检测抗体的方法

A. ELISA实验检测抗体的实验步骤

操作步骤：
（1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。
（2）加稀释的受检血清，保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
（3）加酶标抗抗体,主要根据你的一抗来确定二抗用什么。可用酶标抗人Ig以检测总抗体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
（4）加底物显色

间接法由于采用的酶标二抗是针对一类免疫球蛋白分子(如抗人IgG),因此该法只需要换固相抗原，即可用一种酶标二抗检测各种与抗原相应的抗体，具有更广泛的通用性。

本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。

如果有其他问题，可以联系我，呵呵！

B. 自身抗体的检测方法有哪些

1、抗核抗体检测

抗核抗体是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称，主要是IgG，其次是IgM和IgA，无器官和种属特异性。ANA在大多数自身免疫性疾病中均可呈阳性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA检测在临床自身免疫病诊断与鉴别诊断中是一个重要的筛查试验。

2、类风湿因子

类风湿因子是变性lgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿关节炎患者的血清和关节液内。主要为lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒细胞胞浆抗体

抗中性粒细胞胞浆抗体是指与中性粒细胞及单核细胞胞浆成分发生反应的抗体。当中性粒细胞受抗原刺激后，胞浆中的α-颗粒释放蛋白酶-3、髓过氧化物酶等物质，刺激机体而产生ANCA。

(2)检测抗体的方法扩展阅读

自身抗体的产生原因：

人体的生长、发育和生存有完整的自身免疫耐受机制的维持，正常的免疫反应有保护性防御作用，即对自身组织、成分不发生反应。—旦自身耐受的完整性遭到破坏，则机体视自身组织、成分为“异物”，而发生自身免疫反应，产生自身抗体。

正常人体血液中可以有低滴度的自身抗体，但不会发生疾病，但如果自身抗体的滴度超过某—水平，就可能对身体产生损伤，诱发疾病。自身免疫性疾病中有许多自身抗体，其中最重要的是抗核抗体。

C. HIV-抗体检测方法的确认实验

免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）。国内常用的确认试验方法是WB。
(一_免疫印迹实验(westernblot，WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法，就HIV的病原学诊断而言，它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法，WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。
确认试验流程:
有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性；如果不满足阳性标准，则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带，需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验，呈阴性反应，报告HIV-2抗体阴性；呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低于初筛实验，但它的特异性很高，这主要是基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化，能够检测针对不同抗原成分的抗体，因而能够用WB方法鉴别初筛实验的准确性。从WB确认试验结果看出，初筛试验尽管选择质量较好的试剂，如第三代ELISA，仍会有假阳性出现，必须通过确认试验才能得出准确结果。
(二)免疫荧光实验(IFA)
IFA法经济、简便、快速，曾被FDA推荐用于WB不确定样品的诊断。但需要昂贵的荧光显微镜，需要受过良好训练的技术人员、观察和解释结果易受主观因素的影响，结果不宜长期保存，IFA不宜在一般的实验室开展和应用。
HIV抗体确证试验结果报告
HIV抗体确证试验结果用附表3报告。
（1）符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。
（2）符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（－）”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核酸检测，尽早明确诊断。
（3）符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”，在备注中应注明等待“4周后复检”。

D. 抗体效价的检测方法

多采免疫双向扩散法
【基本原理】
*指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。
-将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。
*优缺点：简便，但敏感性较低，易出现假阴性结果。
免疫双向扩散法的操作步骤
*将玻璃板用水洗净后用75%乙醇冲洗，晾干后放在水平台上备用。
*将1%agar 融化后，置56℃水浴。
*在玻璃板上铺胶，约1.5mm 厚，凝固后打孔(直径 3rnm)，孔间距10mm。
l 抗血清(抗体预先作系列倍比稀释即ml 抗原样品，周围孔内每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝胶板置湿盒内，室温扩散24h。
*观察结果。
凝聚胺法测定孕妇血清IgG抗-A（抗-B）效价的方法待检血清与0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在试管内等量混合，放入37℃水浴1 h以破坏血清中的IgM抗体，吸取处理后的血清用生理盐水倍比稀释，稀释度分别为2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然后每管加入相应的3%～5%红细胞悬液，置37℃水浴30 min，观察是否凝集，不凝集者用生理盐水洗涤3次，然后加入低离子盐水介质(LIM液)，混匀，滴入2滴凝聚胺，混匀后3 000 r/min离心30 s，扣摇肉眼可见明显的凝集(无凝集者须重做)，再加入2滴重悬液，轻摇，观察凝集是否消失，凝集1 min内不消失者表示受检者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗体效价检测的其它方法
*环状沉淀试验，需较多的抗血清，现已很少用；
*对流免疫电泳，比琼脂免疫双扩散法敏感，较简便、实用；
*酶联免疫吸附试验 (ELISA)。
通常抗体效价低于1：128是没有问题的，有些孕妇高达1：256以上，而且抗体效价最好1个月查上一次，有时候会有所变化。

