液相进样选错方法怎么办

Ⅰ 岛津高效液相无法进样怎么办 机器显示已有批处理队列待机，但是点不开队列视图怎么办呢

岛津自动进样器是电脑控制，完全自动进样的,包括洗针、取样、进样、启发记录这些动作。

以下为可能出现的问题及解决方法，可视情况进行选择测试

1. 自动检测样品架按钮点击后，不一定出现的就是他找到的样品架。可能是虚的检测样品架。可以将方法中检测样品架下拉菜单拉到任意一个其他样品架后，再次点击检测样品架，看是否有改成正确的样品架显示。

2. 如果1中没有自动修改成正确的样品架，可议看下进样器面板屏幕左上角显示的左边的样品架类型字母L后面是不是正确的样品架，还是none，如果是none，可尝试将样品架重新推到底。

岛津自动进样器

Ⅱ 液相色谱在进样时要注意些什么

手动进样：洗针要充分，不要有气泡，不用定量环定量的，要控制进样准确性
自动进样：有洗针要注意洗针液，进样瓶位置不要摆错，
熟练就好，都没神马难的，。

Ⅲ 安捷伦1260液相进样针怎么校正

1、断开电源，然后拔下安捷伦自动进样器电缆。如果有特殊需要，可以将采样器安装在停车柱上，也可以将采样器放在工作台上；
2、打开自动进样器门并将注射器支架滑到顶部位置；
3、逆时针旋转注射针锁定销以将其打开；
4、将推杆支架向上提起，然后小心地将注射针头穿过针头支撑座上的导向孔；
5、将注射针法兰与法兰导向器对齐，将注射针按入到位，同时将针留在针支撑座的引导孔中，确保注射针法兰的平坦侧朝外；
6、顺时针旋转注射器锁销，直至其卡入到位并合上；
7、逆时针旋转推杆螺丝，将其*松开；
8、向下滑动推杆支架，直到其*位于注射针柱塞上方，然后用手指拧紧推杆翼形螺钉；然后，将推杆翼形螺钉拧紧。
9、手动上下移动柱塞支架。如果注射针柱塞未随支架一起移动，请重复前面的步骤，直到正确安装为止；否则，请重新开始操作。
10、检查针头是否在针头支撑座的导向孔中。针头应笔直，并可以自由穿过针头导向孔；
11、关闭安捷伦自动进样器门以完成安装。

Ⅳ 高效液相色谱法常出现的故障及解决的方法

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法 高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法 高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法
1 概述。高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱
温箱、检测器、数据处理系统组成。对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核
心部件同时也是易出问题的主要部位。
2 常见问题及解决方法。高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按
照正确操作的话，就容易导致一些问题。其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、
峰型异常问题。
2.1 柱压问题。柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压
的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压
稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）
之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。压力过高、过低都
属于柱压问题。
2.1.1 压力过高。这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，
一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。(1).首先断
开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否
自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。处理方法：用30%
的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正
常，在检查； (2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，
则是过滤白头堵塞。处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查； (3).把色谱柱
出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，
则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在
流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下
降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，如
果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，
所以尽量少用。
2.1.2 压力过低。压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：寻找各个接
口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。当然还有一个原因就
是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致
泵无法吸上液体。处理方法：打开Purge阀，用3~5ml/min的流速冲洗，如果不行，
则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
2.2．漂移问题主要包括基线漂移和保留时间漂移。
2.2.1基线漂移。一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的
平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下（220nm）平衡
时间相对会比较长，但如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原
因： 1、柱温波动。解决方法：控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的
窗户或空调对着柱温箱。2、流通池被污染或有气体。解决方法：用甲醇或其他
强极性溶剂冲洗流通池（最好断开柱子）。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用
盐酸）。3、紫外灯能量不足。解决方法：更换新的紫外灯4、流动相污染、变质
或由低品质溶剂配成。解决方法：检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及
HPLC级的溶剂。5、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。解决方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间。
在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。6、检测器没有设定在最大吸收波长处。
解决方法：将波长调整至最大吸收波长处7、流动相的PH值没有调节好。解决方
法：加适量的酸或碱调至最佳PH值
2.2.2 保留时间漂移。保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东
西，两次的保留时间相差不要超过 15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，就
无法进行定性，你要考虑以下原因： 1、温控不当。解决方法：调好柱温，检查
是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。2、流动相比例变化。解决方法：检查四
元泵的比例阀是否有故障 3、色谱柱没有平衡。解决方法：在每一次运行之前给
予足够的时间平衡色谱柱 4、流速变化。解决方法：重新设定流速 5、泵中有气
泡。解决方法：、 从泵中除去气泡 2.3 峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，
在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样
的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。1、色谱图中未
出峰。解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测
器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。2、一个峰或几个峰是负峰。
解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动
相。 3、所有峰均为负峰。解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光
学装置尚未达到平衡。
4、所有峰均为宽峰。解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动
相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；
温度变化造成的影响。
5、所出峰比预想的小。解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；
检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
6、出现双峰或肩峰。解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱
柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰。解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；
保护柱或色谱柱污染或失效。
8、拖尾峰。解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定
相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用
碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相 pH 值；柱内烧结不锈钢失效，更
换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连
接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护
柱，对柱子进行再生。
9、出现平头峰。解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
10、出现鬼峰。解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡
和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动
相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用 HPLC 级试
剂；流路中有小的气泡，打开 Purge 阀，加大流速排除。
11、 结语。以上内容只是对液相色谱中出现的常见的问题进行了分析，在故障
排除时要遵守以下原则：一次只改变一个因素，确定假定因素与问题之间的联系；
如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位，避免浪费；
这是成功进行故障排除的关键。总之，在使用高效液相色谱时一定要注意样品的
前处理与仪器的正确操作和保养。

