病理组织制片的方法有哪些

1. 活检采取病变组织的方法有

活检全称是活体病理组织学检查，是一种专业技术，是一项从患者体表、体内或体腔，通过钳取等取出病变组织，再进行病理组织学检查。常见活检做法具体如下：

1、手术活检：通常在局麻下或者全身麻醉下，通过手术方式取出病变组织，这种创伤较大但取样准；

2. 液基TCT有哪些制片方法怎样选择液基试剂与制片设备

液基TCT制片方法大致可以分为：1、离心式制片；2、膜式制片；3、沉降式制片；4、离心沉降式制片；5、手工制片。这些制片方法与使用的耗材有不同，康乃欣生物有适合不同制片方式的液基TCT试剂与配套液基制片机。

3. 脱落细胞涂片具有哪些要求，制片方法有哪几种，分别适用于哪些标本

一、涂片前准备工作及涂片方法
1、涂片前准备工作
（1）保证标本新鲜，取材后尽快制片。
（2）涂片操作要轻巧，避免挤压以防止损伤细胞。涂片要均匀，厚薄要适度，太厚细胞堆叠，太薄细胞过少，均影响诊断。
（3）玻片要清洁无油渍，先用硫酸洗涤液浸泡冲洗，再用75%乙酸浸泡。
（4）含蛋白质的标本可直接涂片，缺乏蛋白质的标本，涂片前先在玻片上涂薄层粘附剂，以防止染色时细胞脱落，常用粘附剂为蛋白甘油，由等量生鸡蛋蛋白和甘油混合而成。
（5）每位患者的标本至少涂两张玻片，以避免漏诊。涂片后立即在玻片一端标上编号。
2、涂片制备方法
（1）推片法：用于稀薄的标本，如：血液、胸、腹水等。取离心后标本一小滴滴在玻片偏右侧端，推片用30度夹角将玻片上检液轻轻向左推。
（2）涂抹法：适用于稍稠的检液，如：鼻咽部标本。用竹棉签在玻片上涂布，由玻片中心经顺时针方向外转圈匀抹；或从玻片一端开始平行涂抹，涂抹要均匀，不宜重复。
（3）压拉涂片法：将标本夹于横竖交叉的两张玻片之间，然后移动两张玻片，使之重叠，再边压边拉，获得两张涂片。该法适用于较粘稠标本，如：痰液。
（4）吸管推片法：用滴管将标本滴在玻片一端，然后将滴管前端平行置于标本滴上，平行向另一端均速移动滴管即可推出均匀薄膜。此法亦适用于胸、腹水标本。
（5）喷射法：用配细针头的注射器将标本从左至右反复均匀地喷射在玻片上，此法适用于各种吸取的液体标本。
（6）印片法：将切取的病变组织用手术刀切开，立即将切面平放在玻片上，轻轻按印。此方法为活体组织检查的辅助方法。
二、涂片的固定
固定（fication）的目的是保持细胞自然形态，防止细胞自溶和细菌所致的腐败；固定液能沉淀和凝固细胞内蛋白质和破坏细胞内溶酶体酶，使细胞不但保持自然形态，而且结构清晰，易于着色。因此标本愈新鲜，固定愈及时，细胞结构愈清晰，染色效果愈好。
1、固定液：细胞学检查常用的固定液有下列三种：第一种乙醚酒清固定液：该固定液渗透明性较强，固定效果好，适用于一般细胞学常规染色；第二种是氯仿酒精固定液：又称卡诺氏固定液。其优点同上；第三种是95%酒精固定液，适用于大规模防癌普查。制备简单，但渗透作用稍差。
2、固定方法
（1）带湿固定：涂片后未待标本干燥即行固定的方法称带湿固定。此法固定细胞结构清楚，染色新鲜。适用于巴氏或HE染色。痰液、阴道分泌物及食管拉网涂片等常用此方法。
（2）干燥固定：涂片后待其自然干燥，再行固定。适用于稀薄标本如尿液、胃冲洗液等，也适用于瑞特染色和姬姆萨染色。
3、固定时间：一般为15-30min。含粘液较多标本，如痰液、阴道分泌物、食管拉网等固定时间应适当延长；尿液、胸、腹水等涂片不含粘液，固定时间可酌情缩短。
三、涂片的染色
1、染色的目的和原理：染色的目的是借助于一种或多种染料，使组织和细胞内结构分别着不同的染色，这样在显微镜下能清楚地观察细胞内部结构，作出正确判断。
组织细胞染色原理至今尚无满意的解释，可能是物理作用，也可能是化学作用，或者是两者综合作用的结果。
染色的物理作用是利用毛细管现象，渗透、吸收和吸附作用，使染料的色素颗粒牢固地进入组织细胞，并使其显色；染色的化学作用是渗入组织细胞的染料与其相应的物质起化学反应，产生有色的化合物。
各染料都具有两种性质，即：产生颜色；征收被组织形成亲和力。这两种性质主要由发色基因和助色基因所产生。发色基团：苯的衍生物具有可见光区吸收带。这些衍生物显不出吸收带与其价键的不稳定性有关，如对苯二酚为无色，当其氧化后失去两个氢原子，它的分子或则变为有黄色的对醌，这种产生颜色的醌式环称为发色基团。若一种化合物含有几个环，只要其中有一个醌式环就会发出颜色，称此发色基团为色原（chromogen）。助色基团：是一种能使化合物以生电离作用的辅助原子团（酸碱性基团）。它能使染色的色泽进一步加深，并使其与被染色组织具有亲和力。
助色基团的性质决定染料是酸性碱性。碱性染料具有碱性助色基团，在溶媒中产生的带色部分为带正电荷的阳离子，吻与组织细胞内带负电荷的物质结合而显色。如细胞核内的主要化学成分脱氧化核糖核酸易被苏木素染成紫蓝色，称嗜碱性。酸性染料具有酸性用力色基团，在溶酶中产生带色部分为阴离子，易与组织细胞内带正电荷部分结合而显色，此性质被称为嗜酸性，如细胞浆内订成分为蛋白质，易与伊红或橘黄结合呈红色或橘黄色。
2、常用染色方法：临床日常工作中较为常用的染色方法有下列3种：
（1）巴氏染色法：本法染色特点是细胞具有多色性颜色，色彩鲜艳多彩。涂片染色的透明性好，胞质颗粒分明，胞核结构清晰，如鳞状上皮过度角化，细胞质呈橘黄色；角化细胞显粉红色；而角化前细胞显浅绿色或浅蓝色，适用于上皮细胞染色或观察阴道涂片中激素水平对上皮细胞的影响。此方法的缺点是染色程序比较复杂。
（2）苏木精—伊红（he

