化合物与蛋白结合的方法有哪些

㈠ 哪些物质可以合蛋白质交联

交联剂是一类小分子化合物，分子量一般在200-600之间，具有2个或者更多的针对特殊基团（氨基、巯基等）的反应性末端，可以和2个或者更多的分子分别偶联从而使这些分子结合在一起。在生命科学研究中，巧妙地运用交联剂可以使很多工作取得突破。
· 种类最多，成熟的产品多达86种，可以满足各种偶联需要。
· 生理条件下即可共价交联，交联反应快速简便。
· 多种反应性基团可供选择，反应指向既可以有专一性也可以无专一性。
· 含有不同长度的间臂，有效地降低空间位阻效应。
· 部分产品内置可裂解基团，大大增强了交联剂应用的灵活性。
交联剂的应用
交联剂已经被广泛地应用于：细胞膜结构研究，蛋白质结构研究，蛋白质间相互作用研究，生物导弹研究，载体蛋白与半抗原的连接，蛋白质或其他分子的固相化，抗体的标记，标记转移，蛋白质与核酸的连接。

㈡ 外来化合物与血浆蛋白结合以什么键

是外来化合物在体内运输的过程。外来化合物进入血液之后往往与血浆蛋白，尤其是血浆白蛋白结合。这种结合是可逆的，可以视为外来化合物在体内分布运输的一个过程。

㈢ 生物样品中蛋白质的处理方法有哪些

一。蛋白质沉淀方法
1.中性盐盐析法
⑴在一定的
ph值及温度条件下，改变盐的浓度（即离子强度）达到沉淀的目的，称为“ks”分级盐析法。
（ks盐析：固定ph,
温度，改变盐浓度）
⑵在一定的离子强度下，改变溶液的ph值及温度，达到沉淀的目的，称为“β”分级盐析法。
（β盐析：固定离子强度，改变ph及温度。）
2.等电点沉淀法
蛋白质等电点沉淀法是基于不同蛋白质离子具有不同等电点这一特性，依次改变溶液ph值的办法，将杂蛋白沉淀除去，最后获得目标产物。
3.有机溶剂沉淀法
许多能与水互溶的有机溶剂如乙醇、丙酮、甲醇和乙腈，常用于低盐浓度下沉淀蛋白质。
4.非离子型聚合物沉淀法
20世纪60年代非离子型聚合物开始用于分离血纤维蛋白原和免疫球蛋白，从此高相对分子质量非离子聚合物沉淀蛋白质的方法被广泛使用，如：聚乙二醇（peg）、聚乙烯吡咯烷酮（pvp）、葡聚糖等。
5.金属沉淀法
能与羧基、胺基等含氮化合物以及含氮杂环化合物强烈结合的金属离子，如：mn2+、fe2+、co2+、ni2+、cu2+、zn2+、cd2+；
能与羧酸结合而不与含氮化合物结合的金属离子，如：ca2+、ba2+、mg2+、pb2+；
与巯基化合物强烈结合的金属离子，如：hg2+、ag+、pb2+。
实际使用时，金属离子的浓度常为0.02
mol/l。
6.亲和沉淀
初始阶段：将一个目标蛋白质与键合在可溶性载体上的亲和配体络合成沉淀；
所得沉淀物用一生中适当的缓冲溶液进行洗涤，洗去可能存在的杂质；
用一种适当的试剂将目标蛋白质从配体中离解出来。
7.选择性变性沉淀法
（1）例如对于α-淀粉酶等热稳定性好的酶，可以通过加热进行热处理，使大多数杂蛋白受热变性沉淀而被除去。
（2）根据欲分离物质所含杂质的特性，通过改变ph值或加进某些金属离子等使杂蛋白变性沉淀而被除去。
8.反胶束萃取蛋白质
菌体细胞提取
固液分离是生物产品生产中的重要单元操作。培养基、发酵液、某些中间产品和半成品等都需进行固液分离。发酵液由于种类多、粘度大及成分复杂，其固液分离最为困难。
固液分离的方法很多，生物工业中常规的方法有分离筛、重力沉降、浮选分离、离心分离和过滤等，其中用于发酵液固液分离的方法主要是离心分离和过滤。
二。超滤膜滤去。