Ⅳ 高效液相色谱再使用的时候如果还没有按开始就已经进样了出现问题该怎么办

实验做错了当然重做，还能怎么办？你是没样品了吗？ 有样品的话就别怕麻烦重做，这些步骤还是要小心点的 你进样是用六通阀吗，已经弄到load位置了，还是只是把东西打进去，没把六通阀弄到load位置，只是在inject位置。如果只是在inject位置的话，应该没关系，我也这么做过，没什么大问题。如果在load位置了，应该要重做吧，那已经会有影响了吧

Ⅵ 高效液相色谱进样问题

不会，样品从定量环进样时不是直接进入色谱柱，而是由流动相冲洗进入，六通阀即使空扳
也不会使空气直接进入色谱柱，因此转换相系时一般会空扳几次六通阀来清洗进样管路。
满意请采纳~

Ⅶ 液相问题

一、峰拖尾的问题

1、筛板阻塞

解决办法：a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷

解决办法：填充色谱柱

3、干扰峰

解决办法： a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误

解决办法：调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

解决办法：a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更改色谱柱

二、峰前延可能的原因

* 在大峰前，有小峰流出；

* 柱死体积；

* 样品溶剂不适当；

* 过滤片部分堵塞；

* 柱过载；

* 色谱柱损坏；

1、柱温低

解决办法：升高柱温

2、样品溶剂选择不恰当

解决办法：使用流动相作为样品溶剂

3、样品过载

解决办法：降低样品含量

三、峰分叉

1、保护柱或分析柱污染(柱中有死体积)

解决办法：取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，  可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相