4. 怎样处理病理标本

制作时将部分有病变的组织或脏器经过各种化学品和者友亩埋藏法的处理，使之固定硬化，在切片机上切成薄片，粘附在玻片上，染以各种颜色，供在显微镜下检查，以观察病理变化，作出病理诊断，为临床诊断和治疗提供帮助。
1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：
(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩首森短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定
(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
(2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。
(3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。
最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。
3．脱水透明标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块内的水分置换出来，这一过程叫做脱水。无论是用石蜡切片，还是用火棉胶切片，都必告伍须除去组织中所含水分，因含水组织与石蜡、火棉胶等包埋材料不相容，常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。
脱水的步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。
丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作用，在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶于石蜡，还要经过一个能溶于石蜡的溶剂替代过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水杨酸甲酯等。
4．浸蜡、包埋
(1)使石蜡浸入组织中，取代组织中含有的透明剂。
(2)包埋：将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中，石蜡凝固后，组织即被包在其中，称蜡块，此过程称为包埋。
5．切片和贴片
(1)修整蜡块：可视其组织的大小，在组织边缘约0.1～0.2cm处，切去余蜡部分，否则易造成组织皱缩不平。
(2)准备好切片用具：切片刀、毛笔、眼科镊子（弯）、漂烘温控仪
(3)安装蜡块：将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上。
(4)安装切片刀：将切片刀安装在切片机的刀台上，把刀台上的紧固螺丝旋紧，使切片时不产生振动，能保持一定的切片厚度。
(5)切片的厚度：切片机的厚度调节器上刻有0～50μm或0～25μm，可任意选择其厚度，石蜡切片的厚度一般在4～6μm。
(6)切片
(7)铺片：用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在40～45℃的水面上，借水的张力和水的温度，将略皱的蜡带自然展平。
(8)贴片、烘片：待切片在恒温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水，置入60～65℃恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片15～30分钟，脱去溶化组织间隙的石蜡。
6．染色和封片常用的染色方法是苏木素-伊红（Hematoxylin-Eosin）染色法，简称H.E染色法。这种方法对任何固定液固定的组织和应用各种包埋法的切片均可使用。苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色，如细胞核中的染色质等；伊红是一种酸性染料，可使组织中的嗜酸性物质染成红色，如多数细胞的胞质、核仁等在H.E染色的切片中均呈红色。
H.E染色程序如下:脱蜡、脱苯、复水、染色、脱水、透明、封固
常规苏木素染色中的对比染色是用伊红,近年来在英、美国家的一些实验室则采用焰红（phloxine）,此外也有用桔黄G（OrangeG）、比布里希猩红(Biebrich scarlet)、波尔多红(Bordeaux red)等作为对比染色。伊红为染胞质、胶原纤维、肌纤维、嗜酸性颗粒等常用的染料。

