T细胞杀伤实验方法有哪些

⑴ t细胞介导的免疫杀伤与抗体介导的免疫杀伤各有哪些途径

t细胞介导的免疫杀伤与抗体介导的免疫杀伤各有哪些途径
①抗感染 T细胞效应主要针对胞内感染的病原体，包括抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫感染等。
②抗肿瘤 其机制为：Tc细胞的特异性杀伤作用；巨噬细胞、NK细胞的ADCC效应；细胞因子直接或间接的杀瘤效应等。
③ 免疫损伤作用 T细胞效应可参与IV型超敏反应、移植排斥反应、某些自身免疫病的发生和发展。

⑵ 在细胞免疫中，效应T细胞杀伤靶细胞主要有两种途径：细胞裂解性杀伤（图1）和诱导细胞凋亡（图2＞．前者

（1）效应T细胞是由T细胞或记忆细胞增殖分化产生的，在细胞免疫过程中起作用，另一种特异性免疫是体液免疫，作用依靠浆细胞产生的抗体发挥作用．
（2）穿孔素是一种大分子物质，以胞吐的方式释放到细胞外，K⁺及蛋白质主要存在于细胞内，可以通过通道流出细胞．
（3）①Fas和FasL的特异性结合，将信息传递给靶细胞，体现了细胞膜进行细胞间信息交流的功能，每一个细胞内都含有一个个体的全部基因，控制合成Fas和FasL的基因可以存在于一个细胞中．
②FasL是死亡因子，某些肿瘤细胞能够调节Fas和FasL基因的表达水平，以加强自身的攻击能力，所以细胞内FasL基因的表达水平升高．肿瘤细胞还能逃脱免疫系统的清除，因此细胞内Fas基因的表达水平降低，死亡因子受体减少．
③免疫抑制就是要降低免疫能力，只要能降低移植器官Fas基因的表达水平，死亡因子受体减少，移植器官就不会被效应T细胞识别而被清除．
故答案为：
（1）T细胞或记忆细胞浆细胞抗体
（2）胞吐流出
（3）①信息交流能
②降低升高
③降低移植器官Fas基因的表达水平

⑶ 效应T细胞如何消灭入侵病毒

1、通过裂解被感染的细胞，使细胞裂解，释放病毒。随后被抗体结合，而后被吞噬细胞吞噬，从而消灭病毒。
2、通过合成一些细胞因子，比如干扰素，从而抑制病毒的复制。

⑷ 如何在体外诱导T细胞活化成具有肿瘤杀伤作用的T细胞

这属于肿瘤细胞免疫疗法中的一种方法思路，CAR-T细胞疗法，从患者自身血液收集T细胞，收集之后对T细胞进行基因工程处理(将能识别某种肿瘤抗原的抗体的抗原结合部与CD3-ζ链或FcεRIγ的胞内部分在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基因转导的方法转染患者的T细胞，使其表达嵌合抗原受体[chimeric antigen receptor, CAR]），同时在受体的胞内段加上引起T细胞活化的信号传递区域。CAR是一种蛋白质受体，可使T细胞识别肿瘤细胞表面的特定蛋白质（抗原），表达CAR的T细胞可识别并结合肿瘤抗原，进而攻击肿瘤细胞。这种表达CAR的T细胞被称为CAR-T。经过设计的CAR-T细胞可在实验室培养生长，达到数十亿之多将扩增后的CAR-T细胞注入到患者体内，注入之后的T细胞也会在患者体内增殖，并杀死具有相应特异性抗原的肿瘤细胞