解决办法：改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

四、峰变形

1、样品过载

解决办法：减少样品载量

五、早出的峰变形

1、样品溶剂选择不恰当

解决办法： a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂

六、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

1、柱外效应

解决办法：a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池

七、酸性或碱性化合物的峰拖尾

1、缓冲不合适

  a、使用浓度50-100mM的缓冲液  b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

2、额外的峰

3、样品中有其他组份

4、前一次进样的洗脱峰

解决办法： a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速

5、空位或鬼峰

解决办法：a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积

八、保留时间波动

1、温控不当

解决办法：a、调好柱温

2、流动相组分变化

解决办法：a、防止变化（蒸发、反应等）

3、色谱柱没有平衡

解决办法：a、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱

九、保留时间不断变化

1、流速变化

解决办法：a、重新设定流速

2、泵中有气泡

解决办法：a、从泵中除去气泡

3、流动相选择不恰当

解决办法：a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相

十、基线漂移

1、柱温波动（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）

解决办法：控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器

2、流动相不均匀（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）

解决办法：使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体

解决办法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）

4、检测器出口阻塞（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）

解决办法：取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化

解决办法：更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时

解决办法：用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

解决办法：检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。

解决办法：使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂，但检测器未调整。

解决办法：重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。

解决办法：将波长调整至最大吸收波长处

十一、基线噪音（规则的）

1、在流动相、检测器或泵中有空气

解决办法：流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液

解决办法：见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。

3、流动相混合不完全

解决办法：用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）

解决办法：减少差异或加上热交换器

5、在同一条线上有其他电子设备

解决办法：断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

6、泵振动

解决办法：在系统中加入脉冲阻尼器

十二、柱压高

1.新柱压力高

以原厂报告上完全一样的条件下测试比较，若压力在报告压力值上下浮动200-300psi以内，可视为正常范围；若高于出厂报告压力值1倍或以上，有以下原因引起：

99.9％原因：系统压力高，包括保护柱，泵，管路和接头等引起。

解决方案：从系统上拿掉柱子，逐步检查具体哪个部件引起的；或者换不同的仪器平衡柱子，比较压力值，排除柱子本身的问题。注意：必须是平衡柱子达足够时间后的稳定压力值。如果您仍然不放心，可先寄回在我们公司实验室测试。

0.1％原因：柱子本身压力高，寄回供应方测试，如若核实，可提供相关更换等处理。

2.使用一段时间后的旧柱压力升高

HPLC系统原因仍然存在，排除系统原因后，几乎100％的原因是由于实验过程中杂质在柱中的累积。

解决方案：尽量完善操作条件，做完样品后要及时冲洗干净，如缓冲盐的流动相一定要用高比例的水溶液（如90％）冲洗完全后再用有机相保存。

十三、柱效低

1.新柱柱效低

以原厂报告的条件下测试同样的标样，Supelco，Kromasil以及Agilent等柱子以甲苯作为比较，CNW柱子以萘作为比较，Waters柱子以苊作为比较，根据仪器不同，如果250*4.6mm，5um柱效在2000左右的差异可以认为是符合出厂要求的；如果您的仪器测试结果相差太大，有以下原因：

99.9％原因：系统问题，包括接了保护柱，平衡时间不够等引起。

解决方案：取下保护柱（测试柱效时不能加保护柱），增加平衡时间，对于新柱，50mm长的柱子平衡时间在30min以上，150mm的柱子在45min以上，250mm长的柱子在75min以上。如果您不放心，可先寄回在我们公司实验室测试。

0.1％原因：柱子本身柱效低，寄回公司检测，如果核实，可提供相关更换处理。

2.使用一段时间后的旧柱柱效降低

排除系统原因，基本是测试的条件和样品导致，如测试条件的pH值在柱子耐受pH值范围以外，导致柱子内填料的溶解或键和相流失，此外，样品前处理不好也会使柱子很快损坏。

十四、峰前沿、拖尾等峰形不好

（1）柱效测试标样峰形差：基本原因都是平衡时间不够引起，建议您平衡时间需达到第一部分我们推荐的时间。此外，还有系统原因，可建议您换一台再测试或寄回测试。

（2）样品峰形差：如果柱效测试峰形很好，但是测试样品峰形差，排除平衡时间等问题后，基本是由于样品性质所引起，如一些碱性样品会有拖尾现象，但是降低流动相pH值会有改善。

十五、寿命短

根据不同系列的柱子或不同的测试条件，寿命长短各有不同。建议您选择性能稳定、质量有保证的品牌。

  1.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？

①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

③可能柱超载，减少进样量。

2.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法是什么？

①样品量不足，解决办法为增加样品量

②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器

④检测器衰减太多。调整衰减即可。

⑤检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数

⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。

⑦检测池中有气泡。解决办法为排气。

⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。

⑨流动相流量不合适。调整流速即可。

⑩检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

3.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？

①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；

②比例阀失效，更换比例阀即可；

③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；

④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；

⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；

⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

4.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？

柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因：

①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；

②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；

③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。

④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。

5.色谱柱中的流动相会排干吗？

不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。

相比之下，另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如，经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。

