凝血纤维蛋白原的测定方法有哪些

Ⅰ 什么是凝血时间；简述凝血时间的测定方法及临床意义。

凝血时间(clottingtime，CT)测定是将静脉血放入玻璃试管中，观察自采血开始至血液凝固所需的时间。本试验是反映内源凝血系统各凝血因子总的凝血状况的筛选试验。以前曾使用的玻片法和毛细血管法的敏感性和特异性均差，故已停止使用，用活化部分凝血活酶时间(APTT)或金血凝固时间(CT试管法)替代。CT试管法参考值为4～12分钟。前法较后法敏感。
CT延长可见于较显着的凝血因子Ⅶ、Ⅸ减少的血友病甲、乙，凝血因子Ⅺ缺乏症；血管性血友病；严重的凝血因子Ⅴ、Ⅹ、纤维蛋白原及凝血酶原缺乏；原发性或继发性纤溶活力增强；循环血液中抗凝物质增加；等等。
CT缩短可见于血栓前状态，DIC高凝期等；血栓性疾病如心肌梗死、不稳定心绞痛、肾病综合征及高血糖、高血脂等。

Ⅱ 纤维蛋白原的测定方法

现有的方法大体上分三大类：即（1）基于凝血酶的作用，形成纤维蛋白的方法；（2）物理化学测定法和（3）免疫学测定法。
第一类方法是一种功能测定法，所形成的纤维蛋白，又可再分为测重法，酚试剂比色法和紫外光度法、测氮法、浊度法和凝血酶凝固时间法等。这类方法的优点是测定的是有凝血功能的纤维蛋白原，又称为可凝固蛋白（clottable protein），故特异性较好。方法可简可繁，常规使用中，多采用较简便的Von Clauss法。根据这种方法设计的商品药盒（kit），已在一些国家广泛使用。据1975年美国CAP的调查，1939个临床化验室中，用此法者占1824家，即94%用了本法，其中Tan等采用了速率法。这类方法中由Ratnoff 和 Menzzie改良的酚试剂比色法，其曾被提出作为参考方法。近几年来，不少文献推荐用Jocobsson的改良法作为纤维蛋白原标准的定值方法。这类方法的缺点是，从理论上讲，有两方面可引起误差。一是所析出并测定的是纤维蛋白而非纤维蛋白原。已知纤维蛋白原变成纤维蛋白时会从α和β肽链上分别切下两个短肽，即A肽（FpA）和B肽(FpB)。这样纤维蛋白实际上比纤维蛋白原的质量少了10%。二是已知纤维蛋白旦形成，就会吸附一些凝血因子或纤溶因子，这样又会增加所测纤维蛋白原的量。此外，本法在操作中在获取纤维蛋白和洗涤（挤压）除去其它蛋白成份时，不仅比较麻烦而且也难以完全彻底，会造成其它蛋白污染。
第二类方法（物理化学测定法）在我国应用最广。这类方法又可分为盐析法（包括用亚硫酸钠、硫酸铵或氯化钠盐析，用蛋白质显色或比浊法测定），热变性沉淀法和电泳法等几种。这类方法都比较简单、快速，尤其适于急诊检验，但缺点是本法的特异性不强。所测的不是有凝固功能的纤维蛋白原，可能包括部分的降解产物和/或其它蛋白。而电泳法又太繁琐，不适于常规工作。
第三类方法（免疫学方法），是将纯纤维蛋白原作为抗原免疫动物，制成多克隆或单克隆抗体。然后用免疫胶乳、被动血凝或反向血凝、单向免疫扩散、火箭电泳以及ELISA等方法测定。优点是大部分方法简便，但缺点是所测的不仅是可凝固的纤维蛋白原，可能包括了它的降解产物（因为它们有共同抗原），也可能包括了障碍性纤维蛋白原（dysfibrinogens即N端谷氨酸γ位未羧化的无功能的纤维蛋白原,又称缺维生素K引起的蛋白质，PIVKA）。但免疫法也有一个好处，就是可用来测定PIVKA。如果一个患者总纤维蛋白原（用免疫学测定结果）不低，甚至增高，而功能性（即可凝固性）纤维蛋白原却明显减少，即可判断为存在PIVKA。肝病、维生素K缺乏等均可导致PIVKA升高，有临床诊断价值。

