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生物目的基因的获取有哪些方法

发布时间:2022-09-02 05:13:17

⑴ 目前获取目的基因的主要途径有哪些

一是从供体细胞的DNA中直接分离基因。,最常用的方法是“鸟枪法”又叫“散弹射击法"。另一种是人工合成基因。这种方法有两条途径。

二是以目的基因转录的信使RNA为模板。反转录成互补的单链DNA。再在酶的作用下合成双链DNA。即目的基因。另一条途径是蛋白质的氨基酸序列。推测出信使RNA序列。再推测出结构基因的核苷酸序列,然后用化学的方法以单核苷酸为原料合成。

(1)生物目的基因的获取有哪些方法扩展阅读:

基因计算

DNA分子类似“计算机磁盘”,拥有信息的保存、复制、改写等功能。将人体细胞核中的23对染色体中的DNA分子连接起来拉直,其长度大约为0.7米,但若把它折叠起来,又可以缩小为直径只有几微米的小球。因此,DNA分子被视为超高密度、大容量的分子存储器。

基因芯片经过改进,利用不同生物状态表达不同的数字后还可用于制造生物计算机。基于基因芯片和基因算法,未来的生物信息学领域,将有望出现能与当今的计算机业硬件巨头——英特尔公司、软件巨头——微软公司相匹敌的生物信息企业。

⑵ 获取目的基因的方法

获取目的基因的方法:
1、人工合成
2、直接从生物体中获取
3、建立基因文库,从文库中钓取。

⑶ 获得目的基因有几种主要方法

获得目的基因常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选

直接获取
1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了(基因组文库法 就是原教材中的用限制性内切酶直接获取。利用λ噬菌体载体构建基因组文库的一般操作程序如下:① 选用特定限制性内切酶, DNA进行部分酶解,得到DNA限制性片段② 选用适当的限制性内切酶酶解λ噬菌体载体DNA。③ 经适当处理,将基因组DNA限制性片段与λ噬菌体载体进行体外重组。④ 利用体外包装系统将重组体包装成完整的颗粒。⑤ 以重组噬菌体颗粒侵染大肠杆菌,形成大量噬菌斑,从而形成含有整个DNA的重组DNA群体,即文库。)经典解释
2.cDNA文库法(即原教材中提到的逆转录法)。cDNA文库,是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体。虽然可用基因组文库法来获取真核生物的目的基因,但是由于高等真核生物基因组DNA文库比其cDNA文库大得多,相关工作量同样大得多。更为重要的是,在真核生物基因组中合有大量的间隔序列或内含子,但在大肠杆菌等原核生物中没有类似序列的存在,所以大肠杆菌不能从真核生物基因的初级转录本中去除间隔序列,即不能表达真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在间隔序列(已在拼接过程中被去除),所以可以以真核生物成熟mRNA为模板,逆转录而成的cDNA可被大肠杆菌表达。因此,在基因工程中,cDNA文库法是从真核生物细胞中分离目的基因的常用方法
3.直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”。这种方法有如用猎枪发射的散弹打鸟,无论哪一颗弹粒击中目标,都能把鸟打下来。鸟枪法的具体做法是:用限制酶(即限制性内切酶)将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别转入不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分别在受体细胞中大量复制(在遗传学中叫做扩增),从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法吧带有目的基因的DNA片段分离出来。如许多抗虫,抗病毒的基因都可以用上述方法获得。

用“鸟枪法”获取目的基因的优点是操作简便,缺点是工作量大,具有一定的盲目性。

人工合成
1.(主要是序列已知的基因)。主要是通过DNA自动合成仪,通过固相亚磷酸酰胺法合成,具体过程可以网上查询,反正是可以按照已知序列将核苷酸一个一个连接上去成为核苷酸序列,一般适于分子较小而不易获得的基因。对于大的基因一般是先用化学合成法合成引物,再利用引物获得目的基因。
2.聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研 究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情,用PCR几小时便可完成。PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑

⑷ 获取目的基因的两大途径

(1)在基因工程中,获取目的基因主要有两大途径,即人工合成和从生物材料中分离,人工合成可通过反转录法或人工化学合成法,从生物材料中分离即通过基因文库法.
(2)由于cDNA文库中只含有叶细胞已转录(或已表达)的基因,而基因组文库中含有该植物的全部基因,故两个文库相比,cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少.
(3)基因表达载体的组成包括目的基因+启动子+终止子+标记基因,其中启动子是RNA聚合酶识别并结合的部位;若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞,由于细菌繁殖速度快,故最常用的原核生物是大肠杆菌等细菌.
(4)将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法.
故答案为:
(1)人工合成 生物材料
(2)cDNA文库中只含有叶细胞已转录(或已表达)的基因,而基因组文库中含有该植物的全部基因
(3)RNA 大肠杆菌(或答细菌)
(4)农杆菌转化

⑸ 制备目的基因的方法有哪些

制备目的基因主要依靠基因合成和基因分离两种方法;

目的基因获得方法是取得含有所需生物学功能或编码所需产物结构基因的DNA片段的方法。1969年贝克威思(J.Beckwith)等从大肠杆菌中分离出了乳糖操纵子DNA,以后有不少科学家用生物学方法、物理化学方法分离出许多纯化的基因。但总的来看为数不多。

1970年首次完成了77对碱基的酵母丙氨酸tRNA基因的全合成;1973年又合成了126对碱基的酪氨酸tRNA的结构基因。但上述两次合成的基因都不能得到表达。1976年8月成功地合成了能表达功能的人工基因——193对碱基的大肠杆菌酪氨酸tRNA基因。自此以后人工合成基因的报道不断出现。

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目的基因相关的操作包括目的基因鉴定、分离、克隆、转化及转化后鉴定和测试等。通常,目的基因要么是已知供体生物基因组“文库”的一部分,要么是来自于先前未研究过的供体生物基因组。无论是哪种情况,聚合酶链式反应(PCR)技术都可以是目的基因倍增至生成构建体所需的数百万拷贝的水平。

当产生许多拷贝的目的基因后,可以通过酶切反应(或gataway系统),将目的基因酶促连接到构建载体中,然后将整个构建在细菌中表达,从报告基因选取阳性转化体,通常涉及含有插入DNA的菌落中的一些颜色变化。挑取阳性菌落,做液体培养,提取质粒DNA,进行酶切,切胶纯合。获得的DNA可用于后续的转化。

如何获取目的基因

目的基因片段的获取:目的基因的组成:一个能转录翻译的结构基因应包括转录启动区、核糖体识别区、编码区、和转录终止区。
获得途径:1限制性内切酶酶切法2利用pcr技术直接扩增目的基因3目的基因的化学合成4通过构建基因组文库或cdna文库分离目的基因5反向转录法分离目的基因
目的基因导入受体细胞:原核生物最理想受体细胞:大肠杆菌、枯草杆菌、蓝藻、棒状杆菌。真核生物应用最广的受体细胞:酵母细胞
途径:1电穿孔法2基因枪法3激光微束穿孔法4显微注射法5多聚物介导法6脂质体介导转化法
克隆子的筛选鉴定:克隆子的筛选方法:1根据载体选择标记基因2根据报告基因
3根据pcr扩增片段4根据限制性核酸内切酶图谱分析5采用dna杂交法6应用dna芯片7dna核苷酸序列测定

⑺ 简述目的基因获取的方法

目的基因的获取方法主要有以下2类
(1)已知基因的获得 PCR分离法和化学合成法等
(2)未知基因的获得 直接分离法和基因文库分离法等
直接分离法
1、限制性内切酶法
用限制性内切酶把基因组DNA切成不同大小的片断
应用对象 适合于从简单的基因组中分离目的基因 如质粒或病毒的大小只有几千碱基 大的也超不过几十万碱基 编码基因比较少 获得也比较简单
(1)对已定序列的DNA分子 只需要用已知识别序列的限制内切酶进行一次或几次切割 分离纯化所需要的DNA片断 与适当载体连接
(2)对已知定位的目的基因 只要根据目的基因两侧的已知的酶切识别位点 一次就可以获得
(3)即使含目的基因的DNA分子未定序或定位 也只须通过酶切分析 随后再通过部分酶切 构建一个简单的基因文库 从钩出目的基因

⑻ 获取目的基因的常用方法是哪种

1.从基因文库中获取目的基因:将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌
的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。
当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因
在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基
因。
2.化学合成法。已知目的基因的核苷酸序列,可用DNA合成仪直接合成。
3.用PCR技术扩增技术提取。已知目的基因引物的序列,将整个DNA放入合成仪,因为只有当
引物与模板结合后DNA热聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中间的目的基因被大量扩增,
即被提取出来。

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