⑸ 效应t细胞杀伤靶细胞的方式中不包括

（1）人体特异性免疫包括体液免疫和细胞免疫．在细胞免疫过程中，T细胞发挥主要作用；该细胞接受刺激后，能增殖、分化成效应T细胞核记忆T细胞，当记忆T细胞再次接收同一刺激后，能迅速增殖、分化成效应T．在体液免疫过程中，B细胞发挥主要作用，该细胞接受刺激后，能增殖、分化成记忆B细胞和浆细胞，浆细胞分泌抗体．
（2）Fas和FasL的结合体现了细胞膜的信息传递功能．同一个体的所有体细胞的基因组成相同，控制合成Fas和FasL的基因可以共存于一个细胞中，由题目所给信息“控制FasL的基因只在效应T细胞核某些肿瘤细胞内表达”可以推出肿瘤细胞内FasL基因的表达水平升高，肿瘤细胞本身又能逃脱免疫系统的清除而避免死亡，说明Fas基因的表达水平应该降低．降低移植器官Fas基因的表达水平，可以降低免疫排斥作用．
故答案为：
（1）T细胞或记忆细胞    浆    抗体   
（2）①信息交流    能    ②降低

⑹ 检测T,B,NK和吞噬细胞免疫功能的方法分别有哪些

免疫细胞功能试验包括体内和体外试验。免疫细胞功能体外试验主要根据免疫细胞的增殖活性、分泌活杀伤活性等特性而进行实验设计。具体免疫细胞功能检测内容包括：①淋巴细胞功能检测，包括T细胞增殖试验、T细胞分泌功能测定、T细胞介导的细胞毒试验以及体内试验；B细胞增殖试验、溶血空斑试验、酶联免疫斑点法以及体内试验；NK细胞活性检测方法：酶释放法、放射性核素释放法、化学发光法、流式细胞术法等。②吞噬细胞功能检测，方法有趋化功能检测、吞噬和杀菌功能测定等。