Ⅲ 血液凝固分析仪检测原理有哪些

不同类型的血凝仪采用的原理也不同，目前主要采用的检测方法有：凝固法、底物显色法、免疫法、乳胶凝集法等。由于在血栓/止血检验中最常用的参数，均可用凝固法测量，故目前半自动血凝仪基本上以凝固法测量为主，在全自动血凝仪中，也一定包括凝固法测量方式。
凝固法(生物物理法)
凝固法是通过检测血浆在凝血激活剂作用下的一系列物理量 (光、电、机械运动等)的变化，再由计算机分析所得数据并将之换算成最终结果，所以也可将其称作生物物理法。
a.电流法
电流法利用纤维蛋白原无导电性而纤维蛋白具有导电性的特点，将待测样品作为电路的一部分，根据凝血过程中电路电流的变化来判断纤维蛋白的形成。但由于电流法的不可靠性及单一性，所以很快被更灵敏、更易扩展的光学法所淘汰。
b. 光学法(比浊法)
光学法血凝仪是根据凝固过程中浊度的变化来测定凝血功能。
根据待验样品在凝固过程中光的变化来确定检测终点的。当向样品中加入凝血激活剂后，随着样品中纤维蛋白凝块的形成过程，样品的光强度逐步增加，仪器把这种光学变化描绘成凝固曲线，当样品完全凝固以后，光的强度不再变化。通常是把凝固的起始点作为 0%，凝固终点作为100%，把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光的变化，将其转化为电信号，经过放大再被传送到监测器上进行处理，描出凝固曲线。
光学法凝血测试的优点在于灵敏度高、仪器结构简单、易于自动化 ; 缺点是样品的光学异常、测试杯的光洁度、加样中的气泡等都会成为测量的干扰因素。
c.磁珠法
早期的磁珠法是在检测杯中放入一粒磁珠，与杯外一根铁磁金属杆紧贴呈直线状，标本凝固后，由于纤维蛋白的形成，使磁珠移位而偏离金属杆，仪器据此检测出凝固终点，这类仪器也可称为平面磁珠法。早期平面磁珠法能有效克服光学法中样品本底干扰问题，但存在灵敏度低等缺点。
现代磁珠法出现在 20世纪80年代末，90年代初进入商品化。现代磁珠法被称为双磁路磁珠法。双磁路磁珠法的测试原理如下: 测试杯的两侧有一组驱动线圈，它们产生恒定的交变电磁场，使测试杯内特制的去磁小钢珠保持等幅振荡运动。凝血激活剂加入后，随着纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度增加，小钢珠的运动振幅逐渐减弱，仪器根据另一组测量线圈感应到小钢珠运动的变化，当运动幅度衰减到50%时确定凝固终点。
底物显色法(生物化学法)
底物显色法是通过测定产色底物的吸光度变化来推测所测物质的含量和活性的，该方法又可称为生物化学法。检测通道由一个卤素灯为检测光源，波长一般为 405nm。探测器与光源呈直线，与比色计相仿。
血凝仪使用产色底物检测血栓与止血指标的原理是 : 通过人工合成与天然凝血因子有相似的一段氨基酸排列顺序、并还有特定作用位点的小肽，并将可水解产色的化学基因与作用位点的氨基酸相连。测定时由于凝血因子具有蛋白水解酶的活性，它不仅能作用于天然蛋白质肽链，也能作用于人工合成的肽链底物，从而释放出产色基因，使溶液呈色。产生颜色的深浅与凝血因子活性成比例关系，故可进行精确的定量。目前人工合成的多肽底物有几十种，而最常用的是对硝基苯胺(PNA)，呈黄色，可用405mm波长进行测定。
免疫学方法
在免疫学方法中以纯化的被检物质为抗原，制备相应的抗体，然后用抗原抗体反应对被检物进行定性和定量测定。常用方法有 :
a.免疫扩散法。将被检物与相应抗体在一定介质中结合，测定其沉淀环大小，与标准进行比较，计算待测物浓度。此法操作简单，不需特殊设备，但耗时过长，灵敏度不高，仅适于含量较高凝血因子检测。
b.箭电泳。在一定电场中，凝胶支持物内的被检物与其相应抗体结合形成的一个个“火箭峰”，火箭峰的高度与其含量成正比，通过测定峰高并与标准比较进行定量测定。此法操作复杂，临床应用较少。
c.双向免疫电泳。 通过水平与垂直两个方向进行电泳可将某些分子结构异常的凝血因子进行分离。
d.酶联免疫吸附试验(ELISA法)。用酶标抗原或抗体和被检物进行抗原结合反应，经过洗涤除去未结合的抗原或抗体及标本中的干扰物质，留下固定在管壁的抗原抗体复合物，然后加入酶的底物和色原性物质，反应产生有色物质，用酶标仪进行测定，颜色深浅与被检物浓度呈比例关系。该法灵敏度高，特异强，目前已用于许多止血、血栓成分检测。
e.免疫比浊法。 将被检物与其相应抗体混合形成复合物，从而产生足够大的沉淀颗粒，通过透射比浊或散射比浊进行测定。此法操作简便，准确性好，便于自动化。

Ⅳ 凝血检验的知识

凝血检验的知识

你知道应该如何检验凝血吗?你知道凝血检验的技巧吗?下面是我为大家带来的关于凝血检验的知识，欢迎阅读。

(一)PT和/或APTT延长

1. 了解患者有否家族出血史、个人出血史、肝病史、病人服药情况(医疗史)。病人如有瘀点、紫癜、黏膜出血多提示血管或血小板异常;若为关节出血、胃肠道出血常提示单个因子缺乏。若病史阳性，必须请检验科做混合试验等项目以便进一步查明原因。