6.为何出现峰展宽？

①样品体积过大——用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%

②在进样阀中造成峰扩展——进样前后排出气泡以降低扩散

③数据系统采样速率太慢——设定速率应是每峰大于10点

④检测器时间常数过大——设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%

⑤流动相粘度过高——增加柱温,采用低粘度流动相

⑥检测池体积过大——用小体积池,卸下热交换器

⑦保留时间过长——等度洗脱时增加强溶剂含量,也可用梯度洗脱

⑧柱外体积过大——将连接管径和连接管长度降至最小

⑨样品过载——进小浓度小体积样品

7.除了在线脱气，常用的实验室脱气方式还有哪些？

加热回流脱气，脱气效果最佳，但无法保持；氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多；真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失；超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中最常用。目前还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好。

8.如何简单判断比例阀是否内漏？

设定泵使用一个单独通路（A），打开Purge阀，流速5mL/min，提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面，观察这些通路（B、C、D）内的溶剂是否随着流动，正常时均不应流动。

Ⅷ LC－2010A液相色谱仪提示使用了不同的样品架故障并提示219F是怎么回事

岛津LC2010A操作说明书

记得以前出现这个问题是样品盘没有放好或者放错的。可以检查一下软件，进样器部门会有一个样片架的选择，如果选择错了也会报错，还会发生进样针扎到样品架上的情况，一定要检查好了再使用。如果不好排查，可以更换一个以前的方法进行测试。这样可以排除是不是软件设置的缘故。上面分享给你一个操作说明。

仅供参考

ps：如果还没有解决可以追问我，我们实验室也有这个设备，我可以帮你问问工程师

Ⅸ 高效液相色谱仪自动进样器Z轴上下方位置错误,如何解决

打电话。苏会不会很

Ⅹ 请问谁知道使用液相色谱仪的应注意的事项

HPLC用水来源

1 专门的纯水机或超纯水机；
2 去离子水重蒸；
3 二次或三次重蒸水；
4 采用类似家用的纯水机；
5 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水；
6 其它途径
以上的水除第1项的水能用于梯度淋洗外，其余的水均难用于梯度淋洗。不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质越高放置时间越短。
理想的HPLC用水应为18.2MΩ的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。
最小检测限的计算方法

（以N2000色谱工作站为例）
CL=2*Nd*c*20/HV
注：Nd 基线噪声，单位：mV
c 样品浓度
H 峰高，单位：mV（或AU）
V 进样体积
例：
如基线噪声为20微伏即0.02mV，萘的甲醇标样溶液浓度为0.0001g/L，峰高145000微伏即145mV，进样体积为20微升，即得：
CL=2*0.02*0.0001*20/145*20=2.76e-8
即10的负8次方

对仪器进行维护时应该遵循的几条基本规则

1. 一次规则
当系统出了故障，你可以试探性地改变某些状态，一次可以改变一个参数。例如，限制色谱峰脱维的问题，可以依次改变流动相，换保护柱，换分析柱等。做一些简单的改变步骤，也许就能解决问题。
2. 二次比较规则
在动手检修之前已经明确了故障所在，或者已经确定了解决故障的方案。换句话说，动手之前已经找对了解决办法。例如，在进样过程中发现内标物的峰值变低了，可以重复进样看看重复性如何，如果是偶然变低，是否是定量管里进了气泡。这个规则可用于考察系统改变后的情况。更换了流动向后在正式进样前可以进两次标准品以检查保留时间的稳定情况和色谱峰的稳定性。在梯度洗脱中如果出现了多余的峰，可以空载梯度洗脱一次（真的有问题吗？），用此规则可以避免不必要的改变，尽快确定纠正措施。
3. 取代规则
用好的部件换下可疑的部件，是查找故障的最好方法。如果你怀疑检测器引起了噪音，就换一个性能好的检测器。如果故障被排除了，就说明换下的检测器有问题。这个规则应用的规模有大有小，可以从换整个部件到换印刷线路板上的集成块。
4. 换回规则
这个规则和取代规则一起运用，好部件取代了可疑部件后情况并未得到改善，应重新换上原部件。这样做的维修费用最小，也防止了用过的部件积压下来。这条规则仅适用于单一的故障。换回原则不适用于以下的情况：
（1） 在取下时新部件已损坏（如泵密封垫圈）；
（2） 部件价格低（如柱内衬过滤片）；
（3） 重新装上原部件要冒损坏的风险；
（4） 定期更换的部件。
5. 参考条件规则
通常有两种参考条件：①标准参考条件；②试验参考条件。
标准参考条件也叫标准试验条件，是从一个系统到另一个系统，从一个实验室到另一个实验室都易于验证的条件。用该条件所测得的数据有助于识别实际试验和系统间的问题。如果在某试验条件下系统压力升高，而在标准条件下压力正常。这说明系统异常是由实验室的变化所引起的。下表列举了启用新色谱柱是的标准试验条件，在使用过程中也可用此标准试验条件检查系统的情况。
流动相 甲醇/水（体积比=70/30）
色谱柱 C18
反相 流速 1mL/min
检测器 UV 254nm
样品 尿嘧啶（用于t0）
苯酚，苯乙酮，硝基苯，苯甲醚，甲苯

