‘壹’ 临床上的生化指标主要有哪些
1.谷丙转氨酶、丙氨酸氨基转移酶（ALT） 谷丙转氨酶顾名思义是谷氨酸和丙酮酸之间的转氨酶，主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中。肝细胞或某些组织损伤或坏死，都会使血液中的谷丙转氨酶升高，临床上有很多疾病可引起转氨酶异常。 ALT升高的原因很多，包括急性软组织损伤及严重的创伤、剧烈运动及运动过度、感染性疾病如肺炎和结核等、心脏疾病如心力衰竭和心肌炎等、胆囊炎、应用一些药物等非肝脏因素。所以临床上生化检查到ALT的轻度升高不应只怀疑肝脏的问题，要综合考虑病情及全面分析化验单。 ALT主要大量存在于肝脏细胞的细胞浆中，其浓度高于血清的1000——3000倍。故肝细胞的轻度损伤就可使其升高，及其敏感，有资料报道1%的肝细胞损伤可造成ALT升高一倍。所以可以说明只要肝脏的轻微损伤就能引起ALT的变化，而因黄疸怀疑早期及中期的肝病，没有ALT的升高是不成立的。 ALT 的降低没有临床意义的。2.谷草转氨酶，门冬氨酸氨基转移酶（AST）AST存在于各组织细胞中，肌肉组织中含量很高，其中心肌细胞中的含量要明显高于肝脏细胞，所以AST伴随CK（肌酸激酶）的明显升高往往提示骨骼肌损伤或心脏疾病。另外，能引起ALT升高的非肝脏因素均能引起AST升高，近期大量食用高动物性脂肪也能引起ALT升高。 肝内的AST有两种同工酶，分别为存在于肝细胞胞浆内的(sAST)和存在于肝细胞线粒体内（mAST）。所以当肝脏轻度损伤时，肝细胞只是胞浆破裂，这时胞浆中的ALT和sAST都进入血液，引起血清中ALT及AST同时基本等比例升高。当肝脏严重损伤时，细胞线粒体破裂，mAST释放入血，引起血清中AST的数值为sAST与mAST的总和，故AST升高的比例要高于ALT，升高的比例越高，证明肝损伤的程度越重。3.总胆红素（T.Bili）总胆红素是直接胆红素和间接胆红素的总和，正常血清中的胆红素基本是来源于衰老的红细胞破碎后产生出来的血红蛋白衍化而成，在肝内经过葡萄糖醛酸化的叫做直接胆红素，未在肝内经过葡萄糖醛酸化的叫做间接胆红素。 总胆红素升高的原因包括溶血性疾病、微生物感染引起间接胆红素过多，来不及被肝脏转化为直接胆红素及胆汁而引起单纯因间胆升高而导致直胆升高。肝脏发生病变时，胆红素不能转化为胆汁或因为肝细胞肿胀而导致肝内胆汁淤积引起直胆和间胆同时升高造成肝细胞性黄疸。发生胆囊炎、总胆管阻塞时，因胆汁排入十二指肠障碍而引起阻塞性黄疸。 因犬猫的被毛长度及皮肤颜色不同，所以一般通过眼结膜、瞬膜和口腔粘膜的颜色来判断。一般30mmol/L以下的黄疸不宜用肉眼察觉，被称为隐形黄疸。在隐形黄疸时，可通过尿液化验来判断是否怀疑黄疸。 肝细胞性黄疸直胆和间胆都升高。当怀疑发生肝细胞性黄疸时，要结合ALT、AST、ALP指标及各项临床症状做出诊断。要知道犬猫的肝脏疾病在一半以上的病例中是不引起黄疸的。总胆红素数值的高低在肝细胞性黄疸时一定程度上是与肝病的程度成正比，当总胆红素数值显示为重度黄疸时，如果ALT、AST的数值升高不多时称为胆酶分离。胆酶分离的原因是肝细胞严重受损，间胆不能被转化，胆汁大量在肝内淤积，而具有活性的肝细胞数量减少，受损后释放的酶也相应减少，往往提示极严重的肝损伤、肝硬化中晚期、肝衰期。 梗阻性黄疸是指肝细胞具备将建胆红素结合为直接胆红素及产生胆汁的能力，但胆汁的排出受阻。所以直胆升高，间胆正常或轻度升高。胆石、寄生虫、肝脏肿瘤、胆囊结石、一线肿瘤造成的胆管阻塞及压迫是主要原因。此时，ALT一般为轻度升高，AST轻度升高或正常，ALP明显升高。
总胆红素降低一般提示为缺铁性贫血、缺锌或仪器误差。4.乳酸脱氢酶(LDH)乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶几乎存在于所有组织细胞的细胞质内，催化乳酸和丙酮酸的相互转化。在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的氢，形成乳酸。LDH由5种同工酶组成，同工酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协助诊断疾病。