2. 若家族出血史、个人出血史、肝病史、病人服药情况(医疗史)等均阴性，第一步就是重新采集标本。因为标本凝固，或放置时间太长，或从用肝素的静脉采血均可影响凝血试验结果。若重新采集标本不影响结果，应进一步做混合试验。

(二)凝血酶时间(TT)延长 TT延长，除以上两点外，还应注意以下几点：

1. 注意纤维蛋白原结果：因纤维蛋白原水平高或低，或有异常纤维蛋白原均可直接导致凝血酶时间延长，所以需做纤维蛋白原定量试验。

2. FDP/fdp测定：血液中出现纤维蛋白原/纤维蛋白降解产物(FDP/fdp)。因FDP/fdp具有凝血酶抑制物样作用，使TT延长，所以需做FDP/fdp半定量试验。

3. 排除肝素：若标本为肝素污染，或病人体内存在肝素，凝血酶试验结果异常。用硫酸鱼精蛋白中和肝素后，再做TT将正常。

问：什么是混合试验

混合试验是将病人血浆和正常人血浆做50:50混合进一步试验。混合血浆试验有助于鉴别PT与APTT结果异常的原因。

1. 若50:50混合试验纠正了异常结果，说明病人多数为因子缺乏，应进一步检测是哪个因子缺乏。但也不能排除出现低浓度抑制物。

2. 若50:50混合试验不能纠正或仅部分纠正APTT结果，可能出现抑制物。若抑制物为抗体，通常是输血、药物、或某些疾病所致，有时无明显原因。在大多数病例中，这些抗体只抗单个因子。

问：卫生部[2000]412号文件规定，停止使用出血时间测定项目的Duke法，必要时可使用出血时间测定器法检测出血时间(BT)。请对后者进行介绍。

出血时间测定器法检测BT是用一次性的出血时间测定器在前臂皮肤造成一“标准”创口(成人切口通常长5mm，深1mm)，记录出血自然停止所需的时间即为BT。该法为有创性检查，不作为手术前的常规，仅在怀疑有毛细血管和血小板方面的疾病，需用此项目进行鉴别诊断时才考虑进行。

BT的临床意义：

1. 出血时间延长：血小板数量异常如血小板减少症;血小板质量缺陷如先天性和获得性血小板病和血小板无力症等;某些凝血因子缺乏，如血管性血友病(vWD)、低(无)纤维蛋白原和弥散性血管内凝血(DIC)等;血管疾病，如遗传性出血性毛细血管扩张症、单纯性紫癜、过敏性紫癜等。阿斯匹林、非类固醇抗炎药及其它抗血小板药物、抗菌素如青莓素和头孢类药物等也可使BT延长。

2. 出血时间缩短：见于某些严重的高凝状态和血栓形成。

Ⅳ 医学检验，APTT、TT、PT、分别是用什么检测的

APTT是活化部分凝血活酶时间；主要是检测身体血液中内源性凝血因子是否缺乏。

TT是血浆凝血酶时间；指受检血浆中加入“标准化”的凝血酶后，血浆纤维蛋白原转化成纤维蛋白所需的时间。

PT是血浆凝血酶原时间；通过检测PT可以反映外源性凝血系统功能。

(5)凝血纤维蛋白原的测定方法有哪些扩展阅读

APTT时间延长主要见于血友病、DIC、肝病、大量输入库存血等；APTT缩短主要见于DIC、血栓前状态及血栓性疾病；APTT可作为肝素治疗的监护指标。

TT延长见于低或无纤维蛋白原血症和异常纤维蛋白原血症、DIC、血中有肝素和类肝素物质存在。

PT延长主要见于先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ减少及纤维蛋白原缺乏、获得性凝血因子缺乏；PT缩短主要见于先天性凝血因子V增多、DIC早期、血栓性疾病、口服避孕药等；监测PT可作为临床口服抗凝药物的监护。

