药敏试验有哪些方法

❶ 如何进行抗生素药敏试验

你好！
药敏试验
药敏试验根据美国临床标准委员会（NCCLS）推荐的K-B琼脂法进行，药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片，试验所选择药物必须包括下列抗生素：氨苄西林（AMP），阿莫西林/克拉维酸（AMC），头孢噻吩（CFT），头孢噻肟（CTX），庆大霉素（GEN），萘啶酸（NAL），环丙沙星（CIP），四环素（TBT），利福平（RFA），复方新诺明（SMZ）。药敏结果判定标准按照NCCLs手册2005版。
1. 操作方法：
（1）将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。
（2）用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液。用棉拭子涂布整个M-H培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
（3）待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴就不可再拿起。每个平板贴5张纸片，每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。在菌接种后15分钟内贴完纸片。
（4）将平板反转，孵育18～24小时后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录（附表6）。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环，磺胺药在抑菌环内出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。
（5）每次药敏试验必须用ATCC 25922大肠杆菌做质控。只有当质控菌株的抑菌圈直径在允许范围内测试菌株的结果才可以报告。ATCC 25922的结果必须与测试菌株同时记录和报告在附表6中。
0.5麦氏比浊管配制方法：
0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml
0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml
将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。

2. 注意事项：
(1) 制备MH琼脂平板应用直径90mm平皿，在水平的实验台上倾注。琼脂厚为4±0.5mm（约25-30ml培养基），琼脂凝固后塑料包装放4℃保存，在5日内用完，使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。倾注平皿前应用pH计测pH值是否正确(pH应为7.3)。pH过低会导致氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活力增强。
(2) 药敏纸片长期储存应于－20℃，日常使用的小量纸片可放在4℃，但应至于含干燥剂的密封容器内。使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开，用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。 过期纸片不能使用, 应弃去。
(3) 不稳定药物如亚胺培南, 头孢克洛, 克拉维酸复合药等, 应冷冻保存, 最好在-40 ℃以下。
(4) 保证质控菌株不变异的简便方法，将新得到的冻干菌株接种含血的M-H平板复活。然后每株细菌接种10支高层琼脂管，放置冰箱保存。每月取出一支，传出细菌供常规用。待用剩至最后一支，可传种在M-H平板上，再接种一批高层琼脂管备用。如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。
3.质量控制
质量控制方法 是用与常规实验相同的操作方法，测定质控菌株的抑菌环。应使用新鲜传代的菌种。接种菌液的涂布方法等均同常规操作，测定的抗菌素种类也应与常规测定的种类相同。

❷ 药敏试验怎么做 药敏试验应该如何做

1、取患者的分泌物或者血液做细菌培养，看哪种细菌感染，并且对哪种药物敏感。根据药敏结果选择敏感抗生素，达到最理想的治疗效果，同时也不会因为盲目使用抗生素造成机体耐药的现象。

2、药敏试验在临床上常常会用到，从标本的采集、细菌培养到药物敏感圆迹毕试验，要求都是比较严格的，这个过程中一定要严格的注意外环境，防止受到污染影响结果橘芹。药敏试验主要用于反复感染治疗之后没有好转，甚至症状没有减轻，最终选择州瞎最敏感的药物杀灭细菌，达到临床的治疗效果。

❸ 说下各种需要药敏试验的药物、浓度以及皮试配置方法

确实各个地方的标准不一样，即使同一个科室每个人也各自为政，一人一个配法。就拿头孢类药物皮试说吧，有的不需要做，有的强调凡注射类药物必须都做皮试。皮试液浓度从100ug_1200ug/ml不等，稀释的次数在三次到四次。本医院需做皮试的药物有青霉素类、头孢类、破抗、链霉素、造影剂、细胞色素C、狂犬病免疫血清、胸腺肽等药物。个人的配制方法是：青霉素类和头孢类配制差不多，首次3.5ml—5ml，然后按基础护理学上的配制方法稀释三次，最后的浓度200-400u/ml或125ug-250ug/ml。破抗、链霉素、造影剂等按书上的做。后两种按说明书做。浓度稍微偏高一点没关系，因为实际上做皮试时注入量大多不足0.1ml。此根据杂志上关于皮试液浓度的论文假阴性和假阳性率的判断，是

❹ 需氧菌及兼性厌氧菌对抗菌药物的体外敏感试验的方法有哪些

需氧菌唤茄及兼性厌氧菌对抗菌药物的敏感试验分为两类，即对单独抗菌药物的敏感试验和卜肢对抗菌药物的联合药敏试验。前者的方法主要有纸片琼脂扩散法、肉汤稀释法、琼脂稀释法、E试验等。联合药敏试验的方法主要有单药纸片搭桥法和和弊察联合药敏稀释法，即棋盘法。

