土壤中脱氢酶的检测方法

Ⅰ tph什么意思

TPH是总石油烃的英文缩写。

总石油烃的英文名是Total petroleum hydrocarbon。总石油烃最初是指在原油中发现的含有碳氢化合物的混合物。因为在原油和其他石油产品里包含有很多不同的碳氢化合物，将每种物质分开测量是不实际的，所以用TPH来衡量这类物质的总量。TPH包括己烷、苯、甲苯、二甲苯、萘等。

石油烃是环境中广泛存在的有机污染物之一, 包括汽油、煤油、柴油、润滑油、石蜡和沥青等, 是多种烃类( 正烷烃、支链烷烃、环烷烃、芳烃) 和少量其它有机物, 如硫化物、氮化物、环烷酸类等的混合物。随着经济的发展, 人类对能源的需求不断扩大, 石油已成为人类最主要的能源之一。

微生物降解

微生物降解石油烃的机制一方面可能是微生物分泌表面活性剂[3]，例如鼠李糖脂等，对石油烃进行增溶和分散，增加石油烃的比表面积，从而利用微生物与石油烃的接触，加速石油烃的降解(陈延君，2007；陆昕等，2010)。

另一方面，在石油烃的微生物降解过程中，微生物分泌的酶可能对石油烃的降解起重要的催化作用，例如石油烃降解过程中，脱氯酶能够促进石油烃活化氢原子而实现石油烃的氧化。

脱氢酶活性与石油污染物中石油烃衰减量有良好的相关性，并且可以作为微生物对底物适应性的指标(Matin等，2005)。

以上内容参考网络-总石油烃

Ⅱ 土壤脱氢酶活性测定（TTC法）中，样品暗室培养时加入葡萄糖的作用是什么，为什么很多文献中并没有加入

酶的活性受氧气浓度影响，葡萄糖给土壤中的细菌提供营养促进细菌呼吸。

Ⅲ 请教一下土壤酶的活性测定方法

土壤酶活性的测定：酸性磷酸酶采用磷酸苯二钠比色法测定；过氧化氢酶活性采用KMnO4滴定；脲酶采用扩散滴定法测定；蛋白酶活性采用茚三酮比色法测定；转化酶活性以0.1N的Na2S2O3滴定法测定；脱氢酶活性采用三苯基甲比色法[4-5]

参考资料：广州市城市森林土壤重金属污染状况及其评价

Ⅳ 研究土壤酶活性，一般都测哪些酶

a 氧化还原酶类：酶促氧化还原反应。主要包括脱氢酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、硝酸还原酶、亚硝酸还原酶等。
b 水解酶类：酶促各种化合物中分子键的水解和裂解反应。主要包括蔗糖酶、淀粉酶、脲酶、蛋白酶、磷酸酶等。
c 转移酶类：酶促化学基团的分子间或分子内的转移同时产生化学键的能量传递的反应。主要包括转氨酶、果聚糖蔗糖酶、
转糖苷酶等。
d 裂合酶类：酶促有机化合物的各种化学基在双键处的非水解裂解或加成反应。包括天门冬氨酸脱羧酶、谷氨酸脱羧酶、
色氨酸脱羧酶。
e 合成酶类：酶促伴随有ATP或其它类似三磷酸盐中的焦磷酸键断裂的两分子的化合反应。
f 异构酶类：酶促有机化合物转化成它的异构体的反应

Ⅳ 如何测脱氢酶

土壤脱氢酶活性测定

原理
氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲臜（TPF），TPF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸，延胡索酸，苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。

测定步骤
1 称取4克鲜土于50ml三角瓶中，加入4mL（TTC-葡萄糖-Tris缓冲溶液（pH7.6，即2ml 1%TTC-Tris缓冲溶液，2ml 1%葡萄糖)，置37℃暗室培养24hr。
2 取出后用少量甲醇提取后过滤，再用50ml容量瓶或比色管定容。
3 滤液马上用485nm波长下分光光度计测定。

附：pH7.6 Tris缓冲液的配制：
A：0.2M 三-（羟甲基）-氨基甲烷溶液（1000 ml含24.23克）
B：0.2M HCl
100 ml A+76.8ml B,加水稀释至400 ml，准确调节pH为7.6。

TPF标准曲线的制备：准确称取10mg TPF溶于250 ml甲醇中，得到40 mg/L的母液。从中吸取0，1，2，3，4，5 ml于50ml容量瓶中，用甲醇定容，得到0，40，80，120，160，200ug TPF的标准曲线。

参考文献
Casida LC Jr, Klein DA, Santoro T(1964) Soil dehydrogenase activity. Soil Science 98, 371-376.
H.Y.Chu, J.G.Zhu, Z.B.Xie, H.Y.Zhang, Z.H.Cao and Z.G.Li(2003) Effects of lanthanum on dehydrogenase activity and carbon dioxide evolution in a Haplic Acrisol. Australian Journal of Soil Research 41, 731-739.
H.Y.Chu,

