1. 检测组织sod时，抑制率超过60怎么选择
SOD酶的活力的测定方法如下：
直接法 原理是根据O2 或产生O2 的物质本身的性质测定O2 的歧化量，从而确定SOD的活性。经典的直接法包括：脉冲辐射分解法、电子顺磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵，一般较少应用。
2.一般化学法 这些方法的共同特点是要有一个O2 的产生体系和一个被O2 还原或氧化的可检测体系。在SOD存在下，一部分O2 被SOD歧化，因而O2 还原或氧化检测体系的反应受到抑制。根据反应受抑制程度，测定SOD的活性。一般化学法有邻苯三酚自氧化法、细胞色素C还原法、羟胺法、黄嘌呤氧化酶-NBT法、肾上腺素法、没食子酸法、6-羟多巴胺法、亚硝酸盐形成法和碱性二甲亚砜法。
2. SOD的测定方法有哪些
1、测定方法很多，常见的有化学法、免疫法和等电点聚焦法。其中化学法应用最普遍，化学法的原理主要是利用有些化合物在自氧化过程中会产生有色中间物和O2 -，利用SOD分解而间接推算酶活力。
2、在化学方法中，最常用的有黄嘌呤氧化酶法，邻苯三酚法，化学发光法，肾上腺素法，NBT-还原法，光化学扩增法，Cyte还原法等。
（1）改良的邻苯三酚自氧化法简单易行较为实用。
（2）化学发光法和光化学扩增法不适用于测定Mn-SOD，但对于Cu/Zn-SOD反应极灵敏。
（3）Cyte还原法用于Mn-SOD活力测定结果稳定，重复性好。但专一性和灵敏度不够理想，而且需要特殊仪器，实际应用受到限制。
（4）亚硝酸盐形成法与CN—抑制剂或SDS处理相结合，应用于Mn-SOD测定，灵敏度比Cyte还原法提高数倍，而且专一性强，重复性好，操作方便，不需要特殊仪器和设备，易于实际应用和推广，是目前较好的测定方法之一。
超氧化物歧化酶(SOD) 超滤法生产新工艺
前 言
SOD的中文名称是超氧化物歧化酶，其英文名为Superoxide dimutase，分子量(牛血红细胞) 约 32000 是广泛存在生物体内的金属蛋白醇 ， 别名有 ： orgotein，ormetein，ontosein； Cu.Zn-SOD；Palosein等，SOD被科学家誉为21世纪最有发展前途的药用酶。
一、本工艺是从红细胞，肝和其它哺乳动物组织分离而得的金属酶；含两个亚基，每个亚基各含一个铜原子和一个锌原子，SOD可催化O2，歧化为H2O和O2， 其性质不仅仅取决于酶蛋白，而且还取决于活性部位的金属离子，按金属离子类型不同， 可分为Cu.Zn--SOD和Fe--SOD，Mn--SOD三种.在一般条件下，SOD较稳定. 不同来源的 Cu.Zn--SOD，其紫外吸收光谱略有差异，如牛血SOD在258nm处显示最大吸收，而猪血SOD的最大吸收峰为265nm，在特定条件下，酶的活性可下降，甚至完全丧失， 如氰化物可抑制SOD活性，双氧水使SOD活性下降，氯化胍能明显抑制SOD活性等。
二、SOD用途主要是基于SOD是超氧阴离子清除剂，超氧阴离子(O2~)是人体内有毒物质，它能引起多种疾病，故能清除炎症过程中伴同产生的超氧离子， 而显示出强大的抗炎作用。
在医药工业：SOD可以治疗由于超氧离子引起的各种疾病，如糖尿病，白内障， 风湿性关节炎等，也是消炎的有效药物，而且还能抗衰老，抗肿瘤，抗辐射， 抗自身免疫疾病，现代研究表明：SOD还能治高血压，冠心病，胆囊炎，肺气肿等难治之症. 日用化学工业：由于SOD有防止细胞老化和解毒等功效， 因此在化妆品和护肤剂等工业产品中，添加SOD之后，具有防晒，祛斑，使皮肤柔嫩的作用.是目前化妆品行业中不可缺少的一种添加剂，国内及同行都已出现大量产品.食品工业：在食品添加剂加 SOD之后，增强营养，解除毒性，延长体内细胞寿命，国内已有SOD营养液产品， 并通过上海科研单位有关专家的鉴定。
三、SOD的开发前景：目前SOD在全国仅有少数科研单位及生化制药厂研究和开发本产品，而使用SOD产品厂家却日益增多，远不能满足市场需求 . 为鼓励和大力开发SOD新产品，国家已将其列入重点科技开发项目，并投放大批经费，现已获得成功， 开始向企业化生产转移，市场前景十分广阔。
四、注意事项：(1)我中心热忱欢迎社会各界朋友现场学习，由生化工程师向您授课，通过现场操作，指导，培训，使您尽快掌握该技术。(2)本工艺， 技术资料等不经我公司同意，不得擅自转让，翻印，销售给任何单位和个人，违者法律追究。
新法提炼技术
一、主要设备：(1)工业用离心机一台；(2)恒温水浴锅(10L--50L)(可自制)1台；(3)冰柜1台；(4)搅拌机1台；(5)玻璃器皿：1000ml，500ml烧杯各3只，50ml烧杯 2 只，50ml，500ml量杯各1个；(6)塑料桶若干个。
二、主要试剂：(工业纯度)柠檬酸钠，柠檬酸，葡萄糖，乙醇90%，氯仿，丙酮，氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，去离子水或蒸馏水，葡萄糖凝酸胶SephadexG-- 100 和DEAE--纤维素.
