存活检测方法

① 细胞活力测定常用的简便方法

又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。

② 精子成活率怎么检查

检查精子存活率，一般建议你到正规医院，这样比较有保障。精子存活率是指一滴精液中活精子的比例。

一般来说，在进行精子存活率检查之前，男性不能喝酒，不能吃辛辣刺激性食品，禁欲7天后就可以到医院去检查了。

一般会通过自慰取得精液后通过分析精液量、精子密度及其精液中精子的总数量、精子凝集、精子活力与活率、精子形态、精液液化等各方面的情况来确定精子的存活率是否正常。

正常情况下，精子的成活率应该是大于85%-90%的，能定向运动，爬高5厘米。

(2)存活检测方法扩展阅读：

注意事项

1、改变不好的生活习惯，戒掉烟酒。经常的吸烟对精子的质量会产生很大的影响，饮酒后男性70%的精子会出现异常，即使受孕也可能造成胎儿发育不良。

2、注意休息，不易过于劳累。男性工作压力大，睡眠不足等也容易造成身体疲惫、易怒，内分泌失调，从而影响性功能及精子质量。

3、养成锻炼身体的好习惯，男性免疫能力低，肥胖和虚弱的身体都会降低精子质量。如果能适当的运动，无形中也能增加精子的活跃程度。

4、注意饮食，多补充些营养。精子的生成需要多种维生素、蛋白质、钙、锌等营养素，饮食不合理会造成精子先天不足。因此，男性应该注重一下自身的营养是否跟得上。

5、干净卫生的性生活，也有利于精子的质量。如果夫妻之间的性生活不注意卫生，可引进局部感染，或者一些常见的妇科疾病也可能通过共同生活传染给自己的性伴侣。

因此，男性应该注重卫生的性生活，才会减少感染，提高精子质量。

参考资料：网络-精子成活率

③ 软骨细胞成活率怎么检测

发明公开了一种软骨组织细胞存活率检测方法，包括：将软骨组织剪切成小碎块，用0.25％胰蛋白酶‑EDTA2Na水浴消化；离心后再用0.2％Ⅱ型胶原酶水浴继续消化；待软骨消化变为絮状，加入DMEM培养液中止消化后200目筛网过滤，取滤液离心，弃上清液；向细胞悬液中加入FDA和EB，避光孵育；使用IPP图像分析软件对图片中绿色和红色细胞计数，根据公式计算软骨组织细胞存活率。本发明利于充分消化分离软骨细胞，减少了消化分离过程中对软骨细胞造成的损伤，利于维持细胞活性，避免了双荧光染剂激发波长不同所致的繁琐，简化了操作；用于关节软骨损伤治疗方案优劣的筛选以及组织库软骨保存效果的评价。

④ 精子成活率怎样检查

精子对于男性朋友来说是很重要的，因为精子的在形成新生命中是不可缺少的。所以在平常的时候，就要对它要有所的认识，但是因为精子的存活率又决定生育能力的强与弱，在出现不育的时候，就要对精子存活率进行检查，从而确定是不是精子发生了异常。现在就来对此检查进行了解下。

1、精液常规查：现在常规的精液分析主要是能了解到男性的精液量、精子密度还有其精液中精子的总数量、精子活力与活率、精子形态、精液液化等方面的信息。

2、宫颈粘液穿透试验：一般，影响到精子穿透宫颈粘液的常见的原因是宫颈粘液的理化状态、精浆酶的活性、精子的运动质量等。了解精子和宫颈粘液的相互作用，在临床现在多数是采用性交后试验的方法。

3、低渗肿胀试验：在精子的各种功能中，精子膜的功能可以直接影响到男性精子的获能、精子的顶体反应和精卵融合等，通过该试验可预见精子细胞膜的完整性和顺应性，因而也是较为常用的一种检测方法。

⑤ 精子成活率怎么检测啊

检测精子成活率，主要是靠精液检查。首先通过手淫或通过跟性伴侣的性生活后，把精液取出，一般取3ml左右，然后在精液取之后，一定要在30分钟之内要送到化验室，否则超过时间，整个化验的质量或数量就不准确，临床中通常通过服用育希、生精胶囊等来提升精子成活率。