5. 解离组织制片的常用方法有哪些

解离组织制片的常用方法有：质量分数15%的盐酸和体积分数95%的酒精，盐酸能杀死细胞，使其停止在各个分裂时期；还能溶解细胞之间的中胶层（破坏胞间连丝）。

保护组织位于植物的植物体幼嫩的根、茎、叶、花、果实的表面、直接接触外界环境的细胞层，而输导组织则是贯穿于植物体的根茎叶等器官为他们提供营养，掐去一根枝条的顶端就不会向上长了，因为植物生长靠的是细胞分裂，顶端的分生组织被破坏。

解离就是用要药液

使组织的细胞相互分离开来，便于最后制片时能被压成一薄层进行显微观察。解离液中酒精的作用是迅速杀死细胞，固定细胞的分裂相（将洋葱根尖剪下后，如果不立即投入固定液中将其杀死并令其各种细胞结构凝固，那么，整个根尖将一个分裂期细胞也找不到！）；而盐酸能溶解果胶，从而使洋葱细胞的细胞壁软化，并使细胞间的中胶层物质溶解，从而达到分离细胞的目的。

6. 在病理中，患者要求切白片出去做检测，我们切白片用普通片子还是黏附载玻片，切片有什么要注意的地方

病理切片要注意的地方：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保颂仿证原有的形态学结构。所取组织块较野早纤理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部。

但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可。在切片机上切成薄片，粘附在玻片上，染以各种颜色，供在显微镜下检查，以观察病理变化，作出病理诊断，为临床诊断和治疗提供帮助。

相关信息

病理切片是把病变部位手术切除一部分，然后在显微镜下观察组织病变的一种诊断方法，是诊断的确切依据，病理切片和活检之间还是有一些不同的。活检是把切除的组织直接进行显微镜检查的，而病理切片是把切下的组织，进行一些处理固定，然后再镜检的观察更细致。

病理切片的制作是需要时间的，希望耐心等待，手术中的快速切片取材有限，但是取出来的切片的结果是正确的。术后的病睁樱理切片取材会是多点多出取材，针对整个标本的检查更为彻底，所以准确性会更高。

以上内容参考：网络-病理切片

7. 病理组织切片的步骤，及注意事项！怎么能快速切好，请给个准确答案

（1）是什么组织或器吵销蠢官：大部分切片以肉眼即可判定出是什么组织或器官，如心肌、肝、脾、肾、肺、脑等。分辨各组织器官对初学者也不大容易，需要反复大量观察，有了一定经验之后就容易了。

（2）切片的质度、颜色等是否一致：这种一致与否，不是指正常结构中不同部位上的差异而是异常改变造成的：“是否一升陪致”。如一致可能是无病变，亦可能是一致性的病变；如有明显不一致的地方，如果不是正常的结构上的不同，便很可能是病灶所在之处了。在用显微镜观察时尤其是要注意此处。

2．低倍镜观察：用肉眼观察后，辨别出切片的上下面（有极薄的盖斗孝玻片那面向上），再放入显微镜下，用低倍镜观察：

（1）观察方法：实质器官一般由外（被膜侧）向内，空腔器官由内向外逐层观察。观察每层时亦应从一端开始一个视野挨一个视野地连续观察，以免遗漏小的病变。这种观察可以快一点粗略地观察一遍，若是一致性改如由心外膜、心肌及心内膜的次序观察。