由于LDH几乎存在于所有体细胞中，而且在机体组织中的活性普遍很高，所以血清中LDH的增高对任何单一组织或器官都是非特异性的，无明确诊断意义。在国内兽医临床上还未开展利用电泳法或酶联免疫法测定同工酶，故不进一步介绍。 5.碱性磷酸酶(ALP)碱性磷酸酶是由6种同工酶组成，广泛存在于机体各组织中，肝脏、骨骼、肾脏、肠道、胎盘及某些肿瘤组织内都有存在，但主要存在于肝脏和骨骼中。 在犬猫幼龄阶段的骨骼发育期、骨折的愈合期、妊娠期均可造成ALP的轻度生理性升高。骨软化症、佝偻症、骨质疏松、骨肿瘤、肝脓肿、肝硬化、肝肿瘤、甲亢时ALP轻到中度升高。 肝外胆道阻塞、胆囊疾病、胆汁淤积型肝炎时肝细胞过度制造ALP,经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起血清中的碱性磷酸酶明显高。 在犬猫临床上，ALP的升高所提示的临床意义不完全相同。在犬提示有肝脏疾病、库兴氏综合征、糖皮质激素或抗癫痫药物治疗。在猫提示糖尿病、胆管炎、胆管性肝炎、肝脂变、甲亢。在犬的甲亢时，ALP有可能轻度下降。 6.肌酸激酶（CK）CK可在机体内催化肌酸和磷酸肌酸之间的相互转化，广发存在与心肌和骨骼肌中，脑、胃肠道、前列腺、肺等组织中也有分布。 CK有三种同工酶。人医用CK-MB的浓度来诊断心肌疾病，但在兽医临床上还没开展。在兽医临床上CK的明显升高主要提示心肌、骨骼肌或脑组织的病变。 7.r-谷氨酰胺转肽酶（GGT） GGT是将其他氨基酸转化为谷氨酸的酶，广泛分布在机体的各组织中。肾脏、胰腺、肝脏中均匀较多的分布。GGT的轻中度升高提示各种情况的肝炎、脂肪肝、胰腺炎（犬）、胰腺癌、糖皮质激素或巴比妥类药物的使用。GGT重度升高提示胆囊炎、胆道阻塞、胆汁淤积性肝炎引起的阻塞性黄疸，原发性和继发性肝癌。GGT高于正常值4倍以上的要考虑肝癌或严重的肝胆感染，尤其在犬。8.总蛋白(TP) TP是由肝脏产生的白蛋白和含量极少的纤维蛋白原、αβ球蛋白、凝血酶原、凝血因子，浆细胞产生的r球蛋白共同组成的复杂混合物。 TP的升高常见于各种原因的脱水、中毒、休克、慢性感染、淋巴肉瘤、浆细胞瘤、多发性骨髓瘤等。 9.白蛋白（ALB） 白蛋白是机体维持血浆胶体渗透压的主要力量，它能转运胆红素、长链脂肪酸、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇和部分药物及重金属离子，还具有一定的保护球蛋白的功能。ALB升高主要见于急性重度脱水和休克。但在临床上并不常见，因为ALB的升高引起血浆胶体渗透压升高，扩容的血浆使ALB的数值降为正常。 ALB的降低分为两种原因。第一为合成不足，长期饥饿、营养不良、肠道吸收不良等原因
引起的原料不足及严重的肝脏疾病导致的哦工厂减产或停工；第二为流失过度，肾小球病变、肾病、蛋白丢失性肠病、大量炎症性胸腹腔渗出液均能导致ALB的丢失性降低。 10.球蛋白（GLOB）机体的球蛋白包括α球蛋白、β球蛋白和r球蛋白，其中以r球蛋白为主，另外两种球蛋白的含量极低。因为纤维蛋白原、凝血酶原和凝血因子所占的比例太小，所以兽医临床上血清球蛋白的数值是由TP减去ALB所得。 球蛋白的升高在犬常见于全身性感染，如全身性脓皮症、艾利希氏体、心丝虫、蠕形螨、慢性跳骚过敏等；还可见于淋巴肉瘤、浆细胞瘤、多发性骨髓瘤等巨蛋白血症及自身免疫病。在猫较为常见，机体携带非自限性病毒时均能引起球蛋白不同程度的升高。
‘贰’ 常用生化检测项目分析方法举例及参数设置
常用生化检测项目分析方法举例及参数设置
常用生化检测项目有哪些你知道吗?你对常用生化检测项目了解吗?下面是我为大家带来的关于常用生化检测项目分析方法举例及参数设置的知识，欢迎阅读。
一、常用生化检测项目
1.终点法检测常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、总胆汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法)、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、镁(二甲苯胺蓝法)等。以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2.固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3.连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4.透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置