三、试剂的配制：
1.抗凝剂配方：(1)柠檬酸钠30g，柠檬酸10g葡萄糖 25g加水至1升，一般此种是每7ml血液，加1ml(抗凝剂).(2)40g/升柠檬酸钠溶液：在1升水中加入0.9克的氯化钠。
2.生理盐水：(0.9%)在91克水中加入0.9克的氯化钠。
3.磷酸盐缓冲溶液的配制：PH7.6，0.2M磷酸盐缓冲溶液，一般用Na2HPO4.H2O，35. 61 克 / 升和NaH2PO4.2H2O 31.21克/升，前者加87.0ml，后者加13.0ml混合后即为PH=7.6 缓冲溶液，如果用K2HPO4.3H2O为45.644g/升，NaH2PO4.2H2O为31.21克/升，仍是前者87.0ml，后者13.0ml混合后即得。
4.冷却剂：在本工艺中有使用-15度低温，一般用如下配方：用33克食盐加入100克雪或碎冰，以此比例配成混合体可达-21.3度。
四、工艺流程
(一)除血红蛋白
1.血液抗凝处理，在新鲜牛、马、猪血中迅速加入ACD1号抗凝剂，并缓慢搅匀，每7毫升血液中加入抗凝剂1毫升或2号抗凝剂。
2.把抗凝处理的血液放入离心机，以3000r/min离心约15--20分钟， 用吸管把上清液(黄色血清)小心吸去抛掉，下层的红血球用2--3倍生理盐水洗2--3次，在每一次洗涤中，用离心机以3000r/min离心，7--8分钟，反复操作后，得到洗涤血红细胞，洗涤后的血红细胞在-15度下冷冻可保存半年并不影响产率和比活，在血液量大， 处理不完时必须这样做。
3.在洗净的红血球中加入等体积去离子水，剧烈搅拌30分钟，使红血球细胞壁砍碎，以使其内的SOD浸出.最好在0--4度静止过夜后，把溶血进行有机提取。
4.接着向溶血中缓缓加入0.2--0.25倍体积的预冷(-15度)95%乙醇和0.1--0.15倍预冷氯仿，搅拌10--15分钟后，原溶血呈浆糊状，静止1--2小时，用滤布除去凝固的血红蛋白，然后将滤液2500r/min离心约1--5分钟留上清液抛去沉淀， 此时如果上清液略为微黄色时，可用快速过滤纸过滤，可得到微带蓝色的清澈透明的粗酶液。
(二)粗酶液的初步提纯：
1.丙酮提醇：向酶液中加0.8倍量预冷(-15度 ) 丙酮 ， 生成大量白色沉淀 ， 以3000r/min离心2分钟收集沉淀，上清液可不必吸取，直接倾倒。
2.热变性：(除杂蛋白)准备好衡温浴锅，在本工艺中，提前30分钟， 注满水接通电源后，使之加热到55--60度以省时间，将沉淀量约50倍量体积比加入0.2MPH=7.6磷酸钠缓冲溶液，水浴加热至60度，15分钟后迅速冷却到室温.3000r/min离心2 分钟得上清液，在上清液中，缓缓滴加0.6倍体积的预冷(-15度)丙酮，生成白色沉淀。
3.初纯SOD：在上述沉淀中加去离子水，制成20--30%SOD溶液，分装入样品瓶中，放入冷冻干燥机中，于开机后以0.2--0.1Torr真空度，约1.5--2小时， 得到化妆或食品用SOD，该产品比活大于3000u/mg，外观呈微带蓝色的白色冻干品。
(三)SOD进一步提纯：
SOD精品一般是把SOD产品经过柱层析，柱层析后的SOD没有小分子等杂质， 层析后为高活性的SOD大分子.SOD精品价格更高，它主要作为生物化学试剂， 化验室标准试剂试用.目前SOD柱层析有两种，二者可单独使用，也可结合使用，一般是DEAE-- 纤维素层析和SephadcxG--100葡聚糖凝胶层析，将(二)2，热变性后SOD丙酮沉淀用PH7.6，0.2MNaH2PO4-NaHPO4缓冲溶液溶解，有不溶的杂蛋白时.离心抛去沉淀，上清液上DEAE--纤维素或SephadsxG--100层析柱(1*20cm或2.5*30cm)，梯度洗脱 ， 洗脱液为PH7.6，0.2M，NaH2PO4--NaHPO4缓冲液，下流速度控制在0.2--0.5ml/min，在分光光度计上用紫外谱325nm处测流出液，合并活力峰，再用蒸馏水反复透析，透析彻底后， 放入样品皿置于冷冻干燥机中干燥后即得SOD精品。
五、注意事项：
1.掌握适当的温度和时间：虽然SOD对热较稳定， 但在分离纯化过程中最好还是采用较低温度，一般以0--10度为宜，时间长不要超过3天。
2.注意提取，提纯方法：使用有机溶剂或者加热均能有效沉淀蛋白质， 但掌握适当溶剂和加热结合的办法可以达到最佳效果。
六、SOD的检测方法：活性检验，比较方便的办法是用连笨三酚自氧化法， 先测得连笨三酚的自氧化速率，然后加入SOD再测得加入SOD之后的氧化速率，按照酶活性单位定义，即在最佳条件下，每分钟抑制连笨三酚自氧化分解速率达50% 的酶量定义为一个酶单位.依次求出活力总值 ，同时也可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳来测定其纯度，看其分子量32000左右的一条带是否与有关文献指导一致.
