怎么查询蛋白纯化方法

Ⅰ 蛋白质纯度鉴定的方法有哪些

电泳,
蛋白质电泳 现在常用就是 SDS 聚丙乙烯酰胺凝胶电泳
特点
1）灵敏度高
2）测定快速、简便
3）干扰物质少
液相色谱
高效液相色谱是完全可以纯化蛋白质并且进行蛋白质纯度鉴定的
但建议还是使用蛋白质电泳 最主流 最有效的方法

Ⅱ 常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种

分离蛋白质混合物的各种方法主要是根据蛋白质在溶液中的以下性质：1）分子大小；2）溶解度；3）电荷；4）吸附性质；5）对其它分子的生物学亲和力等进行分离.
常见的分离提纯蛋白质的方法有：1、盐析与有机溶剂沉淀：在蛋白质溶液中加入大量中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质从溶液中沉淀析出,称为盐析.常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等.盐析时,溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好.凡能与水以任意比例混合的有机溶剂,如乙醇、甲醇、丙酮等,均可引起蛋白质沉淀.2、电泳法：蛋白质分子在高于或低于其pI的溶液中带净的负或正电荷,因此在电场中可以移动.电泳迁移率的大小主要取决于蛋白质分子所带电荷量以及分子大小.3、透析法：利用透析袋膜的超滤性质,可将大分子物质与小分子物质分离开.4、层析法：利用混合物中各组分理化性质的差异,在相互接触的两相（固定相与流动相）之间的分布不同而进行分离.主要有离子交换层析,凝胶层析,吸附层析及亲和层析等,其中凝胶层析可用于测定蛋白质的分子量.5、分子筛：又称凝胶过滤法,蛋白质溶液加于柱之顶部,任其往下渗漏,小分子蛋白质进入孔内,因而在柱中滞留时间较长,大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出,因此不同大小的蛋白质得以分离.6、超速离心：利用物质密度的不同,经超速离心后,分布于不同的液层而分离.超速离心也可用来测定蛋白质的分子量,蛋白质的分子量与其沉降系数S成正比.

Ⅲ 蛋白质纯度的测定方法有哪些

超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量.
含量测定方法很多：
凯氏定氮：灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2％,干扰少,费时8小时
双缩脲法（Biuret法）：灵敏度低1～20mg,中速20~30分钟
紫外吸收法：较为灵敏50～100mg,快速5～10分钟
Folin－酚试剂法（Lowry法）：灵敏度高 5mg,40～60分钟,操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法(Bradford法)：灵敏度最高1～5mg,15分钟,常用
分子量测定：
SDS-PAGE：还原SDS测定结果比较接IC-MS,价格适中,常用
高效凝胶过滤色谱：标准蛋白质和待测蛋白质形状一致时,准确高,差别越大越不准确
电喷雾离子化质谱：最准确
等电点测定：在不同pH条件下测量蛋白质的电泳迁移率,然后用迁移率对pH作图,对应于迁移率为零的pH就是蛋白质的等电点.

Ⅳ 纯化蛋白质的方法

纯化蛋白质的方法有：沉淀、电泳、透析稿轮、层析、超速离心等。

纯化蛋白质的注意事项：

1、为了避免蛋白质变性，不要对样品剧烈搅动和反复冻融。
2、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环。
3、为了避免蛋白质的氧化，将0.1～1mmol/LDTT（二硫苏糖醇）(或β-巯基乙醇）加入到缓冲溶液中。
4、为了避免重金属对目标蛋白的破坏兆雀，将1～10mmol/LEDTA金属螯合剂加入。
5、为了避免微生物生长，使用灭菌溶液。在纯化任何一种蛋白质的时候，均必须时刻对它的稳定性注意维护，使它的活性得到保护，需要牢记如下一些通用的注意事项。
6、尽可能置于冰上或者在冷库内进行操作。
7、蛋白浓度不要太稀。
8、除非是进行聚焦层。否则pH需要合适，防止所使用的缓冲溶液pH与pI相同，使蛋白质的沉淀得以避免。
9、使用蛋白酶抑制剂，避免蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，将DNA酶加入来使得DNA降解，避免DNA对蛋白的污染。