这几项属于凝血功能测定，可以在术前了解患者有无凝血功能的异常，有效防止在术中及术后出现出血不止等意外情况，从而获得最佳的手术效果。

Ⅵ 内源凝血系统最常见的筛选试验有哪些

1、PT测定是外源性凝血系统较理想和常用的筛选试验。也可作为外源性途径及共同途径凝血因子的定量试验，同时，也可用于口服抗凝剂治疗的监控。
PT延长：见于先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症，低（无）纤维蛋白原血症，DIC，原发性纤溶症，VitK缺乏，肝病，口服抗凝剂、肝素和FDP等。
PT缩短：见于先天性凝血因子Ⅴ增多，口服避孕药，高凝状态，血栓疾病等。2、APTT用于体外人血浆中活化部分凝血活酶时间（APTT）测定。APTT测定是内源性凝血系统较敏感和常用的筛选试验，也可作为内源性途径凝血因子的定量试验，可检测除Ⅶ因子外的其他血浆凝血因子，特别是用于Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ和前激肽释放酶的测定。同时，APTT测定可用于肝素治疗监控。
APTT延长：见于凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ减低，纤维蛋白原缺乏症，纤溶活力增强，抗凝物质存在（如血内肝素含量增加及口服抗凝剂），是监控肝素治疗的重要指标。
APTT缩短：见于高凝状态，血栓性疾病，如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合症和肾病综合症等。3、FIB用于体外人血浆中纤维蛋白原（FIB）含量的测定。
FIB含量增高：见于糖尿病及其酸中毒，动脉粥样硬化，急性传染病，急性肾炎尿毒症，骨髓瘤，休克，外科术后及轻度肝炎等。
FIB减低：见于DIC，原发性纤溶症，重症肝炎，肝硬化等。4、TT用于体外人血浆中凝血酶时间（TT）测定。该实验系检查受试者血浆纤维蛋白原转变为纤维蛋白能力的过筛试验。
TT延长：见于肝素增多或类肝素物质存在，SLE，肾病，低（无）纤维蛋白原血症，异常纤维蛋白原血病（纤维蛋白原机能不良血症），FDP增多，异常球蛋白血症或免疫球蛋白增多等疾病。

Ⅶ 凝血酶时间测定和凝血酶原时间测定的区别

凝血酶原时间（PT）测定和胆碱酯酶（ChE）活力检测各有什么临床意义？

凝血酶原是由肝脏合成的一种蛋白质。凝血酶原试验是一种了解血液凝固情况的试验，它可以反映肝脏的凝血功能。凝血酶原时间（PT）和凝血因子Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ有关，而这些因子也均在肝脏合成。凝血酶原时间的正常值为11～15秒（奎氏法）。当肝脏出现病变、肝功能不良、上述凝血因子因合成障碍而含量降低时，即可引起凝血酶原时间延长而发生凝血障碍。如重型肝炎时，凝血酶原时间明显延长，患者容易出血，预后较差；慢性活动性肝炎与肝硬变时，凝血酶原时间可轻度延长；肝外阻塞而无明显肝细胞损害时，凝血酶原时间可正常。长期肝外阻塞、胆汁淤积、影响维生素K的吸收时，也可导致凝血酶原时间延长；若给患者注射维生素K时，则凝血酶原时间可恢复正常。

此外, 由于凝血酶原半衰期短，在急性重型肝炎发病后的短时间内即有凝血酶原时间的改变，故测定凝血酶原时间，对重型肝炎的诊断，病情和预后的判定，具有重要的临床意义。

血清胆碱酯酶，又称“假性”或“非特异性”胆碱酯酶，是由肝脏合成的一种特异性较差的，既可作用于乙酰胆碱，又能作用于其他胆碱酯类的酶。其正常值为0.80～1.00或40单位以上。

由于血清胆碱酯酶的半衰期短，所以它是肝内损害时的一种极为敏感的、反映肝脏酶合成障碍的试验。其活性降低的程度往往与肝病的严重程度相一致。如重型肝炎患者胆碱酯酶活性值一般都较正常降低，且降低程度与病情轻重密切相关；约80％的病人，其血清胆碱酯酶活性可降至正常值的60％，重危病人甚至下降至10％以下，此类患者多很快死亡。因此，血清胆碱酯酶活性的测定，有助于对重型肝炎的诊断及对病情和预后的判定。此外，重度慢性肝炎和晚期肝硬变患者，血清胆碱酯酶亦有不同程度的降低。

血栓与止血实验室检查的临床重要性与日俱增，检验内容不断扩大，工作量也日益增多；不断出现的方法更新和试剂商品化、操作自动化，改变了以往靠手工操作、自配试剂、工作效率低的局面。与此同时，方法标准化和质量控制也显得格外重要。然而，由于血栓与止血试验的特殊性 ......

有关（凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）和纤维蛋白原(FIB)测定等三项实验）

摘要：对ICSH、ICTH或美国国家临床生物化学委员会（NCCLS）等国际以文件形式公布的有关凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）和纤维蛋白原测定等三项实验的标准化及其重要性作了简单叙述。

关键词： 凝血酶原时间 活化的部分凝血活酶时间 纤维蛋白原 标准化

由于血栓与止血实验的特殊性，因此迄今仅有凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、活化的部分凝血酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）和纤维蛋白原（fibrinogen,Fg）等三项实验有了标准化的试剂（如PT）、标准品（如Fg）、质控品和统一的报告形式等；其他，如血小板功能、抗凝因子和纤溶成分等检测尚缺乏成熟的标准化方案。本文仅就经国际血液学标准化委员会（ICSH）国际血栓与止血委员会（ICTH）或美国国家临床生物化学标准委员会（NCCLS）等国际组织以文件形式公布的有关PT、APTT和Fg三项实验的标准化问题作一简介。

