纯化淀粉酶的方法有哪些

⑴ 谁能用简单的语言概括一下酶的分离纯化步骤

酶的分离纯化一般包括三个基本步骤： 即抽提、 纯化、 结晶或制剂。
首先将所需的酶从原料中引入溶液， 此时不可避免地夹带着一些杂质， 然后再将此酶从溶液中选择性地分离出来， 或者从此溶液中选择性地除去杂质， 然后制成纯化的酶。

⑵ 木霉淀粉酶的纯化

从木霉菌株中分离纯化出许多淀粉水解酶。从里氏木霉纯化出来的葡糖淀粉酶是一个重组体，这个酶的等电点是4.0，支链淀粉和淀粉降解的比率为15%。它氨基末端序列中60%的P和S是来自H.resinae葡糖淀粉酶的氨基末端序列，27%的P和S是来自黑曲霉的葡糖淀粉酶的氨基末端序列（Fagerstrom，1994）。里氏木霉葡糖淀粉酶重组体不会影响各自酶的活性，但是重组体的异质糖基化会影响酶的稳定性。从里氏木霉中还纯化了另一个葡糖淀粉酶，它的分子量为66kDa，共价碳的数量＜1%，酶的最佳活性条件是pH 5.5且温度为70℃（Fagerstrom et al.，1995）。这个葡糖淀粉酶的60%的多肽氨基酸序列和黑曲霉葡糖淀粉酶一样。Yamasaki等（1995）从绿木霉中纯化了一个a-葡糖淀粉酶，这个酶能水解淀粉、麦芽低聚糖和a-1，3链接的葡聚寡糖。这个a-葡糖淀粉酶的分子量为65kDa，酶的最佳活性条件是pH 4.0且温度为65℃。其中含有a-1，3链和有a-1，4链的物质的比例为1：16，这个酶主要是参与淀粉的水解，产物以麦芽糖为主，还能产生麦芽三糖及少量葡萄糖。

⑶ 现有一支产淀粉酶活力很高的枯草杆菌斜面种污染了黑曲霉,如何将其分离纯化 请列

2.1淀粉酶 淀粉酶是能够水解糖苷键的一类酶的总称。它可分为a-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和异淀粉酶等。能产生淀粉酶的微生物很多，如枯草芽孢杆菌、马铃薯芽孢杆菌等分泌液化型淀粉酶，根霉、黑曲霉等能产生糖化型淀粉酶。 利用细菌生产a-淀粉酶是以液体深层发酵为主。采用麸皮、玉米粉、豆饼粉、米糠和玉米浆等为原料，适当补充硫酸铵、氯化铵、磷酸铵等无机氮，添加少量镁盐、磷酸盐、钙盐等无机盐类。pH中性或微碱性，温度控制在27度，通气搅拌培养24—48h。然后再经分离（除去菌体及不溶物）、浓缩、沉淀、干燥，即可得到淀粉酶制剂的成品[2]。 利用霉菌生产a-淀粉酶多采用固体发酵。以麸皮为主要原料，酌加米糠或豆饼的碱水浸出液以补充氮源。pH微酸性，相对湿度90%以上，32—35度下通风培养36—48h后，立即在40度下烘干或风干，即为工业生产用的粗酶。经粉碎、浸泡、分离、浓缩、沉淀和干燥等步骤可得到淀粉酶制剂的成品，其纯化方法有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法和柱层析法等

⑷ 酶的分离和纯化方法是什么

酶的分离纯化一般包括三个基本步骤：即抽提、纯化、结晶或制剂。

首先将所需的酶从原料中引入溶液，此时不可避免地夹带着一些杂质，然后再将此酶从溶液中选择性地分离出来，或者从此溶液中选择性地除去杂质，然后制成纯化的酶制剂。

酶分离纯化的最终目的是获得单一纯净的酶，因此，容许在不破坏“目的酶”的限度内，使用各种手段;酶与底物和抑制剂的结合常使其理化性质和稳定性发生改变，这种特性已被用于酶的分离纯化。

由于酶及其来源的多样性及与之共存的高分子物质的复杂性，目前还很难找到一种通用的方法以适用于一切酶的纯化。为了使一种酶达到高度纯化，往往需要多种方法协同作用，通过酶活性的跟踪检测确定最佳流程。

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酶的本性是蛋白质，凡可用于蛋白质分离纯化的方法都同样适用于酶，但酶易失活，故分离纯化需在低温(4℃)、温和pH(4<pH>10)等条件下进行。

