转录检测方法

㈠ 如何检验目的基因是否转录

检测目的基因是否转录通常采用分子杂交的方法。

• 基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平：即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。

• 转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为探针，检测RNA链。和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。

• 也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合

㈡ 设计一个检测某一基因是否转录的检测方法的实验，简述其过程与原理。

原理：转录是以一条DNA链为模板，合成出一条mRNA的过程。所以，检测某一基因在特定条件下是否转录，可以提取样品的mRNA，反转录成cDNA，然后用扩增该基因的PCR引物扩增，如果有条带就是说明转录，没有条带就是不转录。
过程：
1.提取样品mRNA；
2.反转录合成cDNA；
3.设计该基因特异的PCR引物；
4.进行PCR扩增，电泳，检测结果。

㈢ 如何在转录水平 检测某基因的表达

可以使用northern印记法。首先用放射性磷同位素制备与目标基因序列一直的RNA探针。然后将目标基因导入大肠杆菌培养一段时间。人为裂解大肠杆菌，用冷酸法提取RNA。将提取的RNA用选择性内切酶处理后过电泳，使各段RNA分开。再将电泳图谱固定于纤维膜，以制备好的放射性RNA探针与之杂交，随后进行放射性自显影。若有显影印迹出现，则证明大肠杆菌中有与探针RNA序列互补的RNA被转录，进而证明了目标基因的被表达。

㈣ 检测目的基因是否转录出mRNA的方法！！

检测目的基因是否导入用的是DNA-DNA分子杂交，检测是否转录用DNA-RNA分子杂交，检测是否翻译用抗原-抗体杂交。

㈤ 如何用实时定量检测转录本的过表达

你所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增
RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reverse transcription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也简称RT-PCR，但是我觉得这是不对的，不。基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录，然后将所获得的cDNA作为模板，设计引物进行扩增，是一种检测基因表达的常用方法。
实时荧光定量PCR也就是Real-Time PCR，原理有点多，请自行网络，其最大的作用是检测样品中的初始DNA浓度。
至于三者的关系，RT-PCR和实时定量PCR应该都属于PCR，在RNA实验中，这二者都会应用到。例如你要比较2个组织中的某基因的表达差异，首先你要提取2个组织的总RNA，然后通过RT-PCR检测该基因是否在2个组织中有表达，然后通过实时定量PCR测定该基因在2个组织中的表达量是否具有显着性差异

㈥ 检验目的基因是否转录用什么方法

应用分子杂交进行检测。
分子杂交技术：不同的DNA
片段之间，DNA
片段与RNA
片段之间，如果彼此间的核苷酸排列顺序互补也可以复性，形成新的双螺旋结构。这种按照互补碱基配对而使不完全互补的两条多核苷酸相互结合的过程称为分子杂交。检测目的基因是否进行转录，即有无互补RNA产生，可以使用分子杂交技术。

㈦ 检测基因表达的方法有哪些

基因工程第四步中包括导入检测，转录检测和翻译检测，方法分别是dna分子杂交技术、分子杂交技术、抗原-抗体杂交技术。有的还可在个体水平是进行检测，如抗性检测等

㈧ 分子杂交如何检测转录

检测目的基因是否导入用的是dna-dna分子杂交，检测是否转录用dna-rna分子杂交，检测是否翻译用抗原-抗体杂交。
前两者都是通过一条被标记的dna单链作为基因探针来实现的。这个探针具体的做法就是：用目的基因转录出的mrna为模板，以被放射性同位素标记的脱氧核苷酸为原料，用逆转录的方法合成一条被标记的dna，然后把模板的mrna给水解掉，这样就得到一条被标记的dna单链，这就是探针。它的特点就是可以和目的基因转录的mrna互补配对（即能形成杂交带），所以把探针放在受体细胞中如果发现有杂交带产生，就说明目的基因转录了。
另外，这个探针也可以用来做dna-dna分子杂交，即检测目的基因是否导入，方法：先取出受体细胞中dna然后高温变性成单链，把探针放进去，然后降温复性，如果形成杂交带说明，这些dna中有能和探针互补的dna片段，即目的基因。因为这个探针本身就是由mrna逆转录来的，它的碱基序列与目的基因的一条链完全相同，当然就可以和另外一条链刚好互补了。
这样可以吗？

㈨ 反转录成功怎样检测

1。如果是针对目的基因
反转录为cDNA
将cDNA加到T载体上 去测序。
查看测序结构撒

2。如果想知道你是否获得了DNA，直接电泳，可以看到一条弥散的带。

㈩ 检测基因表达的方法

主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)

一、外源基因转录水平的鉴定

基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平。

即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为探针，检测RNA链。和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。

如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。

二、外源基因表达蛋白的检测

表达蛋白的检测方法有三种：

1、生化反应检测法：主要通过酶反应来检测；

2、免疫学检测法：通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；

3、生物学活性的检测。

Western杂交是将聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分离抗原（Antigen）固定在固体支持物上（如硝酸纤维素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白质在凝胶中迁移率不同，据此可确定特定的抗原存在与否以及相对丰度，或者蛋白质是否遭到降解等。

蛋白质电泳后转到NC膜，放在蛋白质（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，温育，以封闭非特异性位点，然后用含有放射性标记或酶标记的特定抗体杂交，抗原-抗体结合，再通过放射性自显影或显色观察。

(10)转录检测方法扩展阅读

外显子与内含子表达过程中的相对性 从内含子与外显子的定义来看，两者是不能混淆的，但是真核生物的外显子也并非都“显”（编码氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外显子完全“不显”之外，几乎全部的结构基因的首尾两外显子都只有部分核苷酸顺序编码氨基酸，还有完全不编码基酸的外显子，如人类G6PD基因的第一外显子核苷酸顺序。

已发现一个基因的外显子可以是另一基因的内含子，所这亦然。以小鼠的淀粉酶基因为例，来源于肝的与来源于唾液腺的是同一基因。淀粉酶基因包括4个外显子，肝生成的淀粉酶不保留外显子1，而唾液腺中的淀粉酶则保留了外显子1的50bp顺序，但把外显子2与前后两段内含子一起剪切掉，经过这样剪接，外显子2就变成唾液淀粉酶基因中的内含子。

同一基因在不同组织能生成不同的基因产物来源于不同组织的类似蛋白，可以由同一基因编码产生，这种现象首先是由于基因中的增强子等有组织特异性，它能与不同组织中的组织特异因子结合，故在不同组织中同一基因会产生不同的转录物与转录后加工作用。

此外真核生物基因可有一个以一的poly(A)位点，因此能在不同的细胞中产生具有不同3’末端的前mRNA，从而会有不同的剪接方式。由于大多数真核生物基因的转录物是先加poly(A)尾巴，然后再行剪接，因此不同组织、细胞中会有不同的因子干预多聚腺苷酸化作用，最后影响剪接模式。