8. 制片法有哪几种

你问的是TCT制片方法吗？
TCT制片方法 最常用主要有手工法、TCT膜式法和离心沉降法三种。
手工法是妇科医生用取样器在患者宫颈口取脱落细胞，然后打开康乃欣生产的液基细胞处理试剂盒，取出液基细胞保存液，旋开液基细胞保存液盖，将病理取样置液基细胞保存液中，盖上液基细胞标本保存液盖，将它放在液基细胞震荡仪上震荡5分钟，目的是打散宫颈脱落细胞，使脱落细胞均匀分布在保存液中。取出液基细胞试剂盒中一次性吸管，在震荡后的液基细胞保存液中吸取0.2-0.39毫升标本，平铺在病理载玻片上，将载玻片平放在工作台上，等待自然干后，进行染色（HE染色或巴氏染色），然后封片，镜检。
TCT膜式法，早在19世纪中旬，这种方法是发达国家在宫颈癌筛查常用的一种方法，在改革开放后引入我国。TCT膜式法制片过程，是通过TCT膜式机制片。TCT膜式机的原理是通过负压和正压将附在TCT膜管上的细胞吹在载玻片上的制片方式。这种TCT制片方式简单，快捷，缺陷是TCT膜管容易吹裂，制片一次一个。TCT膜管目前市场上很多厂家，国外有美国、英国、德国进口的，国内也有很多厂家。质量最可靠的是美国的。英国、德国的TCT膜管易裂，膜网不均，国产的质量更次，会导致病理脱落细胞片中细胞量少，严重降低宫颈癌阳性筛查率。

离心沉降法，首先打开康乃欣液基细胞处理试剂盒，拿出液基细胞标本保存液、宫颈脱落细胞取样器、一次性吸管等。将脱落细胞取样器取样，旋开液基细胞标本保存液盖，放入宫颈脱落细胞，盖上盖。将液基细胞标本保存液放置液基细胞震荡仪上震荡4分钟，使液基细胞处理液充分处理病理标本，充分打散宫颈脱落细胞。用一次吸管吸取液基细胞标本处理液1ml-2.5ml放入专供制片夹中。将编好号码的制片夹放入康乃欣液基细胞制片机（也叫康乃欣液基细胞薄层制片机），将液基细胞制片机通电，时间调到4-5分钟，转速设为1200-1500转/秒。启动液基细胞制片机，听到“咔”的一声。告知液基制片已经制作完成，最后染色镜检。

9. 显微鉴定常用的制片方法有

显微鉴定中常用的制片方法包括以下几种：

干铅好片法：将待观察的样品放在玻璃片上，用滴管滴上一滴显微镜油，再用另一张玻璃片将样品盖住，压平后制成干片，即可进行显微鉴定。

液片法：将待观察的样品放在玻璃片上，再将一滴显微镜油滴在样品上，用另一张玻璃片将样品盖住，压平后制成液片，即可进行显微鉴定。液片法适用于冲激穗颗粒较小的样品。

熔融法：将待观察的样品放在玻璃棒或铂丝上，加热至熔化，再将熔融液滴在玻璃片上，晾干后制成熔融片，即可进行显微鉴定。熔融法适用于矿物质中含有较高的熔点物质。

薄片法：将待观察的样品磨制成薄片，厚度通常为0.02-0.05毫米，然后在玻璃片上放置薄片，再用透明胶带固定，即可进行显微鉴定。薄片法适用于颗粒较大的样品，如矿物质、岩石等。

反射法：将待观察的散卜样品放在反射镜上，用显微镜观察其反射光学性质，即可进行显微鉴定。反射法适用于金属材料和矿物质等。
需要根据具体样品的特点和需要进行的鉴定目的选择适当的制片方法。

10. 组织学最常用的制片方法是

石蜡切片。石蜡切片操作要点。

切片前，把切片机上相关锁杆或螺旋拧紧，否则可能出现跳片、切片厚薄不均现象。

刮净包埋盒周边的余蜡，否则样品夹持可能松动，影响切片质量。

正确修块，先粗修，厚度大约在15-30微米，质地较硬的组织或较小的组织应再薄一些。粗修至组织全部暴露后，再进行细修。

选择蜡块握雀冷冻方式，冰盒优于冷冻台。使用冰盒能加水润湿蜡块，冷冻速度快，体积小，使用成本低，无须外接电源。

切片时轻握手轮，用力均匀轻柔，摇速不宜过快或过慢。过快会导致切片厚薄不均，切片难以展开；过慢会使切片增厚。切片要求完整、薄、均匀。

正确固定

组织离体后，必须在1小时内固定。固定液须是组织体积的4-10倍，浓度准确，过稀或过浓都会影响组织中扮形态和固定效果。如发现固定液变质，如甲醛液体产生白色沉淀，应立即更段培早换。

固定温度宜室温或放于35-37℃的全封闭组织处理机内，温度过高，会加快组织自溶和过度收缩，破坏细胞内的抗原和DNA。固定时间不超过40小时，根据室温和标本不同而调整。