超氧化物岐化酶(superoxide dimutase 简称SOD)是一种重要的氧自由基清除剂，作为一种药用酶，引起国内外生化届和医药届的极大关注。SOD应用于医学临床上可以治疗多种疾病，类风湿性关节炎、心肌梗塞等，在防辐射，抗衰老，抗肿瘤等方面也有积极的作用，而且广泛用于化妆品和食品添加剂的行列。
自1969年Mccord和Fridovich 首次发现从牛血细胞中发现超氧化物岐化以来，到目前为止，国内已有几十家科研单位对SOD作了大量的研究和试产工作，而且有些已批量生产。SOD引起了国内生化界的重视，1988年在浙江宁波如开了《全国首届SOD学术会议》。1989年4月在河南开封《第三届药用酶学术会议》上，SOD被列为重点开发项目，90年7月在大连《全国第二届SOD学术会议》，SOD已作为一种药用酶发展较快，将成为一种很有前途的生化产物。
SOD是一种广泛存于动物、植物和微生物的生物酶，国外药用SOD系从血中提取，国内SOD已开发的品种已超过20种，证明我国对SOD的研究和应用已进入新时期。
我国从牛、马、猪、鸡、狗等动物血中提取SOD来源丰富，成本低，提取和纯化较方便，药细胞膜易破，用常规分离纯化法可获得高纯度的SOD。
本技术采用热变性，超滤新技术，不仅大大简化了工艺过程，而且产品质量和收率都比老工艺有较大的提高，其提取的SOD均为CuZu-SOD。
一、药品与仪器：
(1)柠檬酸三钠：Na3C6H6O7 (2)工业丙酮CaH6O
(3)邻苯本酚 (4)酸磷钾K3Poe4
(5)弱碱性阴离子交换剂DEAE Sephadsxa-50外观40-120ubrd或者DEAE-cell-ujose(DE-32)二乙基纤维素。 (6)冷冻干燥器(自己组配)
(7)层折柱(7.5＊30cm) (8)离心机
以上试剂及其它药剂、仪器可在各省市化学试剂商店、医疗器械商店购买。
二、Cu、Zu-SOD的提取及纯化(牛、马血为例)
1、工业流程：
加抗凝剂 盐洗
鲜牛血--------------------->红血球------------------------>
离心除黄色血浆 加NaCL
热变性1 热变性2
压积红细胞-------------->淡黄色混合液--------------------->
68度30分钟 60-65度20分钟
加丙酮 加丙酮 层析
浅蓝色清液----------->絮状沉淀-------------->沉淀------------>
冻干
透析除盐
洗脱----------------->透析液--------->SOD(冻干品)
2、提取方法
(1)收集红细胞：鲜牛血100升，加入3. 8％柠檬酸三钠抗凝剂搅拌均匀，静置，使红细胞自然沉降，除去上层大部分血浆，下层液再离心除尽其余血浆，再加入3倍量0.9％氯化钠(精制食盐)洗涤两次， 离心可收集到压积红细胞(40升)。
(2)热变性1：收集的红细胞再加入4公斤氯化钠，40克氯化铜，蒸馏水100升搅匀，水浴加热到68度恒温30分钟，迅速冷却加至室温，过滤除沉淀，收集滤液。
(3)热变性2：滤液在65度恒温水浴下，向滤液中慢慢中入40克氯化铜，至滤液清澈变为淡蓝色为止，保温20分钟，迅速冷却至室温，离心去沉淀得上清液。
(4)SOD粗品：超滤心清液加入0.75倍全积的丙酮沉淀， 离心收集沉淀于离于水，离心除去不溶物得清液，清液加入0.75倍体积的丙酮沉淀， 离心收集沉淀，沉淀经无水丙酮洗涤脱水两次，真空干燥得淡蓝色粉末状SOD粗品
(5)SOD粗品提纯：SOD粗品溶于2.5mmol/L，PH值7.6磷酸钾缓冲液，将该混合液上在7.5＊30cm的层柱上，离子换剂为DEAE-SphadexA-50(该柱事先用缓冲平衡)，以100～200ml/小时速度上样，完毕后用同一缓冲A280mm值，低于0.02然后用25～200mmol/L，PH值7.6磷酸钾缓冲液进行直线梯度分段洗脱，流速为100ml/小时。用部分收集器收集， 洗脱液经透析除盐后，得浓缩的透析液，经冷冻干燥，得SOD成品，(呈浅绿色)。
三、SOD活性测定：
SOD的测定方法很多，常见的有化学法，免疫法等电点聚焦法等，化学法测定的原理主要是利用有些化合物如邻苯三酚，在自氧化过程中会产生有色中间物降超氧游离基(O2)这样就可以利用SOD分例(O2)。阻止中间物的积累而测定其酶活性。
1、试剂及仪器
(1)邻苯本酚分析纯，用10mmol/LECL配成50mmol/L溶液。
(2)UV－754紫外分光光度计。
2、测定方法：
(1)邻苯三酚自氧化速度的测定。