一、标准化和质量控制的重要性
所谓血栓与止血检测方法的标准化和质量控制，是指采用统计学原理，运用规范的物理、化学、生物学的方法，对血栓与止血实验的技术、操作、仪器、试剂和标本等项的质量水平，进行合理的管理、检测和评价，以标准化和质量控制来堵绝误差，提高实验的精密度、准确性和可靠性。标准化和质量控制的重要性在于：

1、为临床诊治提供可靠的依据：实验结果的可靠性是临床诊治疾病的重要依据和条件。实验结果若为假阳性就会造成误诊、误治；若为假阴性就会造成漏诊、漏治；实验结果偏高或偏低都会影响患者的诊断、鉴别诊断以及影响医师对病情和疗效的判断。

2、提高血栓与止血基础研究的效率和价值：血栓与止血基础研究的形式就是进行各种实验。实验可靠性好，就能揭示血栓与止血的客观规律，甚至可带来重大理论突破及（或）社会、经济效益；若实验可靠性差或有错误，则会造成假象或错误理论。

3、有助于人群健康调查和建立血液学参数的正常范围：为了解一定人群的健康水平，建立具有广泛意义的血液学参考值的范围须进行较大规模人群的健康调查，健康调查必须要有实验结果的可靠性作保障，不然会导致不准确或错误的结果，故质量控制对群体医学也有重要意义。

总之，血栓与止血实验室的质量控制，从一定程度上反映一个国家，一个地区，一个单位血栓与止血医疗水平和研究水平的高低。因此，应倍加重视。

二、 凝血酶原时间（PT）的标准化
自1935年Quick创建凝血酶原时间（prothrombin time,PT）测定方法以来，迄今仍然 是检查外源凝血系统诸因子及相关抑制物的重要筛选试验，PT也是目前口服抗凝剂治疗的主要手段。但是，PT测定受多种因素影响，必须对它进行标准化和质量控制，以提高PT检测的精密度、准确度和可靠性。

（一）凝血酶原时间（PT）的标准化问题

1、组织凝血活酶标准化：应用的国际参考品（international reference preparation IRP），有下列几种：
（1）单一组织凝血活酶国际参考品：是一种组织提取物的生理盐水悬液制剂。WHO在英国使用的统一标准的"英国比较凝血活酶"（British comparative thromboplastin,BCT）为基础，制备WHO的原级凝血活酶参考品（primary reference preparation），如人脑组织凝血活酶，编号67/40。同时又以BCT67/40为基础标化了次级参考品（secondary reference preparation）。如牛脑组织凝血活酶，编号为68/434；兔脑为70/178。后来WHO还公布了一些次级组织凝血活酶参考品，如人脑或胎盘制剂，如BCT/253；兔或兔、猴组织混合制剂，如RBT/79等。

（2）复合组织凝血活酶国际参考品：它是组织提取物的生理盐水悬液中加入适量的纤维蛋白原、因子V 和氯化钙组成的制剂，如牛组织凝血活酶OBT/79等。

目前世界各国都广泛应用WHO的这些参考品来校正本国或本地区制备或生产的组织凝血活酶参考物。这样使世界范围内有了多种组织凝血活酶参考品。

2、组织凝血活酶工作制剂（working preparation,WP）的国际敏感度指数（international sensitivity index,ISI）
由于不同组织凝血活酶对凝血因子的敏感性不同。为了使不同敏感性的组织凝血活酶在检测PT中能得到同样的结果，必须要制定一个共同的敏感性指标。这就需要通过自制的试剂与国际参考品（IRP）进行比较，然后得出一个校正值。具体的方法如下：

（1）用国际参考品（IRP）标定国家、地区或本实验室的参考制剂（reference preparation,RP）。
（2）用实验室参考制剂（RP）标定工作制剂（WP）。

1）标本：2份正常人血浆和6份口服抗凝剂达6周的患者血浆，连收10天，共60份标本。

2）测定：按一定顺序进行测定，每份标本重复测定2次。将PT测定的结果（秒）点在双 对数坐标纸上，横坐标代表WP的PT测定结果，纵坐标代表RP的PT测定结果，画出最佳的各点拟合直线，得出定标曲线，通过WP/RP比值，或回归方程求出斜率b。

3）计算WP的ISI值：ISI值愈接近于1.0，表明组织凝血活酶试剂愈敏感，因此，生产和出售组织凝血活酶试剂的厂商，必须在产品上标有ISI。

3、PT测定结果的报告方式：理论上，无论何种组织凝血活酶，只要标有ISI，就可与国际参考制品进行对比校正，并可用同一种计量单位报告。1985年ICSH和ICTH推荐以PT监测口服抗凝剂的报告方式是国际正常化比率（international normalizde ratio,INR）。

