大肠杆菌生长期的判断方法有哪些

‘壹’ 在各种鉴定反应中 大肠杆菌应该什么表现

1)E M B平板上；具黑色口必有金属光泽或无金属光泽的菌落
2)革兰氏-染色；呈红色的阴性短杆菌
3)生化为应
4)传统的这种检测方法确定大肠杆菌需要5-7天的时间，且必须做生化鉴定才能确定，使用显色培养基24小时出结果，大肠杆菌显兰色，其他菌显无色，结果一目了然，大大缩短了检测时间，显色培养基必将是一个发展趋势

‘贰’ 如何判断大肠杆菌的分离纯化成功了

首先应该通过革兰氏染色确定是否被芽胞杆菌污染，用稀释涂平板方法纯化，必要时可再选也中加入少量的吐温，37度培养，必要时可用曙红亚甲蓝培养基，这上面长出的大肠杆菌有金属光泽，最后再次镜检单菌落。枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性菌，大肠杆菌是革兰氏阴性菌。通过杆菌试纸可以明显的分辨。枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。
(2)大肠杆菌生长期的判断方法有哪些扩展阅读：枯草芽孢杆菌具有孢子休眠期、生殖生长期两个生长时期，枯草芽孢杆菌会在生长环境恶劣、营养物质缺乏等不适宜的环境下进入孢子休眠期，并且形成具有极强抗逆作用、在高温、酸碱等极性环境下亦可生存的芽胞，从而适应环境得以生存。一旦环境变得适宜生长、营养充足，芽胞会自动进入生殖生长期，芽胞重新生长为枯草芽孢杆菌。参考资料来源：网络-枯草芽孢杆菌

‘叁’ 大肠杆菌的检测方法

多管发酵法。

多管发酵法是一种检测水体中大肠杆菌的传统方法，这种方法是在44.5℃的含有荧光底物的培养基上连续培养24h，而后能产生分解荧光底物——葡萄糖醛酸酶，从而释放出荧光产物，进而使培养基在紫外光照射下产生特征荧光。此方法可被用来对原样品中的菌落数作统计学估计。

在单料或双料乳糖胆盐发酵管内发酵，分离培养试验，利用伊红美蓝培养皿分离，接着是在乳糖发酵管中进行二次发酵，最后通过芽孢染色、革兰氏染色、显微镜观察等来完成。多管发酵法对试验条件要求不高，成本低，但是检测时间较长，容易受其他条件干扰，进而影响到测定结果的精确度。

(3)大肠杆菌生长期的判断方法有哪些扩展阅读：

注意事项：

1、检样时注意无菌操作。

2、稀释时采用的稀释液可以用磷酸盐缓冲液或生理盐水，接种时可采用九管法，设置三个梯度，分别为0.1g/mL、0.01g/mL、0.001g/mL，每一个稀释度的试管应充分混匀。

3、每次实验需要有阴性对照。

4、使用小倒管培养基配制时，为排净气泡，灭菌时不要把试管的盖子盖的太紧，灭菌后注意观察一下倒管中的气体是否排完全、

5、高压灭菌后等高压灭菌锅的压力表达到0，取出培养基放到冰箱冷却，效果会比较好。

‘肆’ 大肠杆菌的检测方法有哪些

大肠杆菌的检测方法有以下几种：一、大便常规化验加大便潜血化验，如果化验结果提示有细菌感染，那么就需要完善大便培养加药敏试验，进一步明确感染细菌的类型和敏感抗生素类型，从而可以作为大肠杆菌的一种监测方法。二、肛门或者直肠内分泌物化验，也可以作为大肠杆菌这种细菌的一种监测手段。三、大肠杆菌还可以在其他部位出现，比如口腔、胃部、呼吸道等，如果在口腔，进行口腔内分泌物化验可以化验出大肠杆菌感染，如果在胃部，进行胃镜检查后病例组织活检可能检出大肠杆菌。如果是呼吸道，进行痰培养加药敏试验，可以化验出大肠杆菌。总之大肠杆菌的检测通常都是标本化验发现的。

‘伍’ 大肠杆菌的检查方法

细菌的分离鉴定
1、标本：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。
2、分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。其他标本可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。37℃孵育18～24小时后，观察菌落并涂片染色镜检。采用一系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒素。
泌尿系统除确定大肠杆菌外，还应计数，每毫升尿含菌量≥100，000时，才有诊断价值。
卫生细菌学检查
大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。
1、细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。中国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。
2、大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。中国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。
全自动微生物定量分析仪（TEMPO）检测
全自动微生物定量分析（TEMPO）仪的大肠杆菌群计数检测有TC和CC两种方法。TEMPO TC的开发是为了获得NF ISO4832标准相当性能水平。TEMPO CC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群的方法。该法是为了获得和AOAC官方方法966.24及美国公共健康联合会检测乳制品检测方发（SMEDP）一致的效果。TEMPO系统根据阳性空的大小和数目来推算出原始样本中大肠杆菌群数目。
食品检测方法 大肠菌群MPN 计数法 1 样品的稀释 1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品,放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,
8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min,或放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋
中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶
（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
1.3 样品匀液的pH 值应在6.5～7.5 之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 调节。
1.4 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL 磷酸盐缓冲液
或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌
吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释
1 次，换用1 支1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。 2.初发酵试验 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3
管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），36
℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续
培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 3.复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 ℃±1
℃培养48 h±2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 4.大肠菌群最可能数（MPN）的报告 按3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的
MPN值。 大肠菌群平板计数法 1 样品的稀释 按上一方法稀释。 2 平板计数 2.1 选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL生理盐
水加入无菌平皿作空白对照。
2.2 及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心
旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。翻转平
板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 3 平板菌落数的选择 选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。 4 证实试验 从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 ℃±1 ℃
培养24 h～48 h，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。