分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。各种测定项目的分析参数(analysisparamete)大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用;目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍
(一)必选分析参数
这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1.试验名称 试验名称(test code)是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2.方法类型(也称反应模式) 方法类型(assay)有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
3.反应温度 一般有30℃、37℃可供选择，通常固定为37℃。
4.主波长 主波长(primary wavelength)是指定一个与被测物质反应产物的光吸收有关的波长。
5.次波长 次波长(secondary wavelength)是在使用双波长时，要指定一个与主波长、干扰物质光吸收有关的波长。
6.反应方向 反应方向(response direction)有正向反应和负向反应两种，吸光度增加为正向反应，吸光度下降为负向反应。
7.样品量 样品量(sampling volum)一般是2μl～35μl，以0.1μl步进，个别分析仪最少能达到1.6μl。可设置常量、减量和增量。
8. 第一试剂量 第一试剂量(first regengt volum)一般是20～300μl，以1μl步进。
9. 第二试剂量 第二试剂量(second regengt volum)一般也是20～300μl，以1μl步进。
10.总反应容量 总反应容量(total reacting volum)在不同的分析仪有一个不同的规定范围，一般是180～350μl，个别仪器能减少至120μl。总反应容量太少无法进行吸光度测定。
11.孵育时间 孵育时间(incubate time)在终点法是样品与试剂混匀开始至反应终点为止的时间，在两点法是第一个吸光度选择点开始至第二个吸光度选择点为止的时间。
12.延迟时间 延迟时间(delay time)在连续监测法中样品与反应试剂(第二试剂)混匀开始至连续监测期第一个吸光度选择点之间的时间。
13.连续监测时间 连续监测时间(continuous monitoring time)在延迟时间之后即开始，一般为60～120s，不少于4个吸光度检测点(3个吸光度变化值)。
14.校准液个数及浓度 校准曲线线性好并通过坐标零点的，可采用一个校准液(calibrator);线性好但不通过坐标零点，应使用两个校准液;对于校准曲线呈非线性者，必须使用两个以上校准液。每一个校准液都要有一个合适的浓度。
15.校准K值或理论K值 通过校准得到的K值为校准K值(calibrate coefficient)或由计算得出的K值为理论K值。
16.线性范围 即方法的线性范围(linearity range)，超过此范围应增加样品量或减少样品量重测。与试剂/样品比值有关。
17.小数点位数 检测结果的小数点位数(decimal point digit)。
(二)备选分析参数
这类分析参数与检测结果的准确性有关，一般来说不设置这类分析参数，分析仪也能检测出结果，但若样品中待测物浓度太高等，检测结果可能不准确。
1.样品预稀释 设置样品量、稀释剂量和稀释后样品量三个数值，便可在分析前自动对样品进行高倍稀释。
2.底物耗尽值 底物耗尽值(substrate exhaust limit)在负反应的酶活性测定中，可设置此参数，以规定一个吸光度下降限。若低于此限时底物已太少，不足以维持零级反应而导致检测结果不准确。