INR的计算公式如下： 在用INR后，各种敏感性不同的组织凝血活酶均可得到相同的INR值。

4、仪器特有有ISI：上述PT根据报告方式适用于手工法（试管倾斜法）测定PT。但是手工法与仪器法以及仪器法与仪器法测定PT的INR之间，仍有差异。研究表明，在ACL、Cobas Fibro和Coaga-Pet三台自动化仪器上，使用同一种ISI为1.12的Thromborel S试剂，测定PT的均值分别为10.7秒、12.1秒和11.1秒。但若以同一ISI值计算INR，得出的数值也存在着不同程度的差异。为此，专家们提出建议：同一组织凝血活酶试剂用于不同仪器时，可用所谓的"仪器特有的ISI"（instrument specific ISIs）或称区域性ISI（Local ISI）来计算INR。每台仪器所使用的凝血活酶试剂都应该有特定的ISI值，重新标定ISI值的做法是购买标有INR的冻干血浆，然后在自己的仪器上再标定所使用凝血活酶试剂的ISI值，这样才可使病人的INR具有可比性。

（二）凝血酶原时间（PT）的推荐方法

[原理]
将组织凝血活酶（主要含组织因子和脂质）和钙离子，加到枸橼酸抗凝血浆中，在37℃保温，测定血浆凝固时间，即为PT。PT主要用于筛选检测外源凝血系统的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相关因子的抑制物的试验。

[标本来集和处理]
1、标本采集：用硅化或塑料注射器抽取空腹静脉血，按9:1比例加入含0.109mol/L的枸橼酸钠抗凝剂的硅化或塑料试管中，轻轻混合均匀。
2、标本处理：以2000～2500g，离心15分钟，分离乏血小板血浆，并在24小时内完成试验。
3、正常对照血浆：选择正常健康男性和女性各lO名以上，年龄在18～45岁。但不能是妊娠、月经期、哺乳期和口服避孕药的妇女，采取的血浆冰冻干燥保存或-80℃保存。

[试剂]
1、抗凝剂：109mmol/L枸橼酸钠液（相当于含二分子结晶水的枸橼酸钠32g/L）。
2、凝血活酶试剂：市售商品，应标有ISI、批号及有效期。冻干者应按说明书加指定的缓冲稀释剂复溶。
3、氯化钙（CaCl2）溶液：为25mmol/L。（目前有些商品试剂已将凝血活酶液与氯化钙液混合好，可不必另配CaCl2液）。
4、质控物：正常及异常对照血浆
5、配制试剂用水必须符合1级纯水的标准。

[仪器]
1、手工法：秒表，保持37℃±1℃的恒温水浴箱或电热块。水深能浸试管3cm以上，表面无划痕的10×mm拭管。经标准的0.1mL移液管。经校正的秒表。
2、仪器法：各种自动或半自动血凝仪，严格按说明书操作。

[操作步骤]
1、手工法
（1）测定温度36.5～38.5℃，上述各试剂及被测血浆，均应预温至此一温度，但凝血活酶试剂预温不可超过30分钟，血浆预温一般不宜超过10分钟。

（2）所用试管及加样器等接触血浆的器具均为塑料或硅化玻璃管。

（3）吸取枸橼酸抗凝血浆0.1mL，加入一小试管中：加入凝血活酶试剂0.1mL混匀后置37℃水浴中。再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL，（也可先将凝血活酶试剂与CaCl2溶液等量混合，加入0.2mL）。立即混匀并开动秒表：试管仍浸于水浴中，至约10秒钟时，自水浴中取出，在纱布上迅速擦去试管外水滴，在明亮处不断倾斜试管，在流动状态下观察有无纤维蛋白形成。一旦见到纤维蛋白（同时将出现液体流动减慢），立即停表，记录时间。每次测定二管，按平均数报告。本试验的最后混合液其pH应为7.2～7.3，大部分商品凝血活酶试剂均用含缓冲液的溶液配制。

（4）每批均同时做正常和异常对照，方法应与测定标本完全相同。

[报告方式]
1、以PT的秒（S）数报告（最接近的0.5秒）
2、以患者血浆（S）/正常对照PT（S）的比率（PRT）报告。
3、在口服华法令类抗凝药物治疗监控时，应报告国际正常化比率（INR）。大部分自动化仪器可根据所测的PTR和凝血活酶试剂的ISI，自动算出INR。手工法可根据下列公式，用一计算器直接计算：

Poller设计了一个简便的列线图，在取得PTR和ISI值后，即可从图上直接查找出INR值，十分便利，国内已有介绍。
ICSH规定，不再用稀释曲线或百分比（活动度）报告。