‘陆’ 大肠杆菌生长曲怎么测

有菌体计数法和称重法两种测量方法。

‘柒’ 如何鉴定大肠杆菌

1、发酵法

这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养，该培养基含有荧光底物，需要培养 24 h。然后对荧光底物进行释放，需要采用葡萄糖醛酸进行，让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。

采用这样的方式方法，还可以进行统计学估计原来样品中的菌落。主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等 。

2、滤膜法

该方法主要过程：加入 10 mL 左右的无菌水于滤器中，然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁，再进行过滤，将滤膜放在 M-FC 培养基中，两者之间不能够有气泡，然后进行密封，存放温度为 44.5℃，存放时间约 24 h，直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。

然后记录数据，估算每一单位的水溶液菌群数量，然后进行大肠杆菌量值的换算 。

(7)大肠杆菌生长期的判断方法有哪些扩展阅读：

大肠杆菌是短杆菌，两端呈钝圆形，革兰阴性。有时因环境不同，个别菌体出现近似球杆状或长丝状 ；大肠杆菌多是单一或两个存在，但不会排列呈长链形状。

大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构，但是不能形成芽孢；多数大肠杆菌菌株生长有菌毛，其中一些菌毛是针对宿主及其他的一些组织或细胞具有黏附作用的宿主特异性菌毛 。

生化特性

大肠杆菌在常用的生化特性检测项目中，甲基红试验呈阳性，吲哚产生和乳糖发酵是阳性（个别菌株表现阴性），维-培试验是阴性，尿素酶和柠檬酸盐利用呈阴性（极个别菌株表现阳性），硝酸盐还原试验表现阳性，氧化酶表现阴性，氧化-发酵试验表现为F型

‘捌’ 如何能知道这个菌就是大肠杆菌而不是别的呢，谢谢

看颜色，闻气味，生长温度，生长周期，我主要是靠闻气味，它有种特殊的气味，你可以对比一下其它大肠杆菌和非大肠杆菌。

‘玖’ 大肠杆菌群的检验程序包含哪些

大肠杆菌的检测方法

一、大肠杆菌的生物学特性
大肠杆菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
二、培养特性：
大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。
在普通营养琼脂上有3中菌落形态：
1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、
光滑、呈灰色，在生理盐水中易分散；
2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易
在生理盐水中自凝；
3）黏液型：常为含有荚膜的菌株
三、大肠菌群及大肠杆菌测定——MPN法检验流程（FDA BAM）

检样50g+450ml稀释液，适当十倍稀释样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液，
每个稀释度接种三管LST肉汤（每管9mlLST肉汤并加有导管），每管接种1mL，如没有产气，则报告为阴性；如有产气，则分别接种BGLB肉汤管（35 ± ℃ ，48 ± 2h）和EC肉汤（44.5±0.5 ℃ （水浴培养）24 ± 2h ~48 ± 2h ），对于接种BGLB肉汤管的查MPN表报告结果，验证是否为大肠菌群；对于接种EC肉汤的产气管接种EMB平板（35℃、18~24h）从EMB平板上挑取5个可疑菌转接到PCA斜面，进行革兰氏染色、IMVC生化鉴定、接种LST复检产气查MPN表报告结果验证是否为大肠杆菌。

‘拾’ 大肠杆菌的生长周期是多少

一般大肠杆菌每20分钟繁殖一代，这就意味着，它的生活周期才20分钟。

培养周期得看的目的，种子一般过夜培养，发酵过程应该以菌种消亡时刻为终点，或者以产量最高时刻为放罐时刻。

大肠杆菌的血清型能够引起人体或动物胃肠道感染，主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的，除胃肠道感染以外，还会引起尿道感染、关节炎、脑膜炎以及败血型感染等。

(10)大肠杆菌生长期的判断方法有哪些扩展阅读：

大肠杆菌生物学特征

1、理化特性

大肠杆菌是短杆菌，两端呈钝圆形，革兰阴性。有时因环境不同，个别菌体出现近似球杆状或长丝状 ；大肠杆菌多是单一或两个存在，但不会排列呈长链形状；

大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构，但是不能形成芽孢；多数大肠杆菌菌株生长有菌毛，其中一些菌毛是针对宿主及其他的一些组织或细胞具有黏附作用的宿主特异性菌毛。

2、生化特性

大肠杆菌的生化代谢非常活跃。大肠杆菌可以发酵葡萄糖产酸、产气，个别菌株不产气，大肠杆菌还能发酵多种碳水化合物，也可以利用多种有机酸盐。大肠杆菌在常用的生化特性检测项目中，甲基红试验呈阳性，

吲哚产生和乳糖发酵是阳性（个别菌株表现阴性），维-培试验是阴性，尿素酶和柠檬酸盐利用呈阴性（极个别菌株表现阳性），硝酸盐还原试验表现阳性，氧化酶表现阴性，氧化-发酵试验表现为F型。