3.前区检查 免疫比浊法中应用，以判断是否有抗原过剩。将终点法最后两个吸光度值的差别(ΔA)设置一个限值，如果后一点的吸光度比前一点低，表示已有抗原过剩，应稀释样品后重测。
4.试剂空白吸光度范围 超过此设定范围表示试剂已变质，应更换合格试剂。
5.试剂空白速率 连续监测法中使用，是试剂本身在监测过程中没有化学反应时的变化速率。
6.方法学补偿系数 用于校准不同分析方法间测定结果的一致性，有斜率和截距两个参数。
7.参考值范围 对超过此范围的测定结果，仪器会打印出提示。
(三)某些参数的特殊意义
1.最小样品量 最小样品量是指分析仪进样针能在规定的误差范围内吸取的最小样品量。一般分析仪的最小样品量是2μl，目前也有小至1.6μl的。在样品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的情况下往往需采用分析仪的最小样品量作为减量参数，从而使分析仪检测范围(与线性范围不同)的上限得以扩大。
2.最大试剂量 方法灵敏度很高而线性上限低的检测项目，如血清白蛋白的溴甲酚氯法测定，以往手工法操作时样品量10μl，试剂量4ml，这样试剂量/样品量比例(R/S)为200，线性上限则为60g/L。此法移植到分析仪上后，R/S却很难达到200，致使线性上限变低。因此对这类检测项目最大试剂量非常重要。
3.弹性速率 在酶活性测定中，当酶活性太高，在连续监测期中已不呈线性反应时，有些仪器具有弹性速率(flexrate)功能，能自动选择反应曲线上连续监测期中仍呈线性的吸光度数据计算结果，使酶活性测定的线性范围得以扩大。如AST可从1000U/L扩展至4000U/L，从而减少稀释及重测次数、降低成本。
4.试剂空白速率 当样品中存在胆红素时，胆红素对碱性苦味酸速率法或两点法测定肌酐有负干扰。因为胆红素在肌酐检测的波长505nm有较高光吸收，而且胆红素在碱性环境中可被氧化转变，因而在肌酐反应过程中胆红素的光吸收呈下降趋势。若在加入第一试剂后一段时间内设置试剂空白速率，因为此段中苦味酸尚未与肌酐反应，而胆红素在第一试剂的碱性环境中已同样被氧化转变，因而以第二试剂加入后的速率变化，减去试剂空白速率变化，便可消除胆红素的负干扰，见图7-8。
二、单波长和双波长方式
(一)概念
采用一个波长检测物质的光吸收强度的`方式称为单波长(mono-wavelength)方式。当反应液中含有一种组分，或在混合反应液中待测组分的吸收峰与其它共存物质的吸收波长无重叠时，可以选用。在吸光度检测中，使用一个主波长和一个次波长的称双波长方式。当反应液中存在干扰物的较大吸收、从而影响测定结果的准确性时，采用双波长方式更好。
(二)双波长的作用
双波长(di-wavelength)测定优点是①消除噪音干扰;②减少杂散光影响;③减少样品本身光吸收的干扰。从光源，到比色杯、单色器、检测器的整个光路系统中，均存在着随时间发生变化的不稳定的检测信号，即噪音，而双波长检测是同时进行的，两种波长检测产生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干扰。当样品中存在非化学反应的干扰物如甘油三酯、血红蛋白、胆红素等时，会产生非特异性的光吸收，而干扰测定结果的准确性。采用双波长方式测定可以部分消除这类干扰，提高检测的准确性。
(三)次波长的确定方法
当被测物的主波长确定之后，再选择次波长。如根据甘油三酯等干扰物吸收光谱特征，选择次波长，使干扰物在主、次波长处有尽可能相同的光吸收值，而被测物在主、次波长处的光吸收值应有较大的差异。一般来说，次波长应大于主波长100nm。以主波长与次波长吸光度差来计算结果。
(四)双波长的具体应用
对于某些反应速度快且无法设置为两点终点法的分析项目，尤其是单试剂分析中，可以利用双波长的方式来部分消除样品本身的光吸收干扰。目前用单试剂法测定的项目应用双波长的为血清总蛋白(双缩脲法)主波长500nm，次波长576nm;血清白蛋白(溴甲酚氯法)主、次波长分别为600和700nm;钙(偶氮砷Ⅲ法)主、次波长分别为 660、770nm;磷(紫外比色法)主、次波长为340、405nm，镁(二甲苯胺蓝法)主、次波长为505和 600nm。
三、单试剂和双试剂方式