[参考值]
因仪器/试剂不同，会得出不同结果，故很难统一规定参考值。各实验室应根据自己的仪器、试剂等条件，自行测定一批健康人，建立参考值。此后至少每年或当条件有变化时，根据新的条件，重新建立。参考值PT测定的一切条件均应与患者血浆PT测定相同（包括采血、容器、抗凝剂等）。健康供血者应选至少20个18～55岁的男性和非妊娠、月经期女性，不可服药，在平静休息状态采血、以减少个体差异（有条件时，可测一批老年人和小儿，分开统计）。同时应分开几天采血和测定，以减少天间差异。测定结果经统计学处理，计算标准差：以两个标准差（2SD）或95%可信限作为参考范围。对于三个标准差是正常还是异常，需结合具体情况进行评估。从统计学上讲，其中有些人是正常的。用以上标准，病人（PT异常）则很少会遗漏。

三、活化部分凝血活酶时间(APTT)的标准化
（一）活化部分凝血活酶时间(APTT)的标准化
APTT是检测内源凝血系统诸凝血因子缺陷和相关抑制物的筛选试验，也是当前用于凝血因子、肝素抗凝治疗以及狼疮抗凝物质检测的主要手段。
与PT测定一样，不同的部分凝血活酶、不同的活化剂和不同的激活时间对各种凝血因子缺陷、对肝素和对狼疮抗凝物质的敏感性相差很大。例如，检测APTT的试剂中，所用活化剂（白陶土、硅藻土、鞣花酸）不同，他们对检测肝素、狼疮抗凝物质和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同。

迄今，ICSH和ICTH尚未有APTT检测方法标准化或试剂标准化的可行方案问世，仅NCCLS于1992年，提出一个编号为H29-T的暂行方案。

（二）活化的部分凝血活酶时间（APTT）的推荐方法

[原理]
将一种磷脂和激活剂加到血浆中，经过孵育后，加入适当浓度的钙离子。其纤维蛋白凝块形成的时间（以秒计），即为APTT。本法主要用于过筛测定内源途径凝血因子的缺陷，如因子Ⅶ、Ⅺ、Ⅷ、Ⅸ、激肽释放酶原（PK）、高分子量激肽原（HMWK）以及纤维蛋白原等。同时也用于上述因子的抑制物测定、肝素治疗的监测以及狼疮抗凝因子的检查。

[仪器]
本实验所用仪器、设备（包括采血、贮血容器、加样装置和标本的处理等）以及对它们的要求完全与PT相同。PT所用自动化仪器同样适于本实验。

[试剂]
1、部分凝血活酶试剂：由商品供应。一般已与檄活剂按比例配在一起（或分开配制）常用的激活剂由硅藻土（商品名Celite）、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸（ellagic acid）或其它可用的激活剂，由厂方配套供应。
APTT试剂/仪器结合，应能使因子Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ活性低于0.3μ/mL（或＜30%）的血浆，出现异常延长的结果。
2、氯化钙溶液（25mmol/L）以及其它试剂与PT所用者相同。

[操作步骤]
1、样品的采取、贮存、输送与PT测定相同。注意，应用清洁的塑料或硅化玻璃采血器采血及贮血。
2、标本（去血小板的血浆）的制备与PT相同。注意、应用去血小板血浆测定。
3、水浴箱或电热板的温度为37℃±1℃，要经常检查是否正确。
4、接触活化时间：加激活剂活化因子Ⅻ的时间要保持一致；各仪器和试剂生产厂家的规定可能不一样，应严格按说明书要求进行。手工操作时，应用秒表或类似的定时装置计时。
5、操作：预温（不超过30分钟）APTT试剂一份与预温（不超过10分钟）的侍测血浆一份混合，立即开动秒表计时；至规定的接触活化时间终点时，加人预温37℃的CaCl2液一份，混匀，同时开动秒表。至出现血浆凝固时，停表，记录血浆凝固时间（以秒计）。手工测定时应同时测定两管，按平均数报告。一些精密度已有很大改进的自动或半自动凝血仪，如果有适当的质控标准也可只测定一次。应同时测定正常和异常对照血浆。

[参考值]参照PT

[特殊解释]
1、对肝素的敏感性：APTT常用于肝素治疗的监测，通常以患者APTT与正常血浆APTT的比率在1.5～2.5作为治疗控制范围：但不同的试剂/仪器系统对肝素的敏感性不同。其试剂/仪器系统对肝素的敏感性可进行测定。体外的敏感性（in vitro sensitlvity）是指将临床在使用的同类型钓肝素按其治疗浓度，加到正常血浆中，测定APTT。体外敏感性与体内敏感性（in vivo sensitivity）不等同，但可作参考。
2、浪疮抗凝因子：狼疮抗凝因子是一种抗磷脂的自身抗体，由于它抗凝血的重要成分磷脂，故能干扰凝血。血中如存在狼疮抗凝因子，APTT将延长。但APTT试剂对狼疮抗疑因子的敏感性有很大差别，试剂制造厂家应提供足够的说明，有关的国家机构也可提供对狼疮抗凝因子的资抖。但要知道，病人个体之间也有很大差异，没有一种试剂能测出所有狼疮抗凝因子。