Ⅵ 有什么技术可以在短期内了解土壤微生物群落变化

有什么技术可以在短期内了解土壤微生物群落变化
用生物化学技术能快速地检测土壤酶活性，使土壤酶学研究在60年代后期至80年代比较热门，其中尿酶、磷酸酶、脱氢酶在土壤中的含量和变化规律研究较多。但土壤酶测定方法用于土壤微生物研究的一个致命弱点是不能直接的反映土壤实际微生物状况。Visser等对酶检测用于土壤微生物群落和土壤质量评价提出了怀疑。Skujins(1978)认为脱氢酶本身的生物化学特征决定了它不可能以胞外酶状态存在于土壤中。为了解决土壤酶测定中的评判问题，Beck（1984）提出了土壤微生物如微生物量（microbialbiomass）、还原酶（rectase）、水解酶（hydrolase）的适宜指标，然而，这些指标从来没有被广泛采用。Beck（1984）和Trasar-Cepedaetal.（1998）认为把酶用于土壤质量评价指标是值得怀疑的，而且缺乏常规可行的酶测定手段，存在药品昂贵等问题[7，8]。
Community-levelphysiologicalprofiling(CLPP)是由GarlandandMills（1991）提出的另一种酶分析方法，微生物群落降解95种不同单一碳源的能力可一次分析，其中BIOLOGGN微平板较多应用于研究土壤和环境微生物区系。作者采用BIOLOGGN微平板培养分析施用生态有机肥对土壤微生物多样性和番茄青枯病的影响，结果表明，连作地施用生态有机肥后，番茄青枯病显着降低，土壤微生物多样性显着提高。由于真菌、放线菌的代谢反应不能分解四氮叠茂，此方法只能检测微生物群落细菌（主要是革兰氏阴性菌）中快速生长的那部分微生物信息。不同的微生物对同一碳源的利用能力是有差异的，微生物对不同单一碳源的代谢指纹差异并不能简单地归纳为微生物群落数量和结构的差异，而且土壤微生物在BIOLOG系统中生长时，由于温育环境的改变引起微生物对碳底物实际利用能力的改变，同时在温育过程中存在适应性问题如代谢补偿、代谢适应等。但CLPP方法因快速、简便而受到人们的欢迎，因而有专用于土壤和环境微生物生态研究的生态微平板（EcoPlates）（Insam，1997）。土壤酶测定方法至今没有一个标准的参数和测定标准，不能对土壤微生物生态功能一个准确的答案，若要充分分析土壤特征，了解不同土壤之间的差异，一定要与其他的方法相配合。 土壤微生物是土壤生态系统中库（pool）和流的一个巨大的原动力。土壤酶测定一般要在适宜的条件下测定，不能作为土壤物流的原位评价。库和流的计算对土壤微生物学家来说很重要，测定土壤微生物呼吸（CO2的释放量），是较好的微生物群落总代谢活性指标。
N、NO3输入引起土壤酸化，甚至引起地下水的N污染。氮的分配（N2O、NO等）对气候变化和臭氧层破坏有极大影响，生物固氮对缓解矛盾有重要的意义，同时也提高农作物产量和减少人类饥饿。从1970年以来，共生和非共生固氮研究很热烈。土壤微生物学家应用分子生物学技术在转基因作物和转基因工程菌方面研究，大大提高了生物固氮效果。许多传统方法，如N矿化测定，硝化潜力或用于反硝化测定的乙炔抑制方法仍然广泛使用。应用15N放射性标记方法可详细地了解土壤中或土壤微生物群落中的N分配和去向。
土壤具有复杂的空间异质性，大多数养分流测定方法不适于田间测定，局限于实验室模拟，目前有较好的地理信息系统软件来统计和分析这些数据。Bruckner等（1999）测定土壤理化和生物指标，研究了温带松果类森林土壤的的空间差异，发现土壤中某些养分转化过程需要在一定的生态点进行，如仅在一定团粒粒级范围内进行。Rasiah等（1999）研究发现不同农业措施会引起土壤紧实度、质地和有机质特性变化。Stenberg等（1998）研究26种不同性质土壤的微生物状况，也证明土壤有巨大的异质性。

Ⅶ 土壤磷酸酶活性的测定方法

土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定：酸性磷酸酶采用磷酸苯二钠比色法测定；过氧化氢酶活性采用KMnO4滴定；脲酶采用扩散滴定法测定；蛋白酶活性采用茚三酮比色法测定；转化酶活性以0.1N的Na2S2O3滴定法测定；脱氢酶活性采用三苯基甲比色法[4-5]

Ⅷ 土壤的生物学指标是什么

土壤粒径大小：→容重、总空隙度、持水性（量）、通气性

土壤容重：→土壤通气量、持水性（有7种与土壤容重存在明显负相关，有5种与土壤水的累积入渗速率呈正相关）

土壤密度：

土壤水热程度：

土壤孔隙度：

总孔隙度：
大孔隙度：通气孔隙0.1mm+
小孔隙度：持水孔隙0.001~0.1mm

土壤酶活性指标：（受到土壤有机无机复合体保护，所以稳定）

酶数量（enzymaenumber，EAN）指标：
EAN = 0.2 (DH + CA/10 + AP/40 + PR/2 + AM/20)
式中：DH 为脱氢酶活性 (TPF g/(