流动相 正己烷/异丙醇（体积比=75/25）
色谱柱 腈基
极性键合相 流速 1mL/min
检测器 UV 254nm
样品 硝基苯，苄醇，2,4-二硝基甲苯，对硝基苄醇

流动相 正己烷/二氯甲烷/异丙醇胺（体积比=95/4/1）
色谱柱 硅胶
正相 流速 1mL/min
检测器 UV 254nm
样品 2-苯-2-丙醇，甲苄醇，肉桂醇
试验参考条件是用于检查正常系统每天的工作情况。要选最方便的方法验证这种条件。每天可以打印两张校正用色谱图作对照，检查保留时间、峰宽、系统压力等方面的变化。发现峰的斜率、色谱柱塔板数和其他参数与原来色谱图相比有了变化，说明系统在运行中可能发生了问题。当然发生问题不结合实际分析程序考虑，只通过查找标准参考色谱图是不能一目了然的。
6. 记录规则
这条规则往往被人忽视。应该在每次维护和故障排除后都作记录。例如，对系统的某一特定故障因为没作记录就不可能系统地分析问题，费时又费力。从长远挂点看，系统发生的特定故障对今后的操作也有极其重要的意义。每台仪器都应备有维修记录本，内容包括日期、故障部位、现象、产生的原因、解决的办法和结果等。还有一点要注意，试过或换下的部件都要贴上标志。
做好维修保养记录有如下好处：
（1） 让所有的操作人员都知道发生了什么故障，在操作过程中以引起注意；
（2） 帮助操作人员描述故障现象；
（3） 当再次发生故障时可根据资料尽快解决问题。
7. 预测规则
有维修实践和保养习惯的人员应能够预测系统的故障，平时在保养方面多投入些时间，系统会以减少故障作为报答，同时也消除了连锁性的损坏。例如，平时不注意保养，泵的密封垫圈坏了，造成流动相渗漏，会腐蚀泵和其它部件。善于保养能节约时间和金钱，而不是仪器控制了操作人员。例如，每天开始工作或结束工作时发现灯寿命引起基线漂移就把灯换下来。如果等到灯全坏了，就需要停机，造成的损失可能比一个灯的费用还要高。
8. 缓冲液规则
这条规则提醒你停机时一定要洗净系统中的缓冲物。系统中的缓冲物的残余会造成磨损、腐蚀和阻塞。另外，生理缓冲液极易受到细菌和霉菌的影响。理想的冲洗液是不含缓冲物的相同组成的流动相。不要让纯水储藏于系统中，以防生长细菌。可在水中加入10%的有机溶剂或0.02~0.05%的叠氮化钠。在实验室中应按如下程序冲洗：用纯水冲洗30~60min(1mL/min)再用甲醇冲洗30min后关机。千万不能一开机就用有机溶剂冲洗，否则无机盐就`会沉淀在系统中，造成不良后果。

