A. 唾液淀粉酶活力的测定方法
实验原理:
唾液淀粉酶能催化水解淀粉,生成分子较小的糊精和麦芽糖。本实验利用碘的呈色反应来测定唾液淀粉酶水解淀粉作用的速度,从而测定唾液淀粉酶活力的大小。
实验仪器和试剂:
1.仪器(1)多孔白瓷板(2) 50mL三角瓶(3)恒温水浴锅(4)烧杯(5) 500mL容量瓶(6) 100mL容量瓶(7)漏斗(8)吸管
2.试剂(1) 原碘液:称取碘11g、碘化钾22g,加少量蒸馏水完全溶解后,定容至500mL,于棕色瓶中保存。(2)稀碘液:吸取原碘液2mL,加碘化钾20g,用蒸馏水溶解,定容至500mL,于棕色瓶保存。
(3) 标准“终点色”溶液
①准确称取氯化钴40.2439g、重铬酸钾0.4878g,加蒸馏水溶解并定容至500mL。
②准确称取铬黑T 40mg,加蒸馏水溶解并定容至100mL。取①液80mL与②液10mL混合,即为终点色。冰箱保存。
(4) 2%可溶性淀粉溶液:称取烘干可溶性淀粉2.00g,先以少许蒸馏水混匀,倾入80ml沸水中,继续煮沸至透明,冷却后用蒸馏水定容至100mL。(需新鲜配制)
(5)稀释100倍的唾液用蒸馏水漱口,以清除食物残渣,然后让唾液流入量筒并稀释100倍,混合备用。
(6) 0.02mol/L、 pH6.8磷酸氢= _钠-柠檬酸缓冲溶液:称取磷酸氢二钠45.23g和柠檬酸8.07g,用蒸馏水溶解后定容至1000mL,配好后用酸度计或精密试纸校正pH。
操作步骤:
(1) 将“标准色”溶液滴于白瓷板的左.上角空穴内,作为比较终点色的标准。
(2)在50ml 的三角瓶中,加入2%可溶性淀粉溶液20mL,加缓冲液5mL在37°C水浴中平衡约10min,加入0. 5mL稀释唾液,立即记录时间,充分摇匀。定时用滴管取出反应液约0.25mL,滴于预先充满此稀碘液(约0.75mL)的调色板空穴内,当空穴颜色由紫色变为棕红色,与标准色相同时,即为反应终点,记录时间T (min) 。
B. 淀粉酶活力的测定有几种方法
第一种:相同条件下,分别将等物质的量的酶加入适宜条件的淀粉中,然后用碘液测定
第二种:相同条件下,分别将等物质的量的酶加入适宜条件的淀粉中,然后用斐林试剂进行还原糖的测定
C. 淀粉酶活力测定还有哪些方法
淀粉酶可以催化淀粉分解成葡萄糖,所以首先建立已知浓度的葡萄糖标准曲线(葡糖浓度为横坐标、吸光度为纵坐标),然后令淀粉酶在一定条件下催化一定量淀粉反应,反应结束后检测反应完成液的吸光度(一般需染色剂染色),对比标准曲线即可换算出产物葡糖的量,然后可以计算出淀粉酶的活力
D. 淀粉酶活力的测定
-淀粉酶活力测定 α-淀粉酶活力测定
Yoo改良法:两份各5 ml 0.5%淀粉(用pH6.0 Na2HPO4-柠檬酸缓冲液配制) 分别标记为A、B,放入40℃恒温水浴中保温10分钟,A中加0.5 ml酶液,B中加0.5 ml dH2O,反应5 min后,各加5 ml 0.1 mol/L H2SO4终止反应。分别从A、B取0.5 ml反应液加入到于5ml 0. 4mmol/L I2-KI溶液显色,620nm处测光密度OD。活力单位定义:5 min内水解1mg淀粉的酶量。A(U/ ml) = ( R0-R)/ R0 ×50×D
A:酶活; R0:B对应的光吸收值;R:A对应的光吸收值; D:酶的稀释倍数