反应过程中只加一次试剂称单试剂方式，加两次试剂便为双试剂方式。目前的生化分析仪大多可用双试剂方式分析，其优点是：①可提高试剂的稳定性，多数双试剂混合成单一工作试剂时，其稳定时间缩短;②能设置两点终点法，来消除来自样品本身的光吸收干扰;③在某些项目检测时能消除非特异性化学反应的干扰。如血清ALT测定，血清中的内源性丙酮酸及其它酮酸也可与试剂中的指示酶(乳酸脱氢酶)起反应，使结果偏高。若先加入缺乏α-酮戊二酸的第一试剂，使其它酮酸与指示酶反应之后再加入含有α-酮戊二酸的第二试剂，启动真正的ALT酶促反应生成丙酮酸，而丙酮酸与乳酸脱氢酶的反应消耗的NAD+能真正反映ALT的活性，从而消除以上副反应的影响。
四、测定过程的自动监测
各种自动生化分析仪或多或少都具有对测定过程进行各种监测的功能，以便在没有人"监督"化学反应的情况下提高检测的准确性。高档分析仪的监测功能更强。
1.试剂空白监测 每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示着该试剂的变质：如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因酚被氧化为醌而变为红色;碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或硝基苯胺而变黄;有些试剂久置后变浑浊。这些情况均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应检测项目，其试剂在放置过程中空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降等。
试剂空白的测定方法有两种：①每瓶试剂在使用前通过对试剂空白校准来确定试剂空白吸光度，这种方式适用于先取样品后加试剂的分析仪。②每个样品测定前均检测试剂空白吸光度，适用于先加试剂后取样品的分析仪。
2.试剂空白变化速率监测 一些酶试剂在反应温度下不稳定，其空白吸光度可随着时间逐渐发生变化，这种变化的主要原因与工具酶或辅酶的纯度有关，且因试剂的组成和生产厂家的不同而不同。这种变化会影响测定结果的准确性，一般使结果偏高。如果设置此项监测，分析仪在结果计算时会自动减去试剂空白变化速率。在以监测NAD(P)H减少为指示反应的酶活性测定中，空白速率可监测并消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降;在色素原为底物的酶活性测定中，空白速率可监测并消除底物自身分解造成的吸光度升高。有关空白速率监测在胆红素对碱性苦味酸速率法测定肌酐负干扰消除中的作用，已如前述。
3.样品信息监测 由于样品的溶血、脂浊、黄疸会对测定结果产生非化学反应的干扰。根据溶血、脂浊、黄疸的光谱吸收特性，用双波长或多波长检测其性质和程度，一般是测定样品在600nm/570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值的大小来分别判断样品溶血、脂浊和黄疸程度。然后在结果计算时自动减去这部分干扰，这将有利于提高分析结果的可靠性。
4.结果可靠性监测
(1)终点监测：终点法测定要判断所选的测光点是否到达终点或平衡点。一些分析仪在所选终点后再选一个测光点，比较这两点吸光度的差异来判断反应是否到达终点。
(2)线性期监测：连续监测法选择时间-吸光度反应曲线上的线性期来计算酶活性或被测物浓度，因此仪器要确定此连续监测期是否呈线性。其监测方法为①将连续监测到的各吸光度值进行线性回归，计算出各点的方差，根据方差值的大小来判断是否呈线性;②取连续监测期开始若干点的变化速率与连续监测期最后若干点的变化速率进行比较，来判断是否为线性期。
5.底物消耗的监测 在连续监测法测定酶活性时，如果在监测期内吸光度上升或下降超过其底物耗尽值，则说明该样品酶活性非常高，底物将被耗尽，监测期的吸光度将偏离线性，使测定结果不可靠。此时不打印结果或打印结果同时也打印出底物耗尽提示，该样品应稀释一定的倍数重新测定。此监测对于采用负反应分析酶活性的方法甚为重要。见图7-9
6.方法线性范围监测 每种待测物分析都有一个可测定的浓度或活性范围，样品结果若超过此范围，分析仪将显示测定结果超过线性范围的提示，多数分析仪会自动将样品减量或增量重新测定。
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