⑴ 植物dna提取的原理和方法其中乙醇和氯仿一异成醇各起什么作用
植物DNA提取方法是采用CTAB法。
CTAB，是一种阳离子去污剂,能与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7mol/L) 浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1～0.5mol/L NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。经离心弃上清后,CTAB-核酸复合物再用70%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。
无水乙醇：沉淀DNA。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。
氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
⑵ 植物DNA提取的原理和方法是什么
原理就是去掉植物细胞壁
细胞膜
质体
线粒体
叶绿体
剩下细胞核了。就是DNA了。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。
十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl
ammomum
bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium
dodecyl
sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液
⑶ 植物DNA提取
原理是一致的。方法不同。
1
植物组织
提取基因组DNA
一、材料
幼嫩叶子。
二、设备
移液器
，
冷冻高速离心机
，
台式高速离心机
，
水浴锅
，陶瓷
研钵
，50ml
离心管
（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小
玻棒
。
三、试剂
1、提取
缓冲液
Ⅰ：100mmol/L
Tris·Cl,
pH8.0,
20mmol/L
EDTA,
500mmol/L
NaCl,
1.5%
SDS。
2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g
二乙基二硫
代
碳酸钠
，6.0gPVP，240ul
巯基乙醇
，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:
戊醇
:乙醇
4、
RnaseA
母液
5、其它试剂：
液氮
、
异丙醇
、
TE缓冲液
，
无水乙醇
、70%乙醇、3mol/L
NaAc。
四、操作步骤：
1.
在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ,
60℃水浴预热。
2.
幼苗或叶子5-10g,
剪碎,
在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中,
剧烈摇动混匀,
60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高),
不时摇动。
3.
加入20ml氯仿/戊醇/
乙醇溶液
,
颠倒混匀(需带手套,
防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟,
使水相和
有机相
分层(必要时可重新混匀)。
4.
室温下5000rpm离心5分钟。
5.
仔细移取
上清液
至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6.
在1.5ml
eppendorf
中加入1ml
TE。用钩状
玻璃棒
捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。
7.
如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟,
再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。
8.
将DNA溶液
3000rpm
离心5分钟,
上清液倒入干净的5ml离心管。
9.
加入5μl
RNaseA(10μg/μl),
37℃
10分钟,
除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
10.
加入1/10体积的3mol/L
NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。
11.
用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。
12.
将DNA重溶解于1ml
TE,
-20贮存。
13.
取2μl
DNA样品在0.7%
Agarose胶上电泳,
检测DNA的
分子大小
。同时取15μl稀释20倍,
测定OD260/OD280,
检测DNA含量及质量。
[注意]
5g样品可保证获得500μg
DNA,
足供RFLP、PCR等分析之用。
⑷ 粗提取植物DNA的实验步骤和原理
提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理：CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。步骤如下：
1）取材料，加液氮研磨成粉末状，迅速移入1.5 ml Eppendorf管中；
（2）加入800 μl的CTAB提取缓冲液，混匀（CTAB在65℃水浴预热），每5min轻轻震荡几次，20min后12000 r/min，离心15 min；
（3）小心吸取上清液，加入等体积的酚：氯仿（各400μl）溶液，混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min；
（4）小心吸取上清液，加入等体积的氯仿，混匀，4℃，12000 r/min，离心10 min。
（5）重复步骤（4）1-2次，以蛋白层不出现为止；
（6）取上清，-20℃沉淀1h，4℃，12000 r/min，离心10 min；
（7）弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀2次；
（8）室温下干燥后（一般干燥5-15 min），溶于30-50 μl DEPC去离子水中，于-20℃或者-70℃下保存备用。
⑸ 植物DNA提取的原理和方法是什么
原理就是去掉植物细胞壁
细胞膜
质体
线粒体
叶绿体
剩下细胞核了。就是DNA了。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。
十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl
ammomum
bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium
dodecyl
sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液
⑹ 植物DNA的提取方法
博凌科为新型快速
植物
基因组
DNA提取试剂盒
改进的CTAB植物DNA抽提液（添加多种针对植物
特点
的
多糖
、多酚去除成份）迅速裂解细胞和灭活细胞内
核酸酶
，氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和
蛋白质
，
上清
加入异丙醇离心
沉淀
基因组DNA，进一步去除其它各种
杂质
，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基
质膜
，再通过一系列快速的漂洗－离心步骤,
进一步将多糖，多酚和细胞
代谢物
，蛋白等杂质去除，
最后低盐的洗脱
缓冲液
将基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒特点:
◆
离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制
吸附膜
，柱与柱之间
吸附量
差异极小，
可重复性
好。克服了国产
试剂盒
膜质量不稳定的弊端。
◆
不需要使用有毒的
苯酚
，氯仿等试剂。
◆
快速，简捷，单个
样品
操作一般可在1小时内完成。
⑺ 请教植物DNA提取
专用简单方法：1、将小指甲大小叶片用液氮快速磨碎。2、快速加入专用DNA提取液，用移液枪吸打几下后将液体吸入1.5MLEP管内。3、离心12000R，10min。4、将上清液吸入1.5MLEP管内，加入异丙醇，上下颠倒。5、离心12000R，10min。6、倒掉上清液，干燥DNA。7、将DNA溶于60uLDDH2O -20℃保存。
优点：快速、方便、无毒。
⑻ 求几种植物总DNA抽提方法和优缺点
1、植物DNA的CTAB提取法：经典方法。效果较好，污染少。多用于核基因组提取。
2、SDS提取法：较为简易，提取的为全基因组，但有蛋白污染可能。
3、简易“一管法”提取方法：
4、PCR研究的快速提取法：以上两者方法简单，快速，但污染多，不适合做酶切等操作。
5、酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法：多酚多糖去除效果好，但操作步骤较多。
⑼ 如何从植物组织中提取基因组dna
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差
异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。
本实验以水稻幼苗为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。
DNA
一、材料
水稻幼苗
二、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离 心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。
三、试剂
1、提取缓冲液?：100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L
NaCl, 1.5% SDS。
2、提取缓冲液?：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 RnaseA母液：配方见第一章。
5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
四、操作步骤：
（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取
1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液?, 60?水浴预热。
2. 水稻幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热
的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60?水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
4. 室温下5000rpm离心5分钟。
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。
7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60?水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。
8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。
9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37? 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20?放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。