① 石蜡切片的制作方法
肠道的石蜡切片的制作
（1）
取材：用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠（据胃5cm左右位置的前肠），组织块的规格为
3～5mm×3～5mm×10～15mm。
（2）
固定：采用Bouin氏固定液装瓶固定，固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。
（3）
冲洗：固定12～24h后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。
（4）
脱水：70%酒精（1h）→80%酒精（1h）→90%酒精（1h）→95%酒精（1h）→无水乙醇Ⅰ（1h）→无水乙醇Ⅱ（1h）
（5）
透明：无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）（1h）→二甲苯Ⅰ（1h）→二甲苯Ⅱ
（1h）
（6）
浸蜡：浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。
二甲苯与石蜡混合液（1:1）（1h）→石蜡Ⅰ（1h）→石蜡Ⅱ（1h）
浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片
的质量。
（7）
包埋：在小纸盒内注入溶化的石蜡，将已浸蜡的组织块置入其内，使蜡块迅速冷却硬固，组织块在蜡块中可长期保存。
（8）
切片：包埋后的组织块经修整后，用切片机切成5~7μm的石蜡带。
（9）
粘片：将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片，然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片，组织带即可粘在载玻片上。
（10）
烤片：将粘好的载玻片置于35℃左右的温箱中烤干，待2~3小时后，即可取下编号。
（11）
苏木精—伊红染色：将烤干的片进行染色。
①脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10rain。
②复水：将脱蜡后的切片移入100％酒精5min→95％酒精5min→85％酒精5min→70％酒精5min→蒸馏水5min
③HE染色显示肠道黏膜上皮内淋巴细胞：将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中，10min，使细胞核着色；用自来水洗去切片上残余染液；用1％的盐酸酒精分色3秒；用自来水浸洗3h，显微镜下观察，直到胞核蓝化为止；然后切片入曙红溶液中染色5min，使细胞质着色。经95％酒精与100％酒精脱水，二甲苯透明后，中性树胶封片。
④奥新兰一沙黄染色显示肠道内肥大细胞：切片常规脱蜡下行至蒸馏水→奥新兰一沙黄液染色15～20min→蒸馏水速洗，镜检→95％和100％酒精分色脱水1—2min→二甲苯透明→中性树胶封片。
⑤阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞：切片经脱蜡下行入蒸馏水→阿利新兰醋酸染色10min→蒸馏水洗→1％高碘酸水液氧化5min→蒸馏水略洗一Schiff试剂染色（37℃恒温箱）30min→普通水洗3次→蒸馏水2min→Ehrlich苏木精染色5min→95％酒精和100％酒精脱水→二甲苯透明，中性树胶封片。
切片经脱蜡下行入水：二甲苯(30
min)一二甲苯(10
min)一无水乙醇(5
min)一无水乙醇(5
min)一
95％
乙醇(5
min)一85％乙醇(5
min)一70％
乙醇(5
min)一流水冲洗(20
min)。人Ehrlich苏木精染
色12
min，蒸馏水速洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。入伊红染色2
min，蒸馏水略洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。经95％酒精与无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
阿利新兰—番红复合染色液的方法称Scaba法
阿利新兰—番红分别染色的方法称Spicer法
② 现代生物学研究中石蜡制片技术的应用有哪些
荧光标记法、细胞培养、细胞杂交技术、石蜡切片技术、制片技术（包括临时装片和永久装片）等等。希望对你有帮助。
③ 谁能告诉我石蜡封片怎样操作
是经典的石蜡切片还是石蜡封片呢？
石蜡切片的最后一步就是封片
我们做的步骤是用中性树胶封片
封片的过程中最应该注意的就是中性树胶不要过多也不要过少，过多会溢出来，过少会出现空隙；详细的量就要自己经验掌握了。
另一个就是在放盖玻片的时候动作要慢，不要有气泡，如果有少量的气泡，可以用解剖针较粗的那头轻轻按压盖玻片赶出气泡，如果气泡过多，那就没办法了。