❶ 到底怎样计数细胞呢稀释倍数怎么算
一般来说,细胞的计数方法是:细胞数/mL=4个大格细胞总数/4×10000×稀释倍
数
操作步骤:
1.取10ul细胞悬液与10ul台盼兰混合均匀于1.5ml离心管中。
2.盖上盖玻片,取10ul混合液自血球计数盘上方加入,于10倍生物显微镜下观察,活细胞不染色,死细胞被染成蓝色。
3.分别计数四个大方格,得到细胞总数,再除以4,乘以稀释倍数(本实验为2),最后乘以104,即为每ml细胞悬液中细胞数。若细胞位于线上,只计上线与左线(计上不计下,计左不计右)。
注:
1.细胞数/ml=4大格细胞总数×稀释倍数×104/4;每一大格的体积为=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml
2.计数板计数时,最适细胞浓度为5~10×105个/ml,此范围外计数误差偏大。
3.高浓度细胞悬液,可取出部分作稀释或连续稀释后计数。
例
活细胞数/方格:55,62,49,59;死细胞数/方格:5,3,4,6;细胞总数=243
平均细胞数/方格=60.75;稀释倍数=2;
细胞数/ml:60.75×104×2=1.22×106;
细胞数/flask(10ml):1.22×106×10ml=12.2×106
存活率:225/243﹦92.6%
❷ 微生物计数方法有哪些
测定微生物细胞数目的方法有很多,介绍几种
1.血细胞计数法
将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数。
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。
②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数。
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化
2.稀释涂布平板法
原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。
④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法。染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞。
3.滤膜法
滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的细菌数。
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。例如测定饮用水中大肠杆菌的数目:将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目。
此法也是统计样品中活菌的数目。
4.比浊法
原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大。因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确。
5.显微镜直接计数法
在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数。再如滤膜法也一样,可以有两种情况。
另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目。
❸ 高中生物几个计数法。
高中生物有5个计数法。
1、取样器取样法
取样器取样法是用来调查土壤小动物的种类时的取样方法; 取样器取样法适用于小型动物,如蚯蚓等;样方法适用于植物和活动力弱的动物。
2、目测估计法和记名统计法
目测估计法和记名统计法是调查土壤小动物的时候具体计数的方法,记名统计法更准确,目测估计法模糊。
3、显微计数法
显微计数法是在显微镜下观察并计算某种微生物的数量的方法。
4、稀释涂布平板法
稀释涂布平板法是用稀释后,在培养基上形成菌落的方法来计算细菌等微生物的数量的方法。
细胞计数法的用途:
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法,一般利用计数板(血球计数板)进行。
既可用于分离细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均需制备分散的细胞悬液。
❹ 显微镜计数法,活菌计数法,稀释涂布平板法,平板划线法,血球计数法区别
1、显微镜计数法即血球计数法,事先把菌液稀释到一定的倍数,然后通过血球计数板在显微镜下计数。此法计数比较精准。
2、活菌计数法是将待测样品经一系列 10 倍稀释,然后选择三个稀释度的菌液,分别取 0.2ml 放入无菌平皿,再倒入适量的已熔化并冷至 45 ℃ 左右的培养基,与菌液混匀,冷却、待凝固后,放入适宜温度的培养箱或温室培养,长出菌落后,计数,按下面公式计算出原菌液的含菌数:
每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿
菌落平均数×稀释倍数× 5
3、稀释涂布平板法是一种粗略的活菌计数法,即通过一定的稀释倍数,涂布到平板上,在适宜的条件下培养后,观察活菌数。
4、平板划线法一般指划线平板,平板划线法是用来分离单菌落的一种方法,不是计数的方法。
5、血细胞计数,是用于检测细胞的特征性变量,包括细胞大小、细胞数量、细胞形态和结构、细胞周期、细胞DNA、细胞表面蛋白质和胞质蛋白质的常规检查之一。
(4)细胞计数的方法有哪些有什么不同扩展阅读
活菌计数法又称间接计数法。活菌计数法是在一定浓度的定量药物内加入定量的试验菌,经过一定时间培养后,取样进行活菌计数。
活菌计数是将定量的药物与试验菌作用后的混合液稀释后加入琼脂培养基,制成平板,培养后数平板上形成的菌落数。直接计数法测定到的是死、活细胞总数,而间接计数法测得的仅是死、活菌总数。这类方法所得的数值往往比直接计数法测得的数值小。
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落,即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。
划线的具体形式很多,一种有效的方法是将一个平板分成不同面积的4区,A区面积最小,作为待分离菌的菌源区,B和C区是逐级稀释的过渡区,D区面积最大,以便有机会出现较多的单菌落供选用。
❺ 普通实验室最常用的细胞计数的方法是什么
细胞计数就是从需要计数的细胞悬液中取一定量细胞进行计数,并通过计数得知原始细胞悬液中的细胞密度以及细胞总和数.在细胞计数时,若细胞浓度太高,可进行必要的稀释.常用的细胞计数有细胞电子记数仪计数法和细胞板计数法,但电子计数仪记数法在许多实验室尚未完全推广, 细胞板计数法仍是实验室目前常用的方法.