㈣ 怎么验证某个蛋白跟某个化合物有结合能力

把鸡蛋清和你要验证的化合物放一起搅，有沉淀或者凝固了就是有结合

㈤ 怎么判断化合物与蛋白是共价结合

ClO2 是共价化合物。

实验区分，就是看化合物在熔融状态下是否导电，导电的是离子化合物，不导电的是共价化合物。
但是不能每次判断都做实验的啊，因此直接看化合物的化学式吧
一般说来，化合物的化学式中含有活泼金属或者铵根NH4的，就是离子化合物，（少量例外如AlCL3是共价）
否则就是共价化合物，
这个方法比较有效，简单 。

㈥ 抗体怎么和另外的一个蛋白质偶联

我曾经做过小分子和蛋白质的偶联，有一些自己总结的综述，你可以参考以下：
人工抗原合成常用的载体
载体表面应首先应具有化学活性基团，这些基团可以直接与抗生素(antibiotic)或农药分子偶联，这是化学偶联制备抗原的前提；其次，载体应具备一定的容量，可以偶联足够的分子；载体还应该是惰性的，不应干扰偶联分子的功能；而且载体应具有足够的稳定性，且应该是廉价易得的。
常用来作为合成人工抗原的载体蛋白质有牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。这些蛋白质分子中的α和ε-氨基（等电点8和10）、苯酚基、巯基（等电点为9）、咪唑基（等电点为7）、羧基（等电点2～4，大部分来自天冬氨酸或谷氨酸的β-和γ-羧基）等在等电点pH条件下，一部分成为质子，另一部分未质子化的亲核基团则具有反应活性，可与半抗原中的对应基团结合。当然，这些基团的反应性也取决于蛋白质各种氨基酸残基的微环境。牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HAS）分子中含有大量的赖氨酸，故有许多自由氨基存在，且在不同pH和离子强度下能保持较大的溶解度。此外，这些蛋白质在用有机溶剂（如吡啶、二甲基甲酰胺）溶解时，其活性基团仍呈可溶状态，因此，这两种蛋白质是最常用的载体蛋白质[30]。近年来，有研究报道用人工合成的多聚肽(最常用的是多聚赖氨酸)作载体，表现出能增加半抗原的免疫原性，从而使产生征对半抗原的特异性抗体可能性增加，被广泛应用[31，32]。
1.2.2人工抗原合成方法
小分子半抗原与载体蛋白偶联效果会受到偶联物的浓度及其相对比例、偶联剂的有效浓度及其相对量、缓冲液成分及其纯度和离子强度、pH以及半抗原的稳定性、可溶性和理化特性等因素的影响。通常是在条件温和的水溶液中将半抗原与载体蛋白共价结合，不宜在高温、低温、强碱、强酸条件下进行。一般是由半抗原上的活性基团决定偶联合成的方法，常用的方法如下：
1.2.2.1分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶联
1）混合酸酐法（mixed anhydride method）：也称氯甲酸异丁酯法。半抗原上的羧基在正丁胺存在下与氯甲酸异丁酯反应，形成混合酸酐的中间体，再与蛋白质的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物
2）碳二亚胺法（CDI）：碳二亚胺(EDC)使羟基和氨基间脱水形成酰胺键，半抗原上的羧基先与EDC反应生成一个中间物，然后再与蛋白质上的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物（见图1.5）。EDC被称作零长度交联剂之一，因为它作为酰胺键的形成介质并没有形成手臂分子。
此连接方法十分简便，只需将载体蛋白质和抗原按一定比例混合在适当的溶液中，然后加入水溶性碳化二亚胺，搅拌1～2h，置室温24h，再经透析即可。如果半抗原分子中不含羧基，可通过某些化学反应引入羧基。在引入羧基后，也可用上述方法进行偶联。
1.2.2.2含有氨基或可还原硝基半抗原的偶联
