⑴ 常用的沉淀法
常用的有下列几种方法:
等电点沉淀法不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2. 盐析法不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。
3. 有机溶剂沉淀法中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作,选择合适的有机溶剂浓度。
⑵ 常用蛋白质沉淀方法有哪些有哪些应用实例
一般最常见的是盐析沉淀,就是在蛋白质溶液中加入一定量的硫酸铵,蛋白质便会沉淀下来,不同蛋白沉淀所需要的硫酸铵浓度不一样,通过这个方法也可以对蛋白进行初步的纯化分离。再有就是等电沉淀,通过调节蛋白溶液的pH,使其刚好达到目标蛋白的等电点,这时候蛋白分子将不带有电荷,在相互碰撞聚集过程中沉淀下来。与之类似的有通过加沉淀剂或絮凝剂比如明矾之类的,也可以沉淀蛋白。另外还有就是亲和沉淀,利用生物分子亲和力,比如抗原抗体亲和、酶与底物亲和等性质,将配对的另一半固定在某些介质,比如小磁珠上,就能将溶液里面的目的蛋白抓住沉淀下来。
⑶ 蛋白质沉淀有哪几种方法哪些是可逆的沉淀反应
蛋白质沉淀 蛋白质在溶液中的稳定性是有条件的、相对的.如果条件发生改变,破坏了蛋白质溶液的稳定性,蛋白质分子则聚集成大的颗粒沉淀出来.
蛋白质溶液的稳定性与质点大小、电荷和水化作用有关,只要破坏这些条件,蛋白质自然会从溶液中沉淀出.
沉淀蛋白质有以下方法:
1、盐析法
2、有机溶剂沉淀法
3、重金属盐沉淀法
4、生物碱试剂和某些酸(三氯醋酸,磺基水杨酸,硝酸等)沉淀法
5、加热变性沉淀法
蛋白质变性:蛋白质的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象.蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时,次级键受到破坏,导致天然构象的破坏,使蛋白质的生物活性丧失.
蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation),变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀.
蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素,即颗粒表面的水化层和电荷.若无外加条件,不致互相凝集.然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂)蛋白质便容易凝集析出.
可以看出,如将蛋白质溶液pH调节到等电点,蛋白质分子呈等电状态,虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了.但是还有水化膜起保护作用,一般不致于发生凝聚作用,如果这时再加入某种脱水剂,除去蛋白质分子的水化膜,则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀;反之,若先使蛋白质脱水,然后再调节pH到等电点,也同样可使蛋白质沉淀析出.
⑷ 蛋白质沉淀了就变性了吗用什么方法能让它溶解且有活性
变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响,改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏,都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、乙醇、丙酮等;能使蛋白质变性的物理方法有加热、紫外线及X射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。
蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时,次级键受到破坏,导致天然构象的破坏,使蛋白质的生物活性丧失。如果变性条件剧烈持久,蛋白质的变性是不可逆的。如果变性条件不剧烈,这种变性作用是可逆的,说明蛋白质分子内部结构的变化不大。这时,如果除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性,这种现象称为蛋白质复性(renaturation)。例如胃蛋白酶加热至80~90℃时,失去溶解性,也无消化蛋白质的能力,如将温度再降低到37℃,则又可恢复溶解性和消化蛋白质的能力。
⑸ 常用的沉淀方法有哪些
沉淀法,是指由于表面扩散脱氧法速度慢,故实际生产中使用并不广泛,而常使用沉淀脱氧法。这种方法用磷、锂作为脱氧剂,脱氧反应在整个熔池内进行,所以反应速度快。缺点是脱氧剂可能会残留在合金液体中,影响合金的性能。
沉淀法,是包括制造固体催化剂的方法之一、水彩画的特殊技法和溶剂萃取的方法。沉淀法,在水处理中,是利用水中悬浮颗粒的可沉降性能,在重力作用下产生下沉作用,以达到固液分离的一种过程。
催化剂方法
把沉淀剂加入到盐溶液中反应后,将沉淀热处理得到纳米材料。其特点简单易行,但纯度低,颗粒半径大,适合制备氧化物。
特殊技法
.水彩画的特殊技法,水彩画颜色中有些颜色干后会产生沉淀,这就需要在上色时,水份 要充足,让颜色中的小颗粒流动后沉淀在纸面上。这种方法颜色淡容易出效果。如: 深蓝、赭石等颜色。
溶剂萃取法
介绍
最常用的是铅盐法,可以用于除去杂质,也可用于沉淀有效成分。
沉淀法通常是在溶液状态下将不同化学成分的物质混合,在混合液中加人适当的沉淀剂制备前驱体沉淀物,再将沉淀物进行干燥或锻烧,从而制得相应的粉体颗粒.