⑺ t细胞细胞毒试验常用的检测方法有哪些

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⑻ 用于检测T细胞功能的细胞毒试验不包括

正确答案:E
解析：T细胞介导的细胞毒试验是将靶细胞与受检的淋巴细胞混合，观察肿瘤细胞被杀伤情况
。溶血空斑试验是用来检测B细胞功能的试验
。

⑼ 简述T细胞功能测定的常用方法

免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。1．体液免疫测定主要利用抗原与相应抗体在体外发生特异性结合，并在一些辅助因子参与下出现反应，从而用已知抗原或抗体来测知未知抗体或抗原。此外，尚包括检测体液中的各种可溶性免疫分子，如补体、免疫球蛋白、循环复合物、溶菌酶等。2．细胞免疫测定法是根据各种免疫细胞（T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及巨噬细胞等）表面所具有的独特标志和产生的细胞因子等，测定各种免疫细胞及其亚群的数量和功能，以帮助了解机体的细胞免疫水平。体液免疫检测法1.凝集反应。颗粒性抗原（细菌或红细胞等）与相应抗体特异性结合，在电解质参与下形成肉眼可见的凝集物，称之为凝集反应。1）直接凝集反应。颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象，前者多为细胞表面的结构成分，如细菌或红细胞的表面结构抗原。⑴玻片法：多用于抗原的定性检测。⑵试管法：多用于抗体的定量检测。2）间接凝集反应。将可溶性抗原吸附于载体颗粒（如乳胶颗粒、红细胞等）的表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即可出现凝集现象。这个反应常用于测定细菌性抗体、病毒性抗体、钩端螺旋体和梅毒螺旋体抗体及某些自身抗体（如抗核抗体、抗肾抗体、抗甲状腺抗体等）。根据凝集反应的原理，还有间接凝集抑制试验、反向间接凝集试验、协同凝集试验等。2．沉淀反应。可溶性抗原（外毒素、血清、细菌培养的滤液、组织浸出液等）与相应抗体特异性结合，在电解质参与下，形成沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应的抗原多为多糖、类脂、蛋白质等。1）单向扩散试验。这是一种抗原定量试验，是可溶性抗原在含抗体的琼脂介质中扩散的沉淀反应。此法常用于检测血清免疫球蛋白和补体各成分的含量。2）双向扩散试验。这是可溶性抗原与抗体在琼脂介质中相互扩散的沉淀反应。本法常用于定性试验，如检测血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。单克隆抗体技术3）对流免疫电泳。对流电泳是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫扩散。此法常用于检测血清中的乙型肝炎表面抗原与甲胎蛋白等。3．中和试验。特异性抗体可抑制相应抗原物质的活性，抗体使相应抗原的毒性或传染性消失的反应为中和试验。例如抗毒素中和外毒素的毒性，病毒的中和抗体可使病毒失去感染性等。诊断风湿热的抗链球菌溶血毒素“O”试验也为一种中和试验。乙型溶血性链球菌能产生一种溶解人、兔红细胞的溶血毒素“O”，该毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素“O”抗体所中和而不出现溶血。试验时将病人血清与溶血毒素“O”混合，作用一段时间后加入人红细胞，红细胞不被溶解为阳性反应，表示病人血清中存在抗溶血毒素“O”抗体。血清抗体效价达400单位以上时提示患者曾感染乙型溶血性链球菌，有助于风湿热的诊断。4.免疫荧光法（荧光抗体法）。是应用荧光素染料（如异硫氰酸荧光黄等）来标记抗体，但不影响其活性，此种抗体称荧光抗体。用已知种类的荧光抗体浸染待检的含有抗原的细胞或组织切片，如有相应抗原存在，则抗原即与此种抗体发生特异性结合，形成复合物而粘着在细胞上，不易洗脱，在荧光显微镜下成为发出荧光的可见物，可达到诊断或定位的目的。包括直接法和间接法。5．酶联免疫吸附试验。本法的原理是利用酶（常用辣根过氧化物酶）标记的抗原或抗体，以测定被检标本中有无相应的抗原或抗体。有间接法、双抗体法、竞争法三种。6．溶血空斑试验。7．免疫印迹技术。免疫印迹或免疫转印技术(immunoblotting或Westernblot）是在Southern(1975)抗体抗原反应创建的DNA印迹术(Southernblotting）基础上发展起来的新型免疫生化技术。细胞免疫检测法近代免疫学广泛采用了细胞生物学、免疫血清学、免疫标记、免疫组化等多方面技术，不断发展和完善了一系列细胞免疫检测技术，用于检测各类免疫细胞的表面标志（包括抗原及受体）、细胞的活化、增殖、吞噬、杀伤功能、各种细胞因子的活性或含量等方面。这些技术为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变，阐明某些疾病的发病机制和临床诊治提供了有用的手段。随着细胞免疫学的迅猛发展，时有新的细胞免疫检测技术出现。二十一世纪初期，新发展的项目集中在对有关细胞因子以及细胞受体方面的检测。1．淋巴细胞转化试验。人类淋巴细胞在体外与特异性抗原（如结核菌素）或非特异性有丝分裂原（如植物血凝素，PHA）等一起孵育，T细胞即被激活而向淋巴母细胞转化。T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加，最后导致细胞分裂。在光学显微镜下可计数转化后的淋巴母细胞数，也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR）掺入正在分裂的淋巴细胞，用液闪测定仪来确定掺入量以确定淋巴细胞转化率。2000年开始出现一种不用同位素，又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法，称为MTT检测法。MTT是一种甲氮唑盐，它是细胞线粒体脱氢酶的底物，细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色成分。该产物的多少与活细胞数成正比，结果可用酶标仪(595nm）测量光密度，作为MTT法的指标。2．E-花环法。人类T细胞表面有羊细胞受体(CD2）能与羊红细胞结合形成玫瑰花样结构。即将分离液分离出的外周的单个核细胞悬液与羊红细胞在体外混合，经37℃培养5～10分钟后放4℃过夜，取细胞悬液计数，外周血淋巴细胞中约70%～80%淋巴细胞结成花环即为T细胞，此法可用来分离T细胞。3．T细胞亚群检测。4．细胞毒试验。Tc细胞、NK细胞、LAK细胞、TIL细胞等对其靶细胞有直接的细胞毒（杀伤）作用。抗体制备常用的检测方法是51Cr（铬）释放法，将51Cr-Na2CrO4盐水溶液与靶细胞（不同的细胞需不同的靶细胞，如NK细胞的靶细胞为K562），于37℃培养1小时左右，51Cr即进入靶细胞，与胞浆结合，洗去游离的51Cr后，即可得到51Cr标记的靶细胞，将待测细胞毒的细胞与51Cr标记的靶细胞混合（比例约为50:1或100:1），靶细胞杀伤越多，释放到上清液中的游离51Cr就越多，且不能再被其他细胞吸收，用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值，可计算出待检细胞杀伤活性高低。细胞毒的检测对肿瘤免疫有较大价值。5．巨噬细胞吞噬功能的测定。将中药(10%斑蝥）乙醇浸出液浸渍的滤纸（1cm2大小）置于受试者前臂屈侧皮肤上，4～5小时后取下滤纸。48小时内皮肤局部可水泡，内含巨噬细胞。取水泡液0.5ml加鸡红细胞悬液0.01ml，37℃经30分钟后作涂片、染色与镜检，计算吞噬百分率及每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的平均数。本试验有助于肿瘤病情及疗效的观察。6．移动抑制试验。致敏淋巴细胞与其特异性抗原再次接触时，可以产生移动抑制因子(MIF）。这种因子可以抑制巨噬细胞和中性粒细胞的移动，使之定位于局部而增强其免疫作用。本试验用来观察受检者淋巴细胞在体外受特异性抗原刺激后，有无MIF产生，以测定机体对某种抗原的特异性细胞免疫反应的功能。7．时间分辨荧光测量技术。时间分辨荧光测量技术(time-resolvedfluorometry,TrF）是一项新型的超微量非放射性分析技术。该技术的敏感性和特异性与放射性核素测量技术相仿，但无放射测量的弊端，故问世虽短，进展却极为迅速，有取代放射测量之势。8．细胞因子检测技术。细胞因子的检测，2005年起在中医临床及实验室中已广泛应用。9．细胞受体的检测。受体是细胞表面标志之一，通过对受体的检测，可以了解细胞的功能，并为某些疾病的发病机制提供一定的理论依据。