⑥ 细胞活力测定常用的简便方法是

MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
细胞活力常用百分比表示，活力的大小对试验结果有很大影响。细胞活力的测定有许多方法，最简便常用的方法是台盼蓝（trypanblue）染色法。台盼蓝又称锥蓝，是一种阴离子型染料，这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色，但死亡细胞的细胞膜通透性增加，可使染料通过细胞膜进入细胞内，使死细胞着色呈蓝色。

⑦ 检测细胞存活率的方法

MTT或台酚蓝染色，被染上的为活细胞，镜下计数。

⑧ 某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率,请设计1到2种的可行的检测方法

用待测样品与标准样品进行对比发酵试验。可以根据发酵成熟时间或者发酵产物的生成量，或者产物生成速度对比，来求得样品中的活菌的成活率。

检测方法有：

1、发酵成熟时检测并计算活菌存活率。

2、比校发酵产物的生成量计算活菌存活率。

3、计算生成物的生成速度对比，计算活菌的成活率。

(8)存活检测方法扩展阅读：

培养将所试菌肉汤培养物划线接种营养琼脂,36 °C培养24~ 48h，自同一单个菌落取菌,分别接种单双管法 O / F 试验培养基,其中单管法用接种针穿刺接种至管底。同时设不加葡萄糖接种发酵型细菌和加有葡萄糖不种菌的空白对照。36°C培养24h，开始观察结果,每24h记录一次,共观察4d。

⑨ 现在细胞存活率测试用什么是主流

细胞计数和存活测试
1. 原理：
1.1. 计算细胞数目可用血球计数盘或是Coulter counter 粒子计数器自动计数。
1.2. 血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber 中细刻9 个1 mm2 大正方形，其中4 个角落之正方形再细刻16 个小格，深度均为0.1 mm。当chamber 上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1 mm2 x 0.1 mm=1.0 x 10-4 ml。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml 中之细胞数目。
1.3. 存活测试之步骤为dye exclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue 染料，如果细胞不易吸收trypan blue，则用红色之Erythrosin bluish。
2. 材料：
2.1. 0.4 % w/v trypan blue (GibcoBRL 15250-061)
2.2. Erythosin bluish stain
取0.1 gram Erythrosin bluish (Sigma E-9259) 及0.05 gram preservative methyl
paraben (Sigma H-3647) 溶于100 ml Ca++/Mg++ free saline
2.3. 血球计数盘及盖玻片(Hemocytometer and coverslip)
2.4. 计数器(counter)
2.5. 低倍倒立显微镜
2.6. 粒子计数器(Coulter counter, Coulter Electronics)
3. 步骤：
3.1. 取50ml 细胞悬浮液与50ml trypan blue (or Erythrosin bluish) 等体积混合均匀于1.5ml 小离心管中。
3.2. 取少许混合液(约15ml) 自血球计数盘chamber 上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100 倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色(或红色- Erythrosin bluish)。
3.3. 计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数(至少乘以2，因与trypan blue 等体积混合)，最后乘以104 ，即为每ml 中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。
4 大格*细胞总数x 2 x 104 / 4= 细胞数/ml
*每一大格的体积= 0.1cm x 0.1cm x 0.01cm = 10-4 ml
3.4. 若不用血球计数盘，可用Coulter counter 作自动计数，惟无法辨别死细胞或活细胞。
3.5. 范例：
T75 monolayer culture 制成10ml 细胞悬浮液，取0.1 ml 溶液与0.1ml trypan blue 混合均匀于试管中，取少许混合液加入血球计数盘，计数四大方格内之细胞数目。
活细胞数/方格：55 ,62, 49, 59
死细胞数/方格：5, 3, 4, 6
细胞总数= 243
平均细胞数/方格= 60.75
稀释倍数= 2
细胞数/ml：60.75 x 104 x 2 = 1.22 x 106
细胞数/flask： 1.22 x 106 x 10ml = 12.2 x 106
存活率：225/243﹦92.6 %

⑩ 怎样检测细胞的生长，存活及增殖

BrdU标记法
1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。
2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封闭。
7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
结晶紫法
1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。
2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。
3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。
4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。
5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。
6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。
7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。
8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。
酸性磷酸酶法
1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。
2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。
5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。