1. 制备鸡红细胞悬液:取50ml小烧杯一只,以一份鸡血加十份0.17mol/L氯
化钠溶液稀释,形成一种不透明的红色液体,此为鸡红血细胞悬液.悬液制备后应轻轻反复吹打, 使细胞充分分散.
2. 准备记数板:用酒精清洁鸡血细胞悬液及专用盖玻片,再用绸布擦净.
3. 加样: 细胞记数板盖上专用盖玻片,用无菌细口吸管吸取一滴鸡血细胞悬
液,从记数板上盖玻片的边缘一侧缓缓滴入,使之充满记数板和盖玻片之间的的空隙中,注意:加样量不要过多溢出盖玻片,也不要过少或带有气泡.不理想时要重新加样,否则会影响细胞计数结果.
4. 计数:稍候片刻,将计数板放在低倍镜下观察计数.计算出计数板的四角大方格(每个大方格又分16个小方格)内的细胞数.计数时,只计数完整的细胞,若聚成一团的细胞 则按一个细胞计数.在一个大方格中,如果有细胞位于线上,一般计上限细胞不计下限细胞,计左线细胞不计右线细胞.
5. 计算:计完数后,需换算出每mol悬液中的细胞数.由于计数板中每一方格的面积为0.1cm2 ,高为0.01cm,这样它的体积为0.0001cm3 即0.1mm 3 .由于1ml=1000 mm 3 ,所以每一大方格内细胞数×104=细胞数/ ml,故可按下式计算:
细胞悬液细胞数/ ml=4个大方格总数/4×104. 如计算前已稀释,可再乘稀释倍数.
❻ 血细胞计数法,显微计数法和抽样检测法的区别
血细胞计数法,显微计数法和抽样检测法的区别:
血球板计数法属于显微计数,用血球板计数法需要最后需要在显微镜下计数。抽样检测是针对调查的是全部还是部分。
但是三种细胞计数法实际上没有什么区别,人教版称之为抽样检测法,北师大版本称之为显微计数法,因为实际操作过程中用了血球计数板,所以又叫血球板计数法。
血球计数板计数法:
利用血球计数板在显微镜下直接计数,是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液(或孢子悬液)放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中,在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的(0.1㎜3),所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和,故又称为总菌计数法。
❼ 血细胞计数法,显微计数法和抽样检测法的区别
血细胞计数法,显微计数法和抽样检测法实际上没什么区别:
人教版称之为抽样检测法,北师大版本称之为显微计数法,因为实际操作过程中用了血球计数板,所以又叫血球板计数法。
血球计数板的使用原理
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的
载玻片上(又称计菌器),于显微镜下直接计数,然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器,由一块比普通载玻片
厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其容积为
0.1mm3,即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板;大方格的长和宽各2mm,深度为0.1mm,其容积为0.4mm3,即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上,刻有一些符号和数字,其含义是:XB-K-25为计数板的型号和规格,表示此计数板分25
个中格;0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高;1/400mm2表示计数室面积是1mm2,分400个小格,每小格面积是1/400
mm2。
❽ 细胞计数的方法
你好,很高兴为你解答:
显微镜直接计数法:
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器),于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。细胞(英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。
❾ 高中常用的细胞计数法有哪几种分别适用于哪种情况
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。即可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。 1、 制备细胞悬液 对于悬液培养的细胞,可直接进行下面的步骤2(计数与计算过程)。如果计数对象为贴壁生长的细胞,首先需将培养物制备成细胞悬液。 (1) 终止培养,将培养液吸出,用PBS洗培养物一次。 (2) 给培养瓶内加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时,弃消化液。 (3) 加入一定量的培养液(如果这些培养细胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使细胞脱壁而制成细胞悬液。 2、计数与计算过程 ( 1) 在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。 (2) 用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹糟处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止。 (3) 置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。 (4) 按下式计数细胞悬液的密度:细胞密度=(4个大格细胞总数/4)×104个/ml 注意事项: (1) 务必使分散成单个细胞,取样计数前,充分混匀细胞悬液。 (2) 显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm2或>500个/10 mm2 时,说明稀释不当,需重新制备细胞悬液。
❿ 高中生物 求解血球计数法和稀释涂布平板法的区别
1、代表含义不同:
(1)血球计数法:医学上常用来计数红细胞,白细胞等而得名,也常用于计算一些细菌,真菌,酵母等微生物的数量。血球计数板是一种常用的细胞计数工具。
(2)稀释涂布平板法:微生物学实验中的一种操作方法。
由于将含菌材料现加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡,而且采用稀释倒平台法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长,因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。
2、使用目的不同:
(1)血球计数法:常用来计数红细胞,白细胞等细胞数量。
(2)稀释涂布平板法:微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法,根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落,即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。。
(10)细胞计数的方法有哪些有什么不同扩展阅读
涂布平板法的特征:
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落,即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。
计数时,首先将待测样品制成均匀的系列稀释液,尽量使样品中的微生物细胞分散开,使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞),再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中,使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数,故又称活菌计数。一般用于某些成品检定(如杀虫菌剂等)、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
参考资料来源:网络-涂布平板法
参考资料来源:网络-血球计数板