1）戊二醛法：双功能试剂戊二醛的两个醛基分别与半抗原和蛋白质上的氨基形成schiff键(-N=C<，在半抗原和蛋白质间引入一个5碳桥。这一反应条件温和，可在4～40℃及pH6.0～8.0内进行，操作亦简便，因此应用广泛。戊二醛受到光照、温度和碱性的影响，可能发生自我聚合，减弱其交联作用，因此最好使用新鲜的戊二醛。
2）重氮化法：用于活性基团是芳香胺基的半抗原，芳香胺基与NaNO2和HCl反应得到一个重氮盐，它可直接接到蛋白质酪氨酸羧基的邻位上，形成一个偶氮化合物（见图1.6）。
1.3.2.3含羟基半抗原的偶联
1）琥珀酸酐法：半抗原的羟基与琥珀酸酐在无水吡啶中反应得到一个琥珀酸半酯(带有羧基的中间体)，再经碳二亚胺法或混合酸酐法与蛋白质氨基结合，在半抗原与蛋白质载体间插入一个琥珀酰基（图1.7）。
2）羰基二咪唑法：N，N’-羰基二咪唑是引入羰基的高活性试剂，在肽合成中首次表明了是形成极好的酰胺键试剂[33]。含羟基的分子同羰基二咪唑反应，形成中间体咪唑基甲酸酯，它能和N-亲核试剂反应，得到N-烷基化的甲酸酯键，通常蛋白质通过N-端(α-氨基)和赖氨酸侧链的(ε-氨基)和分子形成不带电的类似尿烷的衍生物，具有极好的化学稳定性。
1.2.3影响人工抗原质量的因素
人工抗原免疫原性的好坏，与多种因素有关。对不同的物质，影响免疫原性的因素并不完全相同，常常需要在得到抗体后对免疫偶合物的具体合成方法进行重新调整。但总的说来，影响人工抗原质量的因素主要有：
1) 偶联比
偶联比过去人们认为，联接到蛋白质分子上的半抗原数目要尽可能多。但实验证明，过多的半抗原并不能得到预期的结果，这是因为载体上覆盖的半抗原分子过多时，可能不利于载体与淋巴细胞表面结合，不能使载体引起免疫反应。实际上，每个载体分子连接上一个半抗原分子就足以产生抗体。有人认为，以BSA为例，连接到蛋白分子上的半抗原数以5～20为宜。而荣康泰等用不同的载体制备对氧磷的人工抗原时，却发现各种载体的分子量不论是否接近，最佳结合比都不尽相同，并建议为了取得最佳免疫效果，应逐个确定各种载体的最佳结合比。
2) 偶联桥
有研究者认为，一定长度的手臂的介入，有助于半抗原暴露在外面，利于所产生抗体专一性的增强，如吴颂如等［34］发现，通常愈远离载体蛋白的基团，其特征反应愈明显。但也有一些研究者发现，手臂结构对免疫检测经常有不利的影响，有时产生的抗体对手臂结构亲和力特别强，对待测小分子亲和力却很弱，因此造成对特异性抗体检测的干扰。Sionf等［35］认为可以采取两种方法来避免因偶联桥而造成的不足：一是半抗原上相同位点结合蛋白质，但免疫原和包被抗原用不同的偶联桥；二是免疫原和包被抗原用相同的偶联桥，但与不同半抗原位点结合。Frieia［36］研究农药酶免疫分析多年，他认为最好的偶联桥是3～6个直链的碳原子结构。
3）半抗原的分子空间结构
用来作半抗原的分子最好有分支结构，直链分子难以产生抗体。此外，有些抗生素(antibiotic)或农药有多个可供蛋白质偶联的位点，但据研究报道，不同位点与蛋白质结合制备的人工抗原产生的抗体效价及亲合力都有差别，这可能是因为不同位点结合导致半抗原呈现的空间结构不一样的原因。如合成灭草松和吡虫啉人工抗原时，当利用半抗原不同位点与载体结合时产生的抗体效价和亲合力明显不一样[37、38]。因此，如果一个分子内有多个不同的结合位点时，最好尽可能利用不同位点都合成出人工抗原，然后，通过比较，筛选出最好的人工抗原用于制备抗体作为检测。
1.2.4人工抗原的质量评定
1.2.4.1浓度测定
人工抗原的绝对含量常以蛋白质的相对浓度表示（如每ml抗原溶液中含有蛋白质多少mg）。因此测定人工抗原的浓度与测定人工抗原溶液中蛋白质的相对含量（mg/ml）是一致的（这里也反映出人工抗原越纯，检出的浓度值愈准确）。常用的方法有紫外吸收法、Folin-酚法、双缩脲法、微量凯式定量法、染色结合法和荧光法等。这里就不一一介绍了。

