Ⅰ 你好,考马斯亮蓝法测定蛋白的方法学验证,在做准确度验证时,关于回收率应该怎么验证求教下具体方法。
首先,考马斯亮蓝法测定蛋白质含量时,准确度是由一定范围的,浓度超出范围肯定不准。另外,你在8ug/ml时的收率74%是否稀释测定?最后,高浓度和低浓度回收效率也是有一定范围的,低了高了都不好,最佳回收效率也是在适当浓度下,如果你有兴趣可以做一下梯度实验来证实我的判定
回收率可以通过不同蛋白浓度下检测回收率,比如你做的1.25ug/ml时回收率有95%左右,8ug/ml时为74%,由此你可以在1.25ug/ml左右浓度设计,比方0.1-8ug/ml都可以,安排几个浓度梯度,主要分析0.1-1.25ug/ml和1.25-8ug/ml这两个范围回收率是什么样的变化情况。之后,确定在哪个浓度下回收率最佳,重复几次后统计学分析,最后通过图表反应,加上误差棒,这就是一个可以写进论文的完整的实验内容了。
Ⅱ 如何测定液相色谱的回收率
一定是用液相色谱测定的峰面积计算。通常液相不能用标准曲线计算峰面积,原因在于液相色谱每次配的流动相不可能一样,包括仪器的状态,检测器的检测灵敏度都不能重复,因此液相从不用标准曲线计算,标准曲线只能验证仪器的线性范围。
Ⅲ 方法验证的回收率试验达不到回收率规定标准有哪些原因
伊立替康含量方法验证: 样品目标浓度:1mg/ml 样品储备液:样品2mg/ml 标准品储备液:标准品1.6mg/ml(1) 标准品储备液:标准品2.0mg/ml(2) 标准品储备液:标准品2.4mg/ml(3) 配制方法: 峰面积: 结果: 80%回收率: 样品:1ml样品储备液+1ml稀释剂 A样品 { ( A 样品+标准 )-A样品} / A标准=90% 标准:1ml的(1)+1ml稀释剂 A标准 样品+标准:1ml的(1)+1ml样品储备液 A 样品+标准 100%回收率: 样品:1ml样品储备液+1ml稀释剂 标准:1ml的(2)+1ml稀释剂 样品+标准:1ml的(2)+1ml样品储备液 120%回收率: 样品:1ml样品储备液+1ml稀释剂 标准:1ml的(3)+1ml稀释剂 样品+标准:1ml的(3)+1ml样品储备液结果:{ ( A 样品+标准 )-A样品} / A标准=90%(标准 98%-102%)浓度过高会不会超过线性范围不再标准之内
Ⅳ 请教分析方法验证中准确度试验
任何一种分析测定方法,根据其使用的对象和要求,都应有相应的效能指标。一般,常用的分析效能评价指标包括:精密度、准确度、检测限、定量限、选择性、线性与范围、重现性、耐用性等;对于生物样品中药物分析方法评价的标准与上述的评价指标相比较,有共同之点也有特殊的要求。测定方法的效能指标可以作为对分析测定方法的评价尺度,也可以作为建立新的测定方法的实验研究依据。准确度(Accuracy)是指测得结果与真实值接近的程度,表示分析方法测量的正确性。由于逗其实值地无法准确知道,因此,通常采用回收率试验来裴示。
Ⅳ 请问在药物分析中怎么算方法回收率和方法精密度急!!
方法回收率就是相对回收率~~同理方法精密度就是相对精密度...
1.绝对回收率=提取回收率=萃取回收率,是用药品加血浆经萃取处理后的进样峰面积除以该药品溶液直接进样峰面积的比值,一般来说,该比值不可能超过100%,能做到80%就不错了。以前国家对绝对提取率还有些要求,现在随着lc-ms的应用,最低定量限已经能做到很低,也就不需要再对绝对回收率提具体要求,只要相对回收率满意就可以。
2.相对回收率=方法学回收率,是血浆处理后的进样峰面积代入血浆标准曲线,计算所得浓度除以真实血样浓度.该比值在100%左右.一般要求高、中浓度点在15%以内,低浓度点可适当放宽。
(1)举例:10ng A药加入1ml空白血浆(10ng/ml),经萃取处理后用0.5ml流动相复溶,进样所得峰面积8000;配制对照溶液(浓度10ng/0.5ml=20ng/ml),进样所得峰面积假设为10000.那么萃取回收率为8000/10000=80%.
(2)举例:上述经萃取处理的血浆溶液(10ng/ml)峰面积8000,代入标准曲线计算,假如计算所得浓度为8.5ng/ml,相对回收率则为8.5/10=85%.