❺ 药敏试验简介

目录

• 1 概述
• 2 药敏试验分类
• 2.1 纸片扩散法
• 2.2 稀释法
• 2.2.1 琼脂稀释法
• 2.2.2 肉汤稀释法
• 2.3 抗生素浓度梯度法
• 2.4 自动化仪器法
• 3 实验步骤
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 药敏试纸
• 3.1.2 细菌
• 3.1.3 仪器
• 3.2 实验准备
• 3.3 实验操作方法
• 3.3.1 药敏片法
• 3.3.2 牛津杯法
• 3.3.3 打孔法
• 3.4 结果观察
• 3.5 判定标准
• 3.6 影响药敏结果的因素
• 3.6.1 培养基
• 3.6.2 细菌接种量
• 3.6.3 药物浓度
• 3.6.4 培养时间
• 4 药敏试验的应用

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1 概述

药敏试验简称药物敏感试验（或耐药试验）。旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感（或耐受）程度，以指导临床合理选用抗生素药物的微生物学试验。一种抗生素如果以很小的剂量便可抑制、杀灭致病菌，则称该种致病菌对该抗生素“敏感”。反之，则称为“不敏感”或“耐药”。为了解致病菌对哪种抗菌素敏感，以合理用药，减少盲目性，往往应进行药物敏感试验。其大致方法是：从病人的感染部位采取含致病菌的标本，接种在适当的培养基上，于一定条件下培养；同时将分别沾有一定量各种抗生素的纸片贴在培养基表面（或用不锈钢圈，内放定量抗生素溶液），培养一定时间后观察结果。由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现不同大小的抑制病粗亏菌生长而形成的“空圈”，称为抑菌圈。抑菌圈大小与致病菌对各种抗生素的敏感程度成正比关系。于是可以根据试验结果有针对性地选用抗生素。近年已有自动化的药物敏感试验仪器问世，使试验更加迅速、准确。目前滥用抗生素，致使抗药菌增加，甚至因长期大量使用广谱抗生素，杀伤体内正常微生物，失去微生物的相互制约作用，从而使一些少见的或一般情况下的非致病菌大量繁殖，引起所谓“二次感染”的情况屡有发生，给治疗造成人为的困难。因此，提倡使用药物敏感试验，坚持合理用药十分重要。

2 药物敏感试验分类

2.1 纸片扩散法

该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。

2.2 稀释法

稀释法药物敏感试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和燃凳薯耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.

2.2.1 琼脂稀释法

首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。再接种待测菌株，然后是结果判读。

2.2.2 肉汤稀释法

2.3 抗生素浓度梯度法

2.4 自动化仪器法

3 实验步骤

3.1 实验材料

普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药物敏感试验可选择不同皮者的培养基，如做大肠杆菌的药物敏感试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。

3.1.1 药敏试纸

购买或自制（详见实验准备）

3.1.2 细菌

待做药物敏感试验的细菌

3.1.3 仪器

接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头

3.2 实验准备

药敏片的准备：购买或自制

制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅1520分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。

抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期36个月。

药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。此稀释液即为用于做药物敏感试验的药液。

3.3 实验操作方法

3.3.1 药敏片法

在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密）

将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。

将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

3.3.2 牛津杯法

在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密。）

以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。每个平板可放46支小管。待分钟后，分别向各小管中滴加一定数量的各种药液，勿使其外溢。置37℃培养818小时，观察结果。

将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

3.3.3 打孔法

该法较简单，成本低，易操作，比较适用于商品药物的检测。

在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密。）

以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。

加样：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。

将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

3.4 结果观察

在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。

3.5 判定标准

药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。

表1药物敏感实验判定标准

抑菌圈直径（毫米） 敏感度

20以上 极敏

15~20 高敏

10~14 中敏

10以下 低敏

0 不敏

药物敏感实验判定标准参考表

1，多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。

3.6 影响药敏结果的因素

3.6.1 培养基

应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适（约56mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基1820ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺药和TMP的活性。

3.6.2 细菌接种量

细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。

3.6.3 药物浓度

药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。

3.6.4 培养时间

一般培养温度和时间为37℃ 818小时，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。

4 药物敏感试验的应用

❻ 做微生物实验，测抑菌圈大小，细菌培养超过24小时要不要紧啊

作为生物实验测抑菌圈大小细菌培养耐租超过24小时要不要紧呢？这样根据他们所培养的时间，有可能他们是需要三天，72个小时，只腊亩返要他们时间得轮饥体的话，他们才能出现这种情况