铅盐法是利用中性醋酸铅或醋酸铅在水或稀醇溶液中能与许多物质生成难溶的铅盐或络盐,而用于中药成分。中性醋酸铅可以沉淀有机酸、蛋白质、氨基酸、粘液质、鞣质、酸性皂甙、树脂、部分黄酮甙和花色甙等。碱式醋酸铅沉淀范围更广,除了述被中性醋酸铅沉淀的物质外,还可以沉淀某些中性皂甙、异黄酮甙、糖类和一些碱性较弱的生物碱等。通常将铅盐沉淀滤出,然后将沉淀悬于水或稀醇中,通硫化氢气体或硫酸钠等试剂进行脱铅,即可回收提取物。
铅盐沉淀法
铅盐沉淀法为分离某些中草药成分的经典方法之一。由于醋酸铅及碱式醋酸铅在水及醇溶液中,能与多种中草药成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀,故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。中性醋酸铅可与酸性物质或某些酚性物质结合成不溶性铅盐。因此,常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂甙、部分黄酮等。可与碱式醋酸铅产生不溶性铅盐或络合物的范围更广。通常将中草药的水或醇提取液先加入醋酸铅浓溶液,静置后滤出沉淀,并将沉淀洗液并入滤液,于滤液中加碱式醋酸铅饱和溶液至不发生沉淀为止,这样就可得到醋酸铅沉淀物、碱式醋酸铅沉淀物及母液三部分。然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中,通以硫化氢气体,使分解并转为不溶性硫化铅而沉淀。含铅盐母液亦须先如法脱铅处理,再浓缩精制。硫化氢脱铅比较彻底,但溶液中可能存有多余的硫化氢,必须先通人空气或二氧化碳让气泡考试,大收集整理带出多余的硫化氢气体,以免在处理溶液时参与化学反应。新生态的硫化铅多为胶体沉淀,能吸咐药液中的有效成分,要注意用溶剂处理收回。脱铅方法,也可用硫酸、磷酸、硫酸钠、磷酸钠等除铅,但硫酸铅、磷酸铅在水中仍有一定的溶解度,除铅不彻底。用阳离子交换树脂脱铅快而彻底,但要注意药液中某些有效成分也可能被交换上去,同时脱铅树脂再生也较困难。还应注意脱铅后溶液酸度增加,有时需中和后再处理溶液,有时可用新制备的氢氧化铅、氢氧化铝、氢氧化铜或碳酸铅、明矾等代替醋酸铅、碱式醋酸铅。例如在黄芩水煎液中加入明矾溶液,
黄芩甙就与铝盐络合生成难溶于水的络化物而与杂质分离,这种络化物经用水洗净就可直接供药用。
试剂沉淀法
例如在生物碱盐的溶液中,加入某些生物碱沉淀试剂(见生物碱性质下),则生物碱生成不溶性复盐而析出。水溶性生物碱难以用萃取法提取分出,常加入雷氏铵盐使生成生物碱雷氏盐沉淀析出。又如橙皮甙、芦丁、黄芩甙、甘草皂甙均易溶于碱性溶液,当加入酸后可使之沉淀析出。某些蛋白质溶液,可以变更溶液的值利用其在等电点时溶解度最小的性质而使之沉淀析出。此外,还可以用明胶、蛋白溶液沉淀鞣质;胆甾醇也常用以沉淀洋地黄皂甙等。可根据中草药有效成分和杂质的性质,适当选用。
⑹ 沉淀蛋白质的方法有哪些,各有和特点
沉淀蛋白质的方法有哪些?各有何特点?
答:(1)盐析法,此方法并未破坏蛋白质天然状态,沉淀出的蛋白质可不变性,所以盐析法是分离制备蛋白质或蛋白类生物制剂的常用方法。
(2)有机溶剂沉淀法,通过破坏蛋白质的水化膜而使蛋白质沉淀,此方法在常温下可使蛋白质变性,低温下可使变性速度减慢。
(3)重金属盐沉淀法,可与蛋白质结合形成不溶于水的蛋白质盐沉淀,引起蛋白质变性。临床用于救重金属盐中毒。
⑺ 常用的沉淀法有哪几种
等电点沉淀法和盐析
一、等电点沉淀法
等电点沉淀法是利用蛋白质在等电点时溶解度最低而各种蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。
在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。
等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小,从而有利于悬浮液的过滤。
二、盐析
盐析是指在蛋白质水溶液中加入中性盐,随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。中性盐是强电解质,溶解度又大,在蛋白质溶液中,一方面与蛋白质争夺水分子,破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜;另一方面又大量中和蛋白质颗粒上的电荷,从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出。
向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐,可以使蛋白质性质发生改变而凝聚,进而从溶液中析出,这种作用叫作变性,性质改变,是化学反应,无法复原。
把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热,反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物(胶体)。往锅内加入食盐颗粒,搅拌、静置,使高级脂肪酸钠与甘油、水分离,浮在液面。
(7)变性沉淀的方法有哪些扩展阅读:
蛋白质的变性
1、物理因素包括:加热、加压、搅拌、振荡、紫外线照射、X射线、超声波等
2、化学因素包括:强酸、强碱、重金属盐、三氯乙酸、乙醇、丙酮等。
3、在热、酸、碱、重金属盐、紫外线等作作用下,蛋白质会发生性质上的改变而凝结起来。这种凝结是不可逆的,不能再使它们恢复成原来的蛋白质.蛋白质的这种变化叫做变性。蛋白质变性之后,紫外吸收,化学活性以及粘度都会上升,变得容易水解,但溶解度会下降。
4、蛋白质变性后,就失去了原有的可溶性,也就失去了它们生理上的作用,因此蛋白质的变性凝固是个不可逆过程。