在25度、45ml`50mmol/L、PH值8.3、K2HPO4－KH2PO4缓冲液中加入10mmol/L的邻苯三酚，迅速摇匀，倒入光径1cm的比色杯内，在325mm波长下每隔30秒测A值一次，要求自氧化速度控制在0.0700d/mm 左右。
(2)SOD或粗酶抽提液活性测定：
测定方法同测邻苯三酚自氧化速度，在加入邻苯三酚前加入待测SOD样液，测得数据按以下公式计算酶活性。
0.0700－A325mm/min
----------------------------------------＊100％度
0.70
样液稀释倍数 样液稀释倍数
酶活性(u/m1)＝------------＊反应液总体积＊----------------
50％ 样液体积
3、蛋白浓度(mg/ml)和蛋白的计算：
SOD或粗酶抽提液，经280mm紫外比色测定后，查牛轿清白蛋的标准曲线，由此算出每ml含ug蛋白的量。
蛋白浓度＝ug蛋白/ml＊样液稀释倍数＊10负3次方＝mg蛋白/ml总蛋白＝mg蛋白/ml＊原液总体积＝mg蛋白。
4、比活(u/mg蛋白)的计算：
单位活力(u/ml) 总活力
比活＝-----------------------＝-----------------＝u/mg蛋白
蛋白的浓度(mg蛋白/ml) 总蛋白
四、Cu、Zn－SOD性质：
1、Cu、Z n－SOD呈蓝绿色，分子量在3200左右，由两个中一个Cu和一个Zn。
2、对热稳定，天然牛血SOD，75度下加热数分钟其酶活丧失很小。
3、PH值对SOD的影响，SOD在PH5.3～10.5范围内，其催化速度不受影响，PH3.6时SODZn脱落95％，PH12SOD构象发生不可递的构象，导致酶活性丧失。
4、SOD的紫外线吸收特征：SOD在280mm处没有吸收高峰。
5、金属辅其与酶活性。SOD属金属酶Zn仅于分子结构有关，而Cu与催化活性有关。
6、SOD是其具有还有和失活作用的。
五、药品与仪器：
柠檬三钠，分析纯：江苏花桥北工四厂；
工业丙酮：上海溶剂厂；
邻苯三酚，分析纯：贵州遵义化工厂；
六、SOD的包销单位：
(1)河南郑州国营圣科研究所郑州南阳路14号 邮编：450053《河南科技报》91年10月3日
(2)四川省金堂县工艺制品技校生化科接待室：金堂准口执行的院内，政府办公大楼1楼 邮编：610404 联系人：邓勇 彭丽 《四川农村报》 91年3月1日
(3)广东省深圳市上步区石夏东二苍14号科技所 邮编：518031联系人：黄秋林 《科技消息报》92年7月10日
说明：1、资料后附的产品销售地址信息均为我们从近两年的报刊上摘录的各单位广告，并注明有出处。
2、你先看完资料后，行根据自己的实际情况，先小量试验， 并事先联系好产品的收购单位，待取得经验后再批量生产。
3、读者在联系收购单位时，请一定事先去联系，并附上邮资， 待得到明确答复后再根据情况去人办理，千万不要冒然前往，以免造成不必要的经济负担。
4、原料及仪器各地经营原料店供应，广州市人民南路，上九路等地均有供应。
附：详细SOD收购信息
1、广西南宁市生物化学制药厂
地址：鲁班路1号
2、上海生物化学制药厂
地址：海主路513号
3、江苏徐州市生物化学药厂
地址：海沛路86号
4、山东兖州市生物化学制药厂
地址：肉联厂内
5、湖南常德生物化学制药厂
地址：肉联厂内
6、佛山市生物化学制药厂
地址：佛山市
7、广州市明兴制药厂
地址：广州市河南路工业大道北48号
8、广州市白云制药厂
地址：从广州越绣公园坐21路车到三元里北展下车沿着矿泉别墅侧入200米
9、哈尔滨生化药厂哈肉联厂
地址：哈尔滨道外南极街12号院；电话：88423转制药厂
10、沈阳市生物化学制药厂
地址：哈尔滨皇姑区明廉路2号；
11、江苏省南京生物制药厂
地址：江苏省南京市下关区宝塔桥附近；
12、浙江省金华生物化学制药厂
地址：浙江省金华市河盘桥路51号
13、广东生物制药厂
地址：广州市三元里
14、广东汕头市生物化学制药厂
地址：湖山路西巷3号2号；电话：666124
11、江苏省南京生物制药厂
地址：江苏省南京市下关区宝塔桥附近
12、浙江省金华生物化学制药厂
地址：浙江省金华市河盘桥路51号
13、广东生物制药厂
地址：广州市三元里
14、广东汕头市生物化学制药厂
地址：湖山路西巷3号15.上海霞飞日用化工厂
16.北京丽源日用化工厂
17.南京化妆品厂
18.上海日用化学品二厂
19广州美容化妆品厂
20南京第二药物化学制药厂
上海永芳日用化学品厂
广州化妆品厂
杭州市凤喜化妆品厂
上海日用化学品四厂
天津市津乐制药厂
杭州第一生物化学制药厂
上海药物研究所实验药厂
天津市南开区美容化妆品厂
苏州市昊县生物化学厂
上海生物化学制药厂
天津生物医学技术开发中心