1.2.4.2纯度鉴定和结构分析
鉴定农药人工抗原最常用的方法是紫外光谱扫描法，如果人工抗原的紫外吸收图谱不同于原载体蛋白和半抗原的紫外扫描图谱，则可初步证明人工抗原合成成功。
半抗原与载体分子反应后是否真正的连接在一起，如果发生连接，它们的连接基团又在哪里。这些问题可以通过红外吸收光谱图或质谱分析得到解决。
利用吸附与分配层析和电泳技术可鉴定人工抗原的偶联的纯度。前者适应范围广，但鉴别的灵敏度较低。后者是用于大分子大分子酶标记物和某些半抗原偶联物的纯度鉴定。如果电泳图谱上只出现一条电泳带，则表明人工抗原达到电泳纯，否则说明人工抗原中含有有利的未偶联的物质。

1.2.4.3偶联比的测定
1）分光光度法
根据赵肃清等人的说法［39］，如果半抗原的紫外最大吸收大于220nm(蛋白质在220nm以下会产生肽的强紫外吸收，如果半抗原的紫外最大吸收少于220nm，则与蛋白质肽的吸收发生重叠)，则可根据蛋白质及其半抗原特定的吸收峰的光密度值和各自的摩尔消光系数，计算出结合到每个蛋白质分子上的半抗原分子数（可以参考文献[30]中的279-283页计算）。
2）标记抗原示踪法
在制备半抗原-蛋白质结合物时，向反应液中同时加入一定量的标记半抗原，反应完成后，未结合的半抗原经透析除去，测定透析前后的放射性强度，就可以计算出结合百分比。再依反应时加入的蛋白质摩尔数即可知半抗原结合到蛋白质上的分子数。如果不用透析，也可取一定量反应后的溶液，加入蛋白质沉淀剂或有机溶剂以提取结合的半抗原，测定半抗原-蛋白质结合物的放射性。同样可以计算出半抗原与蛋白质的偶联比。

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㈦ 蛋白质分离纯化的四种方法

1、盐析法：

盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

2、有机溶剂沉淀法：

有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。

3、蛋白质沉淀剂：

蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。

4、聚乙二醇沉淀作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。

(7)化合物与蛋白结合的方法有哪些扩展阅读：

蛋白质是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。

机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20% ，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。

人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸（Amino acid）按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。

㈧ 什么是结合蛋白,都有哪些结合蛋白

1.什么是结合蛋白：

定义：结合蛋白质的分子中除氨基酸组分之外，还含有非氨基酸物质，二者以共价或非共价形式结合，往往作为一个整体从生物材料中被分离出来。而结合蛋白质是单纯蛋白质和其他化合物结合构成，被结合的其他化合物通常称为结合蛋白质的非蛋白部分。

2 结合蛋白有哪些：结合蛋白质主要分为以下种类。

按其非蛋白部分的不同而分为：

▲核蛋白(含核酸)、2糖蛋白(含多糖)、3脂蛋白(含脂类)、4磷蛋白(含磷酸)、5金属蛋白(含金属)及6色蛋白(含色素)等6种。

1. 核蛋白：蛋白质与核酸结合，核蛋白存在于组织胚芽和人体腺体组织中。

2. 粘蛋白或糖蛋白：含有碳水化合物如甘露糖和半乳糖的蛋白质，人体细胞组织分泌的粘液含有粘蛋白。

3. 脂蛋白：溶于水，是脂肪与蛋白质结合，脂蛋白是人体在体内运输脂肪的工具。包括乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。
   

4. 卵磷蛋白：蛋白质与卵磷脂相结合，如血液中的纤维蛋白、卵黄磷蛋白。

5. 金属蛋白：蛋白质与金属结合，如运铁蛋白、铜锌结合蛋白，有很多种酶类都含有金属离子。

6. 色蛋白：蛋白质和色素物质结合，如血红蛋白。

㈨ 如何检验靶点蛋白与化合物能否结合

蛋白水平几个assay先测一下，或者是再加上细胞水平，用pulldown实验，在小分子上面适当部位接上biotin，不影响活性的基础上，看看能不能把靶向蛋白拉到。
或者有条件的可以用核磁共振来鉴定。