Ⅰ 底物法和速率法的区别
速率法a通常用在酶活性测定时,反应曲线上肯定有成线性的区域,而两点速率法又称固定时间法或一级动力学法,利用的是一级反应,在仪器上的区别主要是前者会有一个检测线性区线性度,利用最小二乘法拟合直线,计算速率;而两点速率法没有线性度检测,直接用吸光度差除以时间计算。固定时间法又被称为一级动力学法(first order kinetic)、初速率法(initial rate)、二点动力学法(two point rate)等。在一定的反应时间内,反应速度与底物(被测物)浓度的一次方成正比,由于底物(被测物)在不断的消耗,因此整个反应速度在不断的减小,表现为吸光度的增加(或降低)速度越来越小,这类反应达到平衡的时间很长,理论上可以在任意时间段进行监测,但由于血清成份复杂,反应刚启动时反应较复杂,杂反应较多,经过一段延迟时间才能进入稳定反应期,必需在特定时间段内进行监测。
Ⅱ 谷丙转氨酶活性测定的实验报告怎么写
谷丙转氨酶活性测定的实验报告要从以下几个方面入手:实验方法原理、实验材料、仪器、耗材、实验步骤。具体模板如下:
实验方法原理
血清谷丙转氨酶(SGPT)能催化丙氨酸与酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸,丙酮酸在酸性条件下与2,4-二硝基苯肼可缩合成丙酮酸二硝基苯腙,该腙在碱性条件下呈现出橙红色,呈色深浅符合比尔定律,在520 nm处有最大吸收。
SGPT 在肝脏中含量最高,由于肝细胞损害,该酶逸出血液,可使 SGPT 含量明显增高。因此测定血清谷丙转氨酶的活性可作为肝中毒肝病的重要指标。
实验材料
丙酮酸、丙酮、α-酮戊二酸、dl-丙氨酸、2,4——二硝基苯肼、氢氧化钠
仪器、耗材
恒温水浴锅、分光光度计、吸量管、试管、试管架
实验步骤
1、标准曲线的绘制:取干燥洁净试管6支,编号。每管加0.5ml 2,4—二硝基苯肼,再保温20 min,分别向各管加入0.4 mol/L氢氧化钠溶液5 ml,室温下静置10 min后,用蒸馏水调零点。
于520nm处测光密度,以各管光密度减去空白管光密度为纵坐标,丙酮酸微克数为横坐标作标准曲线。
2、SGPT活力测定:取洁净干燥试管4支,即测定管、对照管各2支。各管反应完毕,混匀,室温下静置10 min后,再以蒸馏水调零点测定光密度。由标准曲线上查得丙酮酸微克数,根据下式计算SGPT 的活力:SGPT 活力(单位)=(测定管微克数-对照管微克数)/2.5×0.1。
(2)血清alt活性测定都有哪些方法扩展阅读:
谷丙转氨酶活性测定的注意事项
1、在呈色反应中,2,4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙,底物中α-酮戊二酸可与之发生反应,生成α-酮戊二酸苯腙。故制作标准曲线时,需要加入一定量的底物以抵消α-酮戊二酸的影响。
2、在测定 SGPT 活力时,应事先将底物、血清在37 ℃水浴中恒温,然后在血清管中加入底物,准时计时。
3、标准曲线上数值在20~100 U是准确可靠的,超过200 U 时,需将样品稀释。
4、丙氨酸应使用 DL-型,不使用 D-型。如使用 L-型,用量减半。
5、溶血标本不宜使用,因血细胞内转氨酶活力较高,会影响测定结果。
Ⅲ ALT是什么意思
1、“ALT”是“Alanine aminotransferase”的简称,即谷丙转氨酶。
谷丙转氨酶(ALT)主要存在于各种细胞中,尤以肝细胞为最,整个肝脏内转氨酶含量约为血中含量的100倍。正常时,只要少量释放人血中,血清中其酶的活性即可明显升高。
在各种病毒性肝炎的急性期、药物中毒性肝细胞坏死时,ALT大量释放入血中,因此它是诊断病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指标。肝细胞内谷丙转氨酶的浓度比血清高1000~3000倍。只要有1%的肝细胞坏死,便可使血中酶活性增高1倍,因此转氨酶(尤其是ALT)是急性肝细胞损害的敏感标志。
(3)血清alt活性测定都有哪些方法扩展阅读:
检测ALT时的注意事项:
1.测定血清谷丙转氨酶时,应事先将底物、血清放在37℃水浴中保温,然后血清中加入底物,准确计时。
2.血清标本宜迅速与血块分离,及时测定,如不能立即测定,应置于冰箱内,但不能超过3天。溶血标本不宜测定,因细胞内酶的活性较高,会影响测定结果。
3.操作时应准确掌握作用时问、温度、pH值、试剂浓度以及试剂加入量,以免影响测定结果。
电脑“Alt”键的使用技巧:
在不同的应用程序中,“Alt”键也同样有着不同的使用技巧。
比如在IE中:按“Alt+←”键可以实现“后退”功能,而按“Alt+→”则相当于“前进”按钮,“Alt+D”可选择地址栏中的文字等。
在Word中选择文本时,如果先按下“Alt”键再拖动鼠标,则为列选择方式(否则为行选择方式),在这种方式下可以定制一个列块;在定制工具栏时,也可以先按下“Alt”键,再用鼠标直接拖动各个按钮;在表格中按下“Alt+Num5”(数字键盘上的5,需先关闭Num Lock指示灯)可以快速选定整个表格,先按下“Alt”再按“Home”。
Ⅳ 丙氨酸底物法原理
丙氨酸氨基转移酶活性的测定方法有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法和2,4-二硝基苯肼法等[1]。
丙氨酸氨基转移酶活性的测定方法目前主要为丙氨酸底物法。本法采用的原理是在ALT的催化下,L-丙氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸,生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。NADH在特定波长(如:340nm处)有特异吸收峰,其氧化的速率与血清中ALT的活性成正比,在此波长处测定NADH吸光度下降的速率,即可计算出ALT活性。
丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法采用的原理为[2]:
2,4-二硝基苯肼法采用的原理为:
丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应,二硝基苯肼与α-酮酸反应,生成相应的二硝基苯腙,在碱性条件下,二硝基苯腙的吸收光谱有差异,通过酶标仪检测在500-520nm处差异最大,以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量,进而计算酶的活性。
Ⅳ 医学里ALT是什么
ALT(谷丙转氨酶)一般指谷丙转氨酶。
谷丙转氨酶(ALT)主要存在于各种细胞中,尤以肝细胞为最,整个肝脏内转氨酶含量约为血中含量的100倍。正常时,只要少量释放入血中,血清中其酶的活性即可明显升高。
在各种病毒性肝炎的急性期、药物中毒性肝细胞坏死时,ALT大量释放入血中,因此它是诊断病毒性肝炎、中毒性肝炎的重要指标。
肝细胞内谷丙转氨酶的浓度比血清高1000~3000倍。只要有1%的肝细胞坏死,便可使血中酶活性增高1倍,因此转氨酶(尤其是ALT)是急性肝细胞损害的敏感标志。
(5)血清alt活性测定都有哪些方法扩展阅读:
注意事项:
1、测定血清谷丙转氨酶时,应事先将底物、血清放在37℃水浴中保温,然后血清中加入底物,准确计时。
2、血清标本宜迅速与血块分离,及时测定,如不能立即测定,应置于冰箱内,但不能超过3天。溶血标本不宜测定,因细胞内酶的活性较高,会影响测定结果。
3、操作时应准确掌握作用时问、温度、pH值、试剂浓度以及试剂加入量,以免影响测定结果。