E. 抗体滴度的检测方法

检测方法同前[11].A450处测定光吸收值.将抗体滴度定义为:实验组和阴性对照组光吸收比值≥2.0时最大的血清稀释倍数
源自: 佐剂DDA和MPL对提高结核杆菌组合D... 《生物化学与生物物理进展》 2005年 余大海,蔡宏,朱玉贤

F. 用什么方法可以检测抗体是否与蛋白质起作用，并设计实验用该抗体纯化该蛋白

检测目的基因是否进入到受体细胞的方法，一般包括分子水平检测和个体水平检测。其中分子检测有3个层次：1目的基因是否整合到受体细胞染色体dna上，2目的基因是否转录出mrna，3目的基因是否翻译出蛋白质。1和2都可以用dna分子杂交技术检测，3可以用抗体-抗原的方法检测。个体水平的检测包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否具有抗性及抗性的程度；基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较等。

G. 如何检测体内是否存在抗体

用人们俗称的“两对半”检查， HBsAg (表面抗原)，HBsAb （表面抗体），HBeAg （e抗原），HbeAb（e抗体） ，HbcAb （核心抗原）。这种检查方法较准确，误诊的机率很小，要是没记错的话HBsAg ，HbcAb ，HbeAb这三种指标都为阳性就是“大三阳”了，有较强的传染性，其他指标阳性有可能是“小三阳”或是有抗体，感染后又好了的标志。

H. 如何测定抗体亲和力

在《抗体工程》上有亲和力常数的测定方法，如平衡透析、竞争结合、荧光增强法、硫氰酸盐洗脱法、ELISA和固相放射免疫测定法（SPRIA）等。其中ELISA和SPRIA是最敏感的检测方法。通常采用竞争结合以及Scatchard作图法。如果有条件用SPR方法，这是目前国际上流行的方法，该方法灵敏，客观。

另外测亲和力之前最好先测定抗体的有效浓度，方法是夹心法，用标准免疫球蛋白做标准品。因为在作OD-抗体浓度曲线时如果抗体浓度不够，做不出来好的S形曲线，达不到最高值。所以建议你先测定抗体的浓度。如果浓度较低的话，你可以浓缩一下，方法很多，如PEG法，真空冷冻干燥，超速离心等等。

I. 可利用什么方法可以检测到人体是否有抗体

去医院经过专业的医生看看，检测那一项对人体有抗体。

J. 如何检测体内是否存在抗体拜托了各位 谢谢

1. HBsAg (乙肝表面抗原) 原理：采用ELISA 双抗体夹心法。双抗体夹心法用于检测相对分子质量较大的蛋白质抗原。先将已知特异性抗体包被于固相载体上，加待测样本，若 其中有相应的抗原，则抗原和抗体特异性结合洗板后加入酶标记特异性抗体，使在固相上形成包被抗原抗体复合物洗板:加酶底物及色原呈色。双抗原夹心法则是利用包被抗原和标记抗原检测样本中的特异性抗体。抗原或抗 体水平与所测吸光度(A) 值呈正相关。 将纯化的抗HBs包被固相载体，加入待测样品，括其中含有HBsAg ，则与载体上的抗HBs 结合，再加入辣根过氧化物酶( HRP) 标记的抗HBs 抗体，加酶底物/色原显色。显色程度与 HBsAg 含量成正比。 2.HBsAb （乙肝表面抗体） 原理：采用ELISA 双抗原夹心法。反应板上包被纯化HBsAg ，待测样品中抗HBs与之反应，再加HRP-HBsAg 形成夹心，加酶底物/色原悔液显色。 3.HBeAg 和HbeAb 原理：检测HBeAg 和抗HBe 分别用ELISA 双抗体夹心法和Elisa竞争法。 4.HbcAb 原理：Elisa竞争法。用于检测待检样本中未知抗原或抗体。测抗原时用已知抗体包被固相载体，然后同步加入含有待测抗原的样本和酶标记抗原，使待测抗原与酶标记抗原竞争结合在固相载体上的抗体；洗板加酶底物及色原!让包。待iYlIJ 悔液抗原量越多，则被结合的酶标记抗原量越少，呈色越浅。呈色深浅与待测抗原的量成反比。测未知抗体时用已知抗原包被固相载体，同步加入含有待测抗体的标本和酶标记特异抗体，二者竞争结合固相载体t 的抗原.待测抗体量越多，酶标记抗体与固相抗原结合的最就越少，呈色就越浅。待测抗体的水平与呈色程度成反比。