❼ 怎么做药敏实验

药敏试验根据美国临床标准委员会（NCCLS）推荐的K-B琼脂法进行，药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片，试验所选择药物必须包括下列抗生素：氨苄西林（AMP），阿莫西林/克拉维酸（AMC），头孢噻吩（CFT），头孢噻肟（CTX），庆大霉素（GEN），萘啶酸（NAL），环丙沙星（CIP），四环素（TBT），利福平（RFA），复方新诺明（SMZ）。药敏结果判定标准按照NCCLs手册2005版。
1. 操作方法：
（1）将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。
（2）用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液。用棉拭子涂布整个M-H培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
（3）待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴就不可再拿起。每个平板贴5张纸片，每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。在菌接种后15分钟内贴完纸片。
（4）将平板反转，孵育18～24小时后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录（附表6）。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环，磺胺药在抑菌环内出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。
（5）每次药敏试验必须用ATCC 25922大肠杆菌做质控。只有当质控菌株的抑菌圈直径在允许范围内测试菌株的结果才可以报告。ATCC 25922的结果必须与测试菌株同时记录和报告在附表6中。
0.5麦氏比浊管配制方法：
0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml
0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml
将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。

2. 注意事项：
(1) 制备MH琼脂平板应用直径90mm平皿，在水平的实验台上倾注。琼脂厚为4±0.5mm（约25-30ml培养基），琼脂凝固后塑料包装放4℃保存，在5 日内用完，使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。倾注平皿前应用pH计测pH值是否正确(pH应为7.3)。pH过低会导致氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活力增强。
(2) 药敏纸片长期储存应于－20℃，日常使用的小量纸片可放在4℃，但应至于含干燥剂的密封容器内。使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开，用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。 过期纸片不能使用, 应弃去。
(3) 不稳定药物如亚胺培南, 头孢克洛, 克拉维酸复合药等, 应冷冻保存, 最好在-40 ℃以下。
(4) 保证质控菌株不变异的简便方法，将新得到的冻干菌株接种含血的M-H平板复活。然后每株细菌接种10支高层琼脂管，放置冰箱保存。每月取出一支，传出细菌供常规用。待用剩至最后一支，可传种在M-H平板上，再接种一批高层琼脂管备用。如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。
3.质量控制
质量控制方法 是用与常规实验相同的操作方法，测定质控菌株的抑菌环。应使用新鲜传代的菌种。接种菌液的涂布方法等均同常规操作，测定的抗菌素种类也应与常规测定的种类相同。

❽ 药敏试验的具体操作方法

1药敏实验操作步骤:在超洁净工作台内，先将灭菌好的培养基做好标记，无菌取病料（即：肝脏、心脏组织）一小块，轻轻在灭菌的培养基上涂布几下（不要突破培养基），然后用接种环再密集划线。然后，将制备好的药敏片分别按标记好的位置贴在培养基的表面。记录好培养皿的标记及药敏片的顺序。最后，将培养皿放入37℃恒温箱中培养8—12小时即可。
2药敏实验结果观察:培养好后会发现细菌再培养基上均匀分布，同时会看到药敏片周围有不同程度的抑菌圈。抑菌圈越大，说明该鸡群对这种药物越敏感；抑菌圈小或没有抑菌圈，说明该鸡群对这种药物不敏感或已经产生了耐药性。若在培养皿中出现一团一团的细菌时说明培养皿中有杂菌感染。

❾ 试管法做药敏实验步骤

1药敏实验操作步骤:在超洁净工作台内，先将灭菌好的培养基做好标记，无菌取病料（即：肝脏、心脏组织）一小块，轻轻在灭菌的培养基上涂布几下（不要突破培养基），然后用接种环再密集划线。然后，将制备好的药敏片分别按标记好的位置贴在培养基的表面。记录好培枣燃肆养皿的凳轿标记及药敏片的顺序。最后，将培养皿放入37℃恒温箱中培养8—12小时即可。
2药敏实验结果观察:培养好后会发现细菌再培养基上均匀分布，同时会看到药敏片周围有不同程度的抑菌圈。抑菌圈越大，说明该鸡群对这种药物越敏感；抑菌圈小或没有抑菌圈，说明该鸡群对这种药物不敏感或已经产生了耐药性段颂。若在培养皿中出现一团一团的细菌时说明培养皿中有杂菌感染。

❿ 药敏试验的介绍

用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。但由于药敏试验要求比较严格，条件比较高，仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作，一些养殖厂或一些门诊难有条件进行药敏试验的操作。针对这个问题，农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心经过几年的总结和实践，逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test法），和自动化仪器等。