HPLC日常维护办法之一：压力异常

操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。

A、 没有压力显示，没有流动相流动
原 因 解决方法

1Q、电源问题 1A、接通电源，开机

2Q、保险丝被烧坏 2A、更换保险丝

3Q、控制器设定不正确或设定失败 3A、a、采取恰当的设定 b、修理或更换控制器

4Q、柱塞杆折断 4A、更换柱塞杆

5Q、泵头内有空气 5A、溶剂脱气、启动泵抽出空气

6Q、流动相不足 6A、a、补充流动相b、更换入口滤头

7Q、单向阀损坏 7A、更换单向阀

8Q、漏液 8A、拧紧或更换手紧接头

B、 流动相流动正常，但没有压力显示
原 因 解决方法

1Q、仪表损坏 1A、更换仪表

2Q、压力传感器损坏 2A、更换压力传感器

C、 压力持续偏高
原 因 解决方法

1、流速设定过高 1、调整流速设定

2、柱前筛板堵塞 2、a、在允许情况下反冲色谱柱 b、更换筛板c、更换色谱柱

3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀 3、a、使用恰当的流动相b、冲洗色谱柱

4、色谱柱选择不当 4、选择恰当的色谱柱

5、进样阀损坏 5、清洗或更换进样阀

6、柱温过低 6、提高温度

7、控制器失常 7、修理或更换控制器

8、保护柱阻塞 8、清洗或更换保护柱

9、在线过滤器阻塞 9、清洗或更换在线过滤器

D、 压力持续偏低
原 因 解决方法

1、流速设定过低 1、调整流速

2、系统漏液 2、确定漏液位置并维修

3、色谱柱选择不当 3、选择恰当的色谱柱

4、柱温过高 4、降低温度

5、控制器失常 5、维修或更换控制器

E、 压力不断上升
原 因 解决方法

1、见列表C 1、见列表C

F、 压力降为零
原 因 解决方法

1、见列表A、B 1、见列表A、B

G、 压力不断下降，但不回零
原 因 解决方法
1、见列表D 1、见列表D

H、 压力波动
原 因 解决方法

1、泵中有气体 1、a、溶剂脱气b、从泵中除去气体

2、单向阀损坏 2、更换单向阀

3、泵密封损坏 3、更换泵密封

4、脱气不充分 4、a、溶剂脱气b、改变脱气方法（使用在线脱气法等）

5、系统漏液 5、确定漏液位置并维修

6、使用梯度洗脱 6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动

HPLC日常维护办法之二：漏液

通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。

A、 接头处漏液
原 因
解决方法

1、接头松动
1、拧紧

2、接头磨损
2、更换

3、接头过紧
3、a、拧松，再重新拧紧

b、更换

4、接头被污染
4、a、拆下清洗

b、更换

5、部件不匹配
5、使用同一品牌的配件

B、 泵漏液
原 因
解决方法

1、单向阀松动
1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧）

b、更换单向阀

2、接头松动
2、拧紧接头（不必拧的过紧）

3、混合器密封损坏
3、a、更换混合器密封

b、更换混合器

4、泵密封损坏
4、维修或更换泵密封件

5、压力传感器损坏
5、维修或更换压力传感器

6、脉冲阻尼器损坏
6、更换脉冲阻尼器

7、比例阀损坏
7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换

b、检查手紧接头，损坏的立即更换

8、放空阀的损坏
8、a、拧紧放空阀

b、更换放空阀

C、 进样阀漏液
原 因
解决方法

1、转子密封损坏
1、重新安装或更换进样阀

2、定量环阻塞
2、更换定量环

3、进样口密封松动
3、调整

4、进样针头尺寸不合适
4、使用恰当的进样针

5、废液管中产生虹吸
5、保持废液管高于废液液面

6、废液管阻塞
6、更换或疏通废液管

D、 色谱柱漏液
原 因
解决方法

1、尾端接头松动
1、拧紧接头

2、卡套内有填料
2、拆下、清洗卡套、重新安装

3、筛板厚度不合适
3、使用合适的筛板（参考下表）

筛板选择指导

物质粒径
筛板孔径

3-4u
0.5u

5-20u
2u

E、 检测器漏液
原 因
解决方法

1、流通池垫片损坏
1、a、避免过大的背景压力（压力降）

b、更换垫片

2、流通池窗破碎
2、更换窗口

3、手紧接头漏液
3、拧紧或更换

4、废液管阻塞
4、更换废液管

5、流通池阻塞
5、重新安装或更换

HPLC日常维护办法之三：谱图的各种问题

液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A、 峰拖尾
原 因
解决方法

1、筛板阻塞
1、a、反冲色谱柱

b、更换进口筛板

c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷
2、填充色谱柱

3、干扰峰
3、a、使用更长的色谱柱

b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误
4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

