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表面活性剂的定性鉴定方法有哪些

发布时间:2023-11-18 18:32:55

⑴ 简述蛋白质分离纯化与鉴定的主要方法有哪些其特点是什么

①浊点萃取法(CPE): 浊点萃取法(cloud point extraction,CPE)是近年来出现的一种新兴的液—液萃取技术,它不使用挥发性有机溶剂,不影响环境。它以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础,改变实验参数引发相分离,将疏水性物质与亲水性物质分离。目前该法已成功地应用于金属螯合物、生物大分子的分离与纯化及环境样品的前处理中。
CPE 法除了利用增溶作用外,还利用了表面活性剂另一个重要性质——浊点现象。溶液静置一段时间(或离心)后会形成两个透明的液相:一为表面活性剂相(约占总体积的5%);另一为水相(胶束浓度等于CMC)。外界条件(如温度)向相反方向变化,两相便消失,再次成为均一溶液。溶解在溶液中的疏水性物质如膜蛋白,与表面活性剂的疏水基团结合,被萃取进表面活性剂相,亲水性物质留在水相,这种利用浊点现象使样品中疏水性物质与亲水性物质分离的萃取方法就是浊点萃取。图1显示了由温度变化引发的这种相分离现象。温度的改变,引起水化层的破坏,增强了表面活性剂的疏水性。
②置换色谱法:置换色谱(displacement chromatography)作为一种非线性色谱技术,是指样品输入色谱柱后,用一种与固定相作用力极强的置换剂(displacer)通人色谱柱,去替代结合在固定相表面的溶质分子。样品在置换剂的推动下沿色谱柱前进,使样品中各组分按作用力强弱的次序,形成一系列前后相邻的谱带,并在置换剂的推动下流出色谱柱。置换色谱的分离行为与样品组分和置换剂在实验条件下的吸附等湿线有直接的联系。置换色谱要求样品组分及置换剂的吸附等湿线应为Langmuir 型,而且置换剂相对于被分离的各组分应有最强的吸附能力,其吸附等温线位于所有组分的吸附等温线的上方。

③亲和层析法(aflinity chromatography)是分离蛋白质的一种极为有效的方法,它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来,而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand)的分子能特异而非共价地结合。其基本原理:蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质,因此蛋白质的分离(Separation),提纯(Purification)和鉴定(Characterization)是生物化学中的重要的一部分,至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来,因此往往采取几种方法联合使用。
④电泳法:各种蛋白质在同一pH条件下,因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳,这是利用一种两性电解质作为载体,电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度,当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时,到达各自等电点的pH位置就停止,此法可用于分析和制备各种蛋白质。

⑵ 气相色谱定性分析中化学方法定性法具体内容是

在气相色谱分析中,当操作条件确定后,将一定量样品注入色谱柱,经过一定时间,样品中各组分在柱中被分离,经检测器后,就在记录仪上得到一张确定的色谱图。由谱图中每个组分峰的位置可进行定性分析,由每个色谱峰的峰高或峰面积可进行定量分析。
气相色谱的定性分析就是要确定色谱图中每个色谱峰究竟代表什么组分。因此必须了解每个色谱峰位置的表示方法及定性分析的方法。
常用的定性分析方法
(1)纯物质对照法 对组成不太复杂的样品,若欲确定色谱图中某一未知色谱峰所代表的组分,可选择一系列与未知物组分相接近的标准纯物质,依次进样,当某一纯物质的保留值(可为tr'、ris、Vg、I)与未知色谱峰的保留值相同时,即可初步确定此未知色谱峰所代表的组分。
严格的讲,仅在一根色谱柱上利用纯物质和未知组分的保留值相同,作为定性的依据是不完善的,因为在一根色谱柱上,可能有几种物质具有相同的保留值。如果可能,应在两根极性不同的色谱柱上进行验证,如在两根极性不同的柱上纯物质和未知组分的保留值皆相同,就可确证未知物与纯物质相同。
(2)利用保留值的经验规律定性 大量实验结果已证明,在一定柱温下,同系物的保留值对数与分子中的碳数成线性关系,此即为碳数规律,可表示为:
logtr'=an+b
式中 n——碳数;
a——直线斜率;
b——直线在logtr'轴上的截距。
另外同一族的具有相同碳数的异构体的保留值对数与其沸点成线性关系,此即为沸点规律,可表示为:
logVg=a1Tb+b1
式中 Tb——沸点;
a1——直线斜率;
b1——直线在logVg轴上的截距。
当已知样品为某一同系列,但没有纯样品对照时,可利用上述两个经验规律定性。
(3)利用其它方法定性
① 利用化学方法配合进行未知组分定性:有些带官能团的化合物能与一些试剂起化学反应从样品中除去,从比较处理前后两个样品的色谱图,就可以认出那些组分属于某族化合物。
还可在柱后把流出物通入有选择性的化学试剂中,利用显色、沉淀等现象对未知物进行定性。只要在柱后更换装有不同试剂的试管,就有可能对混合样中各组分进行鉴定。
② 结合仪器进行定性:气相色谱是比较高效的分离分析工具,但对复杂的混合物单靠色谱定性鉴定存在很大的困难,而红外光谱、质谱、核磁共振等仪器分析方法对化合物的定性鉴定是很有特征的,但对复杂混合物的分析有困难,因此如果用气相色谱法将复杂混合物分成单个或简单的组成,然后用质谱、光谱鉴定则有助于解决许多问题。早期用质谱、光谱定性都是把色谱分离后的有关馏分分别收集,再用质谱仪或光谱仪逐个鉴定,近年来发展了气相色谱与质谱或红外光谱在系统上直接联用的色谱-质谱仪和色谱-红外光谱仪,分离和定性同时进行,当色谱分析完毕时,质谱或光谱的谱图也就全部得到。

⑶ 通常有哪几种色谱定性分析方法

色谱定性分析是确定色谱图上每个色谱峰所代表的物质组分及性质的分析方法。通常有:①利用保留值(描述色谱峰位置或相应体积值,在一定的固定相和操作条件下,任何物质都有其确定的保留值)特性定性;②结合质谱、红外光谱、紫外光谱和核磁共振等其他物理化学方法定性;③利用预处理或柱上处理等化学反应或物理吸附原理定性;④利用鉴定器对某类化合物的选择性(如火焰光度检测器判别含硫、磷化合物;氮磷检测器判别含磷、氮化合物)定性等。

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