上海香海美容品厂
北京日用化学品四厂
武汉市辛安渡制药总厂
湖北沙市生化制药厂
北京市三露厂
注各大制药厂化妆品厂美容院均为销售对象
电话：010-68150495，68212139
传真：010-68212015
地址：北京市石景山区吴家村华电集团大楼三层
通讯：北京市石景山区40-021信箱
邮编：100040
4. SOD酶活力国家检验标准
国家还没有这个标准，你看一下这几个能不能用的上。你去工标网找一下吧国标有的话一般都有http://www.csres.com/
标准编号:SB/T 10317-1999
标准名称:蛋白酶活力测定法
标准状态:现行
英文标题:Measurement of proteinase activity
替代情况:原标准号ZB X66030-87
实施日期:1999-4-15
出处: http://www.csres.com/detail/112528.html
下载:http://www.csres.com/upload/qy/fm/sb-t10317-19991.pdf
标准编号:NY/T 912-2004
标准名称:饲料添加剂 纤维素酶活力的测定 分光光度法
标准状态:现行
英文标题:Determination of cellulase activity in feed additives -- Spetrothoetric method
实施日期:2005-2-1
出处: http://www.csres.com/detail/167757.html
标准编号:NY/T 911-2004
标准名称:饲料添加剂 β葡聚糖酶活力的测定 分光光度法
标准状态:现行
英文标题:Determination of β-glucanase activity in feed additives -- Spetrothoetric method
实施日期:2005-2-1
出处: http://www.csres.com/detail/167756.html
查询关键字
http://www.csres.com/s.jsp?keyword=%C3%B8%BB%EE%C1%A6
5. 请教检测组织中MDA SOD有关问题
SOD酶的活力的测定方法如下： 1.直接法 原理是根据O2 或产生O2 的物质本身的性质测定O2 的歧化量，从而确定SOD的活性。
经典的直接法包括：脉冲辐射分解法、电子顺磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵，一般较少应用。
6. 过氧化氢酶活性测定公式计算方法
这样应该可以了吧
一、实验目的：
（1）掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤。
（2）了解酶在提取过程中的两个参数：回收率、纯化倍数。
（3）掌握离心机的使用。
二、实验原理:
邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物，中间物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在4min的范围内，中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在时，由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过测定光吸收即可求出SOD的酶活性。
三、实验试剂：
大蒜、冷丙酮、磷酸缓冲液（PH7.8，0.05mol/L)、氯仿-乙醇混合液、邻苯三酚、浓盐酸、天平、石英砂、研钵、冷冻离心机、50mL离心管 8个、紫外-可见分光光度计、250mL三角瓶8个、玻璃棒8根、试剂瓶250mL 3个、500mL 3个、250mL烧杯16个、试管带胶塞80根、移液管各5根
四、实验步骤：
（1）SOD提取：
称取5g大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞，加入15mL的PH7.8 0.05mol/L的磷酸缓冲液，研磨搅拌20分钟，使SOD充分溶解，6000rpm离心，弃去沉淀，得上清液。(留出1mL备用，准确量取剩余上清液体积，记录)
（2）除杂蛋白：
提取液加入1/4体积的氯仿-乙醇混合液搅拌10min，6000rpm离心15min去沉淀，得粗酶液。（取1mL粗酶液备用,精确测量剩余粗酶液体积）
（3）SOD酶的沉淀分离：