四、纤维蛋白原测定（Fg）的标准化
（一）纤维蛋白原测定（Fg）的标准化问题
纤维蛋白原（死）由肝合成，存在于血浆和体液中，其结构和功能基本已搞清，但迄今仍无理想的临床检测方法；文献报道的测定方法多至10余种，有的精密度、准确信较好，但过于复杂、烦琐；有的虽然简便、快速，但精密度、准确性较差。
1992年，英国国家生物标准及控制研究所（NIBSC）、研究完成了一个纤维蛋白原标准品，编号为89/644，向WHO的生物标准专家委员会（ECBS）推荐，[15]并被ECBC批准为国际参考品（IRP）。从此，各国均引进这一标准品来标化本国或厂家生产的次极标准品（我国卫生部临床检验中心亦已在引进）。使纤维蛋白原测定的标准化工作，走出了关键的一步。因此根据调查，各家标准品纤维蛋白原含量差别很大。

（二）纤维蛋白原（Fg）测定的推荐方法
各家用IRP来标化自己的标准时，推荐采用Jacobsson的改良法，现将该法介绍如下。

[试剂]
1、缓冲液：Na2O·2H2O 0.882g；KH2PO4 2.77gl升，此为贮存缓冲液；将贮存缓冲液l份，加生理盐水2份即为应用缓冲液，pH为6.35。
2、生理盐水：0.15mol/L
3、人或牛凝血酶：500IU/mL，生理盐水溶液。
4、凝块溶解剂：尿素400g溶于少量蒸溜水中，200mL 1.Omol/L NaOH，再加水至l升。

[操作步骤]
将纤维蛋白原冻干（标准）品（源于89/644）加lmL蒸馏水复溶，加到含有2mL应用缓冲液的有机玻璃浅盘或其他容器中，再加入凝血酶液50μL，迅速混匀，在室温中静制置2小时。将容器倒扣于吸水的布上（其下可垫吸水纸），再用适当物质（加滤纸）将凝块吸干。将凝块取下，置于5OmL生理盐水中洗涤2次，每次洗涤后均应将凝块吸干（可用玻璃挤压凝块），尽量除去含于凝块中的液体，以免液体中的其它血浆蛋白残留。必要时可在清洁棉布上挤压。
小心将凝块加人含凝块溶解剂7.5mL的容器中，摇匀，直至凝块完全溶解。倒人光径为1cm的比色杯中，以凝块溶解剂为空白，在280nm和315nm波长读取吸光度（A）。

（三）适用的纤维蛋白原（Fg）测定（Clauss法）

[原理]
将凝血酶加到血浆中，使纤维蛋白原变成纤维蛋白，血浆便出现凝固。在有足量的凝血酶时，与不同含量的纤维蛋白原作用，其出现血浆凝固的时间与纤维蛋白原含量呈负相关。

[试剂]
1、牛凝血酶l00NIHU/mL
2、纤维蛋白原标准品（IRP次级标准）
3、缓冲液（下列两种任选一种）：
（1）巴比妥缓冲液（PH7.5）；巴比妥2.5g，巴比妥钠2.75g，璐氯化钠7.3g溶于750mL去离子水中，校正至PH7.5，加水至1L。
（2）咪唑（Imidazole，或Glyoxaline）缓冲液：咪唑3.4g（0.05mol/L），氯化钠5.85g，加于约500mL水中；加O.1mol/L盐酸186mL，调PH至7.3-7.4，最后加蒸馏水至1升。

[操作步骤]
1、手工法
（1）用上述缓冲液先将标准品稀释成0.8，1.6，2.4，和4.0g/L纤维蛋白原浓度，各浓度再用缓冲液作1:10稀释。
（2）患者血浆及质控物用缓冲液作1:10稀释。
（3）将含100NIHU/mL，牛凝血酶，混匀后室温保存。如用仪器法测定，则用100NIHU/mL，牛凝血酶，不必稀释。
（4）在一试管中，加稀释血浆0.2mL，置37℃水浴中4分钟。
（5）加入预温37℃的lOONIHU/mL凝血酶液O.2mL，摇匀并立即开动秒表，不断观察凝固时间。至出现凝固时停表。
（6）每份标本测定两次，求平均数。同时测定各标准管和对照（质控）管，方法相同，准确记录时间。
（7）计算：用双对数纸作图，以凝固时间为纵坐际、纤维蛋白原浓度为横坐标，将各相应浓度的标准管对凝固时间，在图上标出相应的点并连成直线，制成标准曲线。然后根据患者和质控血浆所测得的凝固时间。在图上查到纤维蛋白原含量。
如血浆纤维蛋白原含量大于4g/L，应稀释血浆后重测，结果乘以稀释倍数。如血浆纤维蛋白原含量低于O.8g/L，需将原血浆改为1:2或1:5稀释，在标准曲线上查得结果后除以5或除以2。
2.仪器法：本法可用自动或半自动凝血仪按凝血酶时间（TT）测定法测定。可自动打印出结果。一般仪器法比手工法精密度高。