图
5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂

b、更改色谱柱

B、 峰前延
原 因
解决方法

1、柱温低
1、升高柱温

2、样品溶剂选择不恰当
2、使用流动相作为样品溶剂

3、样品过载
3、降低样品含量

4、色谱柱损坏
4、见A1、A2

C、 峰分叉
原 因
解决方法

1、 保护柱或分析柱污染

图
1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相
2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

D、 峰变形
原 因
解决方法

1、样品过载
1、减少样品载量

E、 早出的峰变形
原 因
解决方法

1、样品溶剂选择不恰当
1、a、减少进样体积

b、运用低极性样品溶剂

F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原 因
解决方法

1、柱外效应
1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）

b、使用小体积的流通池

G、 K’增加时，脱尾更严重
原 因
解决方法

1、二级保留效应，反相模式
1、a、加入三乙胺（或碱性样品）

b、加入乙酸（或酸性样品）

c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）

d、更换一支柱子

2、二级保留效应，正相模式
2、a、加入三乙胺（或碱性样品）

b、加入乙酸（或酸性样品）

c、加入水（或多官能团化合物）

d、试用另一种方法

3、二级保留效应，离子对
3、加入三乙胺（或碱性样品）

H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾
原 因
解决方法

1、缓冲不合适
1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液

b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

I、 额外的峰
原 因
解决方法

1、样品中有其他组份
1、正常

2、前一次进样的洗脱峰
2、a、增加运行时间或梯度斜率

b、提高流速

3、空位或鬼峰
3、a、检查流动相是否纯净

b、使用流动相作为样品溶剂

c、减少进样体积

J、 保留时间波动
原 因
解决方法

1、温控不当
1、调好柱温

2、流动相组分变化
2、防止变化（蒸发、反应等）

3、色谱柱没有平衡
3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱

K、 保留时间不断变化
原 因
解决方法

1、流速变化
1、重新设定流速

2、泵中有气泡
2、从泵中除去气泡

3、流动相选择不恰当
3、a、更换合适的流动相

b、选择合适的混合流动相

L、 基线漂移
原 因
解决方法

1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）
1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器

图

2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）
2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体
3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）

4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）
4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化
5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时
6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
10、将波长调整至最大吸收波长处

M、 基线噪音（规则的）
原 因
解决方法

1、在流动相、检测器或泵中有空气
1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液

图
2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。

3、流动相混合不完全
3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）
4、减少差异或加上热交换器

5、在同一条线上有其他电子设备
5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

6、泵振动
6、在系统中加入脉冲阻尼器

N、 基线噪音（不规则的）
原 因
解决方法

1、 漏液

图
1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成
2、检查流动相的组成。

3、流动相各溶剂不相溶
3、选择互溶的流动相

4、检测器/记录仪电子元件的问题
4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。

5、系统内有气泡
5、用强极性溶液清洗系统

6、检测器内有气泡
6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器

7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）
7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池

8、检测器灯能量不足
8、更换灯

9、色谱柱填料流失或阻塞
9、更换色谱柱

10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常
10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置

O、 宽峰
原 因
解决方法

1、流动相组成变化
1、重新制备新的流动相

2、流动相流速太低
2、调节流速

3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）
3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。

4、检测器设定不正确
4、调整设定

5、柱外效应影响

a、柱子过载

b、检测器对反应时间或池体积响应过大

c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大

d、记录仪响应时间太长

图
5、

a、 小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品

b、减少响应时间或使用更小的流通池

c、 使用内径为0.007-0.01的短管路

d、减少响应时间

6、缓冲液浓度太低
6、增加浓度

7、保护柱污染或失效
7、更换保护柱

8、色谱柱污染或失效，塔板数较低
8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。

9、柱入口塌陷
9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子

10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰
10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果