⑽ T细胞介导的免疫杀伤与抗体介导的免疫杀伤各有哪些途径

由T细胞介导的细胞的免疫有二种基本形式，分别由二类不同的T细胞亚类参予。一种是迟发型超敏性的T细胞（TDH，CD4+），该细胞和抗原起反应后可分泌细胞因子。

这些细胞因子再吸引和活化巨噬细胞和其它类型的细胞在反应部位聚集，成为组织慢性炎症的非特异效应细胞。另一种是细胞毒性T细胞（TC，CD8+），对靶细胞有特异杀伤作用。

在无抗原激发的情况下，效应T细胞是以不活化的静息型细胞形式存在。当抗原进入机体后，在抗原呈递细胞或靶细胞的作用下使静息型T细胞活化增殖并分化为效应T细胞。即由T细胞介导的细胞免疫应答也需经过抗原识别（诱导期）、活化与分化（增殖期）和效应期才能发挥细胞免疫作用。

(10)T细胞杀伤实验方法有哪些扩展阅读：

注意事项：

1、细胞毒性T细胞不是仅指人教版老教材上的效应T细胞。效应T细胞根据发挥效应的不同又可以分为细胞毒性T细胞（介导细胞免疫）、辅助性T细胞（分泌淋巴因子对于细胞免疫和体液免疫起辅助作用）和调节性T细胞（起免疫抑制作用的T细胞）。

2、在体液免疫里， T细胞不具有呈递抗原给B细胞的作用，通过分泌的淋巴因子发挥作用。

3、杀伤T细胞可泌一种蛋白质毒素，与颗粒内的物质不同，而类似于淋巴毒素的物质。这种细胞毒素可活化靶细胞内的DNA降解酶，导致靶细胞核DNA的裂解，引起靶细胞的程序性死亡。