Ⅵ 回收率怎么算
回收率的计算方式是有一定技巧了的。
回收率包括绝对回收率和相对回收率。绝对回收率考察的是经过样品处理后能用于分析的药物的比例。因为不论是生物基质还是制剂辅料中的药物,经过样品处理都有一定的损失。
相对回收率严格来说有两种。一种是回收试验法,另一种是加样回收试验法。前者是在空白基质中加入药品,标准曲线也是同此,这种测定用得较多,但有标准曲线重复测定的嫌疑。第二种是在已知浓度样品中加入药物,来和标准曲线比,标准曲线也是在基质中加药物。
回收率的术语解释:
绝对回收率因为不论是生物基质还是制剂辅料中的药物,经过样品处理都有一定的损失。作为一个分析方法,绝对回收率一般要求大于50%才行。
它是在空白基质中定量加入药物,经处理后与标准品的比值。标准品为流动相直接稀释而来,而不是同样品一样处理。若一样,只是不加基质来处理,可能会有很多影响因素被此屏蔽掉。如全部转移有机相时只转移了98%等,也就因此失去了绝对回收率的考察初衷。
相对回收率主要考察准确度。准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度。有时也称真实度,一定的准确度为定量测定的必要条件,因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度。
Ⅶ 求解答在线等 相对回收率的公式是什么 绝对回收率的又是什么 RSD又怎么算
绝对回收率(又称提取回收率)考察测定结果与“真值”的接近程度,等于从生物样本基质中回收得到目标物质的响应值 ÷ 纯标准品产生的响应值 x100%。应选用高、中、低三种浓度分别进行考察,绝对回收率一般要求在50%~80%。
相对回收率(又称方法回收率),等于从生物样本基质中回收得到目标物质的响应值 ÷ 加入到生物基质中已知量的标准品产生的响应值 x100%。该评价指标已扣除了目标药物在样品的前处理过程损失而造成的系统误差。高、中浓度点测得的相对回收率应在85~115%,低浓度(定量限)应在80~120%。
相对标准差 Relative Standard Deviation 是标准偏差与测量结果算术平均值的比值,即 RSD=S/X * 100%,其中S为标准偏差,X为测量平均值。
Ⅷ 实验中样品的回收率怎么计算
加入已知浓度A的待测物质,用该方法测定其浓度值B,回收率=(A/B)×100%.注:已知浓度A应在该检测方法的可以检测浓度范围内。
加标回收率,一般是测定样品中待测物质的浓度为C;再取另一份样品,加入定量待测物质(定量加入待测物质的理论浓度为E)(加入待测物质的量最好与样品中待测物质的量一样)测定其浓度为D,加标回收率=((D-C)/E)×100%
绝对回收率
绝对回收率因为不论是生物基质还是制剂辅料中的药物,经过样品处理都有一定的损失。作为一个分析方法,绝对回收率一般要求大于50%才行。它是在空白基质中定量加入药物,经处理后与标准品的比值。标准品为流动相直接稀释而来,而不是同样品一样处理。
空白加标回收:在没有被测物质的空白样品基质中加入定量的标准物质,按样品的处理步骤分析,得到的结果与理论值的比值即为空白加标回收率。
样品加标回收:相同的样品取两份,其中一份加入定量的待测成分标准物质;两份同时按相同的分析步骤分析,加标的一份所得的结果减去未加标一份所得的结果,其差值同加入标准物质的理论值之比即为样品加标回收率。
Ⅸ 用原子吸收分光光度计测饮料的RSD值和回收率怎么测最好详细点的
答
【1】做6个以上的平行样,就可以求出平均值、RSD值;
【2】采用标准加入法,就可以计算出回收率。
Ⅹ 怎么做回收率实验
回收率实验是在空白基质中定量加入药物,经处理后与标准品的比值。标准品为流动相直接稀释而来,而不是同样品一样处理。若一样,只是不加基质来处理,可能会有很多影响因素被此屏蔽掉。如全部转移有机相时只转移了98%等。也就因此失去了回收率的考察初衷。
作为一个分析方法,回收率一般要求大于50%才行。不论是生物基质还是制剂辅料中的药物,经过样品处理都有一定的损失。
(10)方法验证回收率中的测得值怎么看扩展阅读
回收率主要应用:
气源单位运输液化天然气是使用槽车进行运输的,槽车在气源厂出车前进行称重,此为来货重量 ;而槽车到达天然气企业并完成卸车后再进行称重,此为实收重量,液化天然气简称LNG,其主要特性为-162℃,为液态,而随着温度的上升,可转换为气态 ;反之,气态的天然气随温度的下降,可转换为液态。