11、柱温过低
11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃

12、检测器时间常数太大
12、使用较小的时间常数

P、 分离度降低
原 因
解决方法

1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）
1、重新配置流动相

2、保护柱或分析柱阻塞

图
2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。

Q、 所有的峰面积都太小
原 因
解决方法

1、检测器衰减设定过高
1、减少衰减的设定

2、检测器时间常数设定太大
2、设定较小的时间常数

3、进样量太少
3、增大进样量

4、记录仪连接不当
4、使用正确的连接

R、 所有的峰面积都太大
原 因
解决方法

1、检测器衰减设定过低
1、采取较大的衰减

2、进样过多
2、减少进样量

3、记录仪连接不正确
3、正确连接记录仪

HPLC日常维护办法之四：进样阀的问题

以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。

A、 手动进样阀，转动不灵
原 因
解决方法

1、转子密封损坏
1、更换或调整转子密封

2、转子太紧
2、调整转子的松紧度

B、 手动进样阀，载样困难
原 因
解决方法

1、进样阀安装不当
1、重新安装

2、定量环阻塞
2、清洗或更换定量环

3、进样器污染
3、清洗或更换进样器

4、管路阻塞
4、清洗或更换管路

C、 自动进样阀，不能转动
原 因
解决方法

1、无压力（或电源）
1、提供恰当的压力（电源）

2、转子太紧
2、调整转子的松紧度

3、进样阀安装不当
3、重新安装

D、 自动进样阀，其它问题
原 因
解决方法

1、阻塞
1、清洗或更换阻塞部件

2、机械故障
2、见随机维修手册

3、控制器故障
3、维修或更换控制器

HPLC日常维护办法之五：由气味、景象和声音可以发现的问题

由气味、景象和声音可以发现的问题

你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。

A、 溶剂的气味
原 因
解决方法

1、漏液
1、见section 3

2、溅出
2、a、检查废液瓶是否已满

b、找到溅出的部位并清洗干净

B、 热气味
原 因
解决方法

1、仪器过热
1、a、检查并调节通风设施

b、检查并调节温度设定

c、关掉仪器，查找维修手册

C、 读数不正常
原 因
解决方法

1、压力不正常
1、见section 2

2、柱温箱问题
2、

a、检查并调节设定

b、参照用户手册

3、检测器灯失效
3、更换灯

D、 灯警告
原 因
解决方法

1、压力超出极限值
1、

a、检查是否阻塞

b、检查并调节极限值的设定

2、其它警示灯
2、见用户手册

E、 警告音
原 因
解决方法

1、溶剂泄漏/溅出
1、找到并解决

2、其它警告音
2、见用户手册

F、 刺耳的短音或长音
原 因
解决方法

1、轴承失效
1、见用户手册

2、润滑不够
2、进行恰当的润滑

3、机械故障
3、见用户手册

HPLC日常维护办法之六：常见故障及日常维护

常见故障及日常维护

下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。用户手册则提供您更多的维护方法。

溶剂瓶

问 题
维 护

1、进口筛板阻塞
1、

a、更换（3-6个月）

b、过滤流动相，0.5u滤膜

2、气泡
2、流动相脱气

泵

问 题
维 护

1、气泡
1、流动相脱气

2、泵密封损坏
2、更换（3个月）

3、单向阀损坏
3、过滤流动相，运用在线过滤，准备备用单向阀

进样阀

问 题
维 护

1、转子密封损坏
1、

a、不要拧的过紧

b、过滤样品

色谱柱

问 题
维 护

1、筛板阻塞
1、a、过滤流动相

b、过滤样品

c、运用在线过滤或保护柱

2、柱头塌陷
2、a、避免使用PH>8的流动相（针对大部分硅胶的柱子）

b、使用保护柱

c、使用预柱（饱和色谱柱）

检测器

问 题
维 护

1、灯失效，检测器响应降低，噪音增大
1、更换（6个月）或准备备用灯

2、流通池有气泡
2、a、保持流通池清洁

b、池后使用反压抑制器

c、流动相脱气

一般

问 题
维 护

1、腐蚀/摩擦损坏
1、在不使用时保持系统缓冲液的清洁