与蛋白质类似，酶易在溶液表面或界面处形成薄膜而变性，因此操作中应尽量减少泡沫形成，此外重金属易使酶失效，有机溶剂能使酶变性，微生物污染以及蛋白水解酶的存在能使酶分解破坏。

在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称是分离纯化。

⑸ 酶进行提纯的方法是什么

酶，从动植物细胞和微生物中提取之后，往往不能直接应用，这是因为生物在合成酶的同时也合成其他大分子物质。而这些大分子物质会严重干扰酶的作用，因此必须把酶从中分离出来。如果酶不纯，那么极有可能在应用中形成几个生化反应同时进行，结果得到的产物也就不是单一的。当然，酶并不是越纯越好。不同的生物化学反应，对酶的纯度要求也不一样。因此，要把酶制成不同的酶制剂，以便适应各种需求。

要对酶进行分离和提纯，有多种方法。当酶从生物细胞以及微生物中产生之后，可能留在细胞内，也可能分泌到细胞外面。如果是胞外酶，这就方便多了，只要收集微生物和细胞的培养液进行分离和提纯就可以了。如果酶在细胞内(称胞内酶)，则必须研碎细胞，才能把酶提取出来。不论是胞外酶还是胞内酶，都可能会含有一些其他大分子物质，如核酸、蛋白质和淀粉之类的东西。

对付核酸，只要在酶溶液中加入核酸酶，就可以去掉核酸。对于淀粉也比较好办。最难对付的是蛋白质，因为酶也是蛋白质，能破坏蛋白质的方法也可以破坏酶，所以提纯是件比较困难的事。但随着现代科学技术的不断进步，经过研究，已找到沉淀法、分子过滤法等。采用以上提纯方法，就可以得到不同纯度的酶，这为酶的广泛应用打开了方便之门。

⑹ 酶分离纯化的主要技术措施有哪些

酶是蛋白质，因此一般蛋白质的分离原则都应该遵行。但酶作为特殊的蛋白质，最重要的原则是一定在纯化过程中保持酶的活性，所以纯化过程中一般要注意保持低温、缓冲液配方避免酶的抑制。每个步骤都要检测酶活性，一方面直观了解纯化的回收率，另一方面可以计算酶的纯度。酶的分离纯化方法一般根据酶的分子量、等电点、疏水性等生化性质，选择相应的沉淀、盐析、层析方法，其中亲和层析可以应用可逆性底物作为配基或特异性抗体，制备亲和层析胶。酶的分离纯化工作主要是,将酶从杂蛋白中分离出来或者将杂蛋白从酶溶液中除去。现有的酶分离纯化方法都是依据酶和杂蛋白在性质上的差异而建立的。 1、根据分子大小而设计的方法,如离心分离法、筛膜分离法、凝胶过滤法等。 2、根据溶解度的大小分离的方法,如盐析法,有机溶剂沉淀法,共沉淀法。

⑺ 酶的分离纯化一般经过哪些步骤应注意哪些问题

(1)要注意防止酶的变性失活.
(2)酶的分离纯化的目的是将酶以外的所有杂质尽可能的除去，因此，在不破坏所需酶的条件下，可使用各种“激烈”的手段。此外，由于酶和它的底物、抑制剂等具有亲和性，当这些物质存在时．酶的理化性质和稳定性发生了一定变化，从而提供了更多条件和方法可供采用。
(3)酶具有催化活性。检测酶活性，跟踪酶的来龙去脉，为选择适当方法和条件提供
直接依据。在工作过程中，从原料开始每步都必须检测酶活性．一个好的方法和措施会使酶的纯度提高倍数大，活力回收高，同时重复性好。

⑻ 如何提取淀粉酶。。。单一的淀粉酶就行了。。。及其检验的方法

你好，如果是马上需要使用的话建议从网上的生物公司直接购买淀粉酶成品。想自己制作的话建议采集自己的唾液，里面就有唾液淀粉酶。不要将唾液加温，以免酶失活。检验方法可用淀粉遇碘变色的原理，用分光光度计测定酶是否存在，若酶存在，加入淀粉与碘的混合溶液后，因淀粉被淀粉酶分解成糊精，蓝色将会有所消退。若需提取单一的纯淀粉酶，可以使用电泳法确定唾液淀粉酶蛋白质的分子质量，再用柱层析法将它层析出来。这是一个很麻烦的过程，需要大量的实验，如果只是为了达成消化淀粉的目的的话，不妨直接使用唾液。如果需要考虑温度和消化质量的话，买成品是比较省时间的选择。
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