❶ 试述紫外分光光度法测定维生素b12含量及定性鉴别实验原理
紫外-可见分光光度计由5个部件组成:①辐射源。
必须具有稳定的、有足够输出功率的、能提供仪器使用波段的连续光谱,如钨灯、卤钨灯(波长范围350~2500纳米),氘灯或氢灯(180~460纳米),或可调谐染料激光光源等。
②单色器[1] 。
维生素B12又叫钴胺素,是唯一含金属元素的维生素。自然界中的维生素B12都是微生物合成的,高等动植物不能制造维生素B12。维生素B12是惟一的一种需要一种肠道分泌物(内源因子)帮助才能被吸收的维生素。
体内维生素B12的通常含量为2-5mg,大部分贮存于肝脏,约为体内总贮存量的80%,其余存在于肌肉、皮肤和骨组织,少量存在于肺、肾、脾。维生素B12最重要的功能在于它是骨髓造血所需的重要物质。
ELISA用血清来检测维生素B12,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。