剩余的粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000rpm离心15min，得到SOD酶沉淀。将沉淀先加2mL磷酸缓冲液，溶解后再加3mL混匀。6000rpm离心15min，取上清得到SOD酶液。取1mL备用，其余量取体积。
（4）粗酶液活性测定：
提取液、粗酶液、酶液中SOD活力检测，具体步骤如下。
加入邻苯三酚后迅速混匀，准确计时4min，加一滴浓盐酸停止反应，420nm测吸光值。
试剂/（mL）
空白管
对照管OD1
提取液OD2
粗酶液OD2
酶液OD2
PH8.3缓冲液
3
3
3
3
3
SOD提取液
0
0
0.1
0.1
0.1
蒸馏水
2
1.8
1.7
1.7
1.7
室温放置20min
邻苯三酚
0
0.2
0.2
0.2
0.2
（5）溶液中可溶性蛋白含量测定：
分别从1mL备用的提取液、粗酶液、酶液各取0.3mL按以下倍数稀释，260nm/280nm测定吸光值，按公式计算蛋白质浓度。
提取液稀释：50 ×
粗酶液稀释：20 ×
酶液稀释：10 ×
五、实验数据：
提取液
粗酶液
酶液
总体积（ml）
提取液
粗酶液
酶液
260nm吸光度值
280nm吸光度值
公式
蛋白质浓度(mg/ml)=(1.45A280－ 0.74A260) ×稀释倍数
蛋白质浓度（mg/ml）
对照管（OD1）
提取液（OD2）
粗酶液（OD2）
酶液（OD2）
420nm吸光值
六、实验结果及数据处理：
（1）酶活力单位
提取液酶活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
粗酶液活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
酶液活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
（2）总活力
提取液总活力U=活力单位×总体积=
粗酶液总活力=活力单位×总体积=
酶液总活力=活力单位×总体积=
（3）比活力
提取液酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
粗酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
（4）纯化倍数
粗酶液纯化倍数=粗酶液比活力/提取液比活力=
酶液纯化倍数=酶液比活力/提取液比活力=
（5）回收率
粗酶液回收率=粗酶液总活力/提取液总活力=
酶液回收率=酶液总活力/提取液总活力=
七、实验结果误差分析：
（1）研磨和离心大概还不够充分。
（2）由于测量仪器的精密度引起的误差。
（3）在操作的过程中，加入邻苯三酚后未混合均匀，可能致使化学反应进行得不很充分，这可能是造成实验数据与预期不符的一个原因；
（4）在实验过程中，所需化学试剂加入的量不是很准确，这可能是实验数据出现问题的另一个原因；
（5）此外，实验本身还很粗糙，酶的提取、分离和纯化都不能十分彻底，还有很多杂蛋白干扰实验。
7. 氧化应激指标的常用检测方法
氧化应激检测
用氧化应激指标检测试剂盒（由南京建成生物公司提供），按照说明书操作检测。
T-AOC、ROS、SOD、MDA、NO检测
用Fe3+还原法测定血浆总抗氧化能力（T-AOC），采用Fenton 反应及Gress 显色原理测定活性氧(ROS)，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD），硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(MDA)含量，硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）。
实时定量PCR检测
取肝素抗凝新鲜人外周血5 ml，淋巴细胞分离液［密度1 g/cm3(20℃)］分离外周血单个核细胞，加入TRIZOL(Invitrogen公司产品)，抽提总RNA。紫外吸收测定法检测RNA浓度和纯度，A 260
