先经SS琼脂分离，种克氏双糖铁，18-24h后做OF和氧化酶试验，
发酵葡萄糖，氧化酶阴性的为肠杆菌科细菌
氧化葡萄糖，氧化酶阳性的为非发酵菌
发酵葡萄糖，氧化酶阳性的为孤菌科细
菌肠杆菌科细菌的鉴定方法：
1，取双糖斜面上的肠杆菌做玻片凝集试验，
A－G群沙门氏菌O多价诊断血清鉴别沙门氏菌．阳性者用沙门氏菌因子血清分型。
四种志贺氏多价和鲍氏多价诊断血清鉴别志贺氏并用志贺氏分型血清分型。
2生化反应分属：进行下述生化反应：
靛基质，甲基红，V－P，枸椽酸盐，流化氢，尿素酶，KCN，动力，明胶液化，赖氨酸脱羧酶，精氨酸双水解酶，鸟氨酸脱羧酶，苯丙氨脱氨酶，丙二酸钠，葡萄糖产气，乳糖，蕉糖，甘露醇，卫矛醇
水杨苷，侧金盏花醇，肌醇，山梨醇，阿拉佰糖，棉子糖，鼠李糖，
椐以上反应可将肠杆菌科的细菌分为14个属。
这14个属的细菌是
艾希氏菌属
志贺氏菌属
沙门氏菌属
枸椽酸盐杆菌菌属
克雷佰氏菌属
肠杆菌菌属
哈夫尼亚菌属
沙雷氏菌属
欧文氏菌属
爱德华氏菌属
变形杆菌菌属
摩根氏菌属
普罗菲登氏菌属
耶尔森氏菌属
各菌属中的细菌再按种的特性鉴别到种。
沙门氏菌的生化反应：
H2S 靛基质 Ph7.2尿素 KCN 赖氨酸脱羧酶 结果判定
+..... — .....—....... — .........+.......伤寒沙门氏
+.....—..... — ........—..........+ ..亚利桑那,沙门氏菌
—... — ..... — .......— ........ +.. 甲型副伤沙门氏菌

志贺氏菌属的生化特性
动力 H2S 苯丙氨酸 赖氨酸脱羧酶 枸椽酸盐 葡铵
..—..—..... — ........— ..........— ........—

符合上述反应时再作群生化反应：
分群 ...........5%乳糖 甘露醇 棉子糖 3%甘油 靛基质
A群痢疾志贺氏菌...—........ —........— .....—......—
B群福氏志贺氏菌 . —....... +........ + ..... — ....+/—
C群鲍氏志贺氏菌 . —.......+......... — .....+ ....+/—
D群宋内氏志贺氏菌 + ........+ ........ + .....D .....—

伤寒副伤寒沙门氏菌的抗原结构
副伤寒甲沙门氏菌 O：2 ， 12 H：a；1、5
副伤寒沙乙门氏菌 O：4[5]，12 H：b；1、2
副伤寒沙丙门氏菌 O：6，7 H：c；1、5
伤寒沙门氏菌 O：9，12[VI] H：d；/

实在没办法打表格,还是自己去查书本吧!习惯的肠道致病菌从含铁双糖培养基上结合OF,氧化酶,赖氨酸脱羧酶, 尿素,枸椽酸盐,半固体等把非发酵菌和孤菌排除后,作沙门氏 菌\志贺氏菌\大肠艾希氏菌\变形杆菌\克雷佰氏菌等作出初步鉴别后,用编码法作出诊断.请你购肠道菌编码培养基,附有方法说明书,用起来很方便.我在疾控中心工作,现在我们购进法国生产的全自动化细菌鉴定仪分离到纯培养后,把菌液滴入培养管内4-8小时就出结果,20余种主要生化反应通过电脑软件给你打出,如果有疑问还会提醒再作几个生化,把补充结果或血清试验结果输入后就准确打印出细菌名称。