nm/A 280 nm比值在1.8-2.1之间。采用变性琼脂糖凝胶电泳, 紫外透射光下观察并拍照。5 μg总RNA经oligo(dT) 引物逆转录合成cDNA，逆转录反应为37℃ 1小时、95℃ 5分钟，cDNA溶液储存于-20℃备用。由上海康成生物公司合成引物，hOGG1正义引物： 5'-CCCCAGACCAACAAGGAACT-3'； 反义引物： 5'-TGGAACCCTTTCTGCGCTTT-3'，扩增片段145 bp；管家基因正义引物： 5'- CCTGTACGCCAACACAGTGC-3'；反义引物： 5'-ATACTCCTGCTTGCTGATCC-3'，扩增片断211 bp。定量阳性模板扩增曲线以hOGG1模板起始拷贝数的常用对数为横坐标，循环阈值为纵坐标，得到标准曲线，相关系数r=0.99991。荧光定量PCR反应体系25 μl： SybergreenⅠ(Invitrogen公司产品) 终浓度6.25 μl，25 mmol/L MgCl2 溶液3 μl， 20 μmol/L 的PCR特异引物各0.5 μl，Taq聚合酶3 U， dNTP混合液3 μl，cDNA 1 μl。 反应条件(Rotor-Gene3000 Realtime PCR仪): 94℃5分钟，40个循环(94℃ 10秒，58℃ 15秒，72℃ 20秒)。PCR产物与100 bp DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，GoldViewTM染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。hOGG1与β-actin绝对拷贝数之比，作为hOGG1基因的相对表达量
8. sod测定方法有哪些
超氧化物歧化酶（SOD）的催化底物是O2，一般多以一定时间内产物生成量或底物的消耗量作为酶活性单位。由于O2自身很不稳定，且不易制备，测定SOD的方法除少数采用直接法外，一般多为间接法。1.直接法原理是根据O2或产生O2的物质本身的性质测定O2的歧化量，从而确定SOD的活性。经典的直接法包括：脉冲辐射分解法、电子顺磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵，一般较少应用。2.一般化学法这些方法的共同特点是要有一个O2的产生体系和一个被O2还原或氧化的可检测体系。在SOD存在下，一部分O2被SOD歧化，因而O2还原或氧化检测体系的反应受到抑制。根据反应受抑制程度，测定SOD的活性。一般化学法有邻苯三酚自氧化法、细胞色素C还原法、羟胺法、黄嘌呤氧化酶-NBT法、肾上腺素法、没食子酸法、6-羟多巴胺法、亚硝酸盐形成法和碱性二甲亚砜法。常用的有：⑴邻苯三酚自氧化法：即改良Marklund法。原理是基于经典的分光光度法，在碱性条件下，邻苯三酚自氧化成红桔酚，用紫外-可见光谱跟踪波长为325nm、420nm或650nm（经典为420nm），同时产生O2，SOD催化O2发生歧化反应从而抑制邻苯三酚的自氧化，样品对邻苯三酚自氧化速率的抑制率，可反映样品中的SOD含量。本法具有特异性强，所需样本量少（仅50μl），操作快速简单，重复性好，灵敏度高，试剂简单等优点。⑵细胞色素C还原法（McCord法）：原理是黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系中产生的O2使一定量的氧化型细胞色素C还原为还原型细胞色素C，后者在550nm有最大光吸收。在SOD存在时，由于一部分O2被SOD催化而歧化，O2还原细胞色素C的反应速度则相应减少，即其反应受到抑制。将抑制反应的百分数与SOD浓度作图可得到抑制曲线，由此计算样品中SOD活性。本法是间接法中的经典方法，但本法灵敏度较低。3.化学发光法原理是黄嘌呤氧化酶在有氧条件下，催化底物黄嘌呤或次黄嘌呤发生氧化反应生成尿酸，同时产生O2。后者可与化学发光剂鲁米诺反应，使其产生激发。SOD能清除O2从而抑制鲁米诺的化学发光。本法可应用于SOD的微量测定，不仅灵敏度高，简便易行，而且特异性与准确性至少与细胞色素C还原法类似。4.免疫学方法上述方法测定的是SOD活性，免疫学方法则可测定样品中SOD的质量，因此特异性较好，是较理想的测定SOD方法，免疫法有放射免疫法、化学发光免疫分析法、ELISA法等。但其缺陷是只能测定抗体相应的抗原，对于检测不同种类的SOD，则须制备相应的特异性抗体，手续繁琐。5.电泳法电泳染色定位法的基本原理是根据光化学法与NBT还原法。电泳则采取垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳。既可采用SOD活性正染色（呈现棕色区带）也可采取SOD活性负染色（呈现无色透明区带）。根据凝胶上电泳分离的SOD区带的着色深浅与面积大小，对样品进行半定量分析，也可制作校正曲线计算样品中的SOD含量。染色定位法常用于鉴定SOD，很少为了定量，主要原因是它不及化学法简便，但鉴定SOD却较化学法为优。用电泳法可鉴定SOD是否掺有杂质蛋白，有无同工酶，且可半定量地确定SOD的活性大小。6.平行放在距20W荧光灯管3cm处的光照台上，光照8min后，立即在200A分光光度计的460nm波长下比色。用测得的结果计算样品中的SOD含量..
9. SOD酶的活力的测定
SOD酶的活力的测定方法如下：
1.直接法 原理是根据O2 或产生O2 的物质本身的性质测定O2 的歧化量，从而确定SOD的活性。经典的直接法包括：脉冲辐射分解法、电子顺磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵，一般较少应用。
2.一般化学法 这些方法的共同特点是要有一个O2 的产生体系和一个被O2 还原或氧化的可检测体系。在SOD存在下，一部分O2 被SOD歧化，因而O2 还原或氧化检测体系的反应受到抑制。根据反应受抑制程度，测定SOD的活性。一般化学法有邻苯三酚自氧化法、细胞色素C还原法、羟胺法、黄嘌呤氧化酶-NBT法、肾上腺素法、没食子酸法、6-羟多巴胺法、亚硝酸盐形成法和碱性二甲亚砜法。
10. 目前具有国家标准的检测方法的酶有哪些
中华人民共和国国家标准 生物催化剂 酶制剂分类导则 GBT 20370-2006
中国人民共和国国家标准 食品加工用酶制剂企业良好生产规范GBT 23531-2009
中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准 食品工业用酶制剂GB 25594-2010
中华人民共和国农业行业标准 饲料用酶制剂通则 NY/T 722-2003
中华人民共和国轻工行业标准 工业酶制剂通用检验规则 和标志、包装、运输、贮存QB/T 1804一1993
浙江省地方标准 饲料添加剂饲料用复合酶制剂 DB33/T 459—2003
中华人民共和国轻工行业标准 工业酶制剂通用试验方法 QB/T 1803一1993 进出口标准 进出口食品添加剂检验规程 第12部分：酶制剂 SNT 2360.12-2009
中华人民共和国国家标准 饲用植酸酶活性的测定 分光光度法 GB/T 18634-2009
中国人民共和国地方标准 饲料添加剂 葡萄糖氧化酶的测定DB13/T 1444-2011
中国人民共和国国家标准 饲料添加剂木聚糖酶活力的测定分光光度法GBT 23874-2009
中华人民共和国国家标准α-淀粉酶制剂 GBT 24401-2009
中华人民共和国国家标准 食品添加剂 α-淀粉酶制剂 GB 8275-2009
中华人民共和国轻工行业标准 食品添加剂 真菌α-淀粉酶 QB2526一2001
中华人民共和国轻工行业标准 耐高温α一淀粉酶制剂 QB/T 2306一1997
中华人民共和国国家标准 粮油检验 谷物及其制品中α-淀粉酶活性的测定 比色法 GBT 5521-2008
中华人民共和国国家标准 谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定 比色法GB/T 5521-89
中华人民共和国国家标准 小麦粉破损淀粉测定法 α-淀粉酶法 GB/T 9826-88
中华人民共和国国家标准 蜂蜜中淀粉酶值的测定方法 分光光度法 GB/T 18932.16-2003
中华人民共和国国家标准 食品添加剂 糖化酶制剂 GB 8276-2006
中华人民共和国行业标准 食品添加剂 果胶酶制剂 QB 1502-92
中国人民共和国国家标准饲用纤维素酶活性的测定 滤纸法GBT 23881-2009
中华人民共和国农业行业标准 饲料添加剂 纤维素酶活力的测定 分光光度法 NY/T 912-2004
中华人民共和国轻工行业标准 纤维素酶制剂 QB 2583-2003
中国人民共和国国家标准脂肪酶制剂GBT 23535-2009
中华人民共和国国家标准 粮油检验 粮食、油料的脂肪酶活动度的测定 GBT 5523-2008
中国人民共和国国家标准 饲料添加剂酸性、中性蛋白酶活力的测定 分光光度法 GB/T 28715-2012
中国人民共和国国家标准蛋白酶制剂GBT 23527-2009
中华人民共和国轻工行业标准 洗涤剂用碱性蛋白酶制剂 QB 1806一1993
中华人民共和国轻工行业标准 工业用蛋白酶制剂 QB 1805.3-93
中华人民共和国国家标准 动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定 过滤法 GBT 17811-2008
中华人民共和国国家标准 大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定 GBT 21498－2008
中华人民共和国农业行业标准转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定 NY/T 1103.2-2006
中华人民共和国专业标准 蛋白酶活力测定法 SB/T 10317-1999 进出口标准 进出口粮食、饲料粗蛋白质检验方法 SN/T0800.3-1999
中华人民共和国农业行业标准 饲料添加剂 β-葡聚糖酶活力的测定 分光光度法 NY/T 911-2004
中华人民共和国 企业标准 β-葡聚糖酶制剂（2013-12-1实施）QB/T 4481-2013
中华人民共和国国家标准 粮油检验 粮食、油料的过氧化氢酶活动度的测定 GBT 5522-2008
中华人民共和国轻工行业标准 工业用糖化酶制剂 QB 1805.2一93
中华人民共和国国家标准固定化葡萄糖异构酶制剂 GBT 23533-2009
中华人民共和国国家标准 食品添加剂 固定化葡萄糖异构酶制剂 GB274-87
中华人民共和国国家标准 乳酸菌饮料中脲酶的定性测定 GBT5009.186-2003
中华人民共和国国家标准 婴幼儿配方食品和乳粉脲酶的定性检验 GBT 5413.31-1997
中华人民共和国国家标准 植物蛋白饮料中脲酶的定性测定 GBT5009.183-2003
中华人民共和国国家标准 大豆制品中尿素酶活性测定方法 GB-T8622-1988 进出口标准 进出口粮食、饲料尿素酶活性测定方法 SN/T0800.4-1999
中华人民共和国国家标准 食品添加剂 a-乙酰乳酸脱羧酶制剂 GB 20713-2006
中华人民共和国轻工行业标准 食品添加剂 α-葡萄糖转苷酶 QB2525一2001
中华人民共和国国家标准 保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性测定 GB 05009-171
中华人民共和国国家标准 保健食品中辅酶Q10的测定 GB/T 22252-2008
中华人民共和国卫生行业标准 全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法 羟胺三氯化铁法WST 66-1996
中华人民共和国卫生行业标准 全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法 硫代乙酰胆碱-联硫代双硝基苯甲酸法 WST 67-1996
地方标准乳及乳制品中β-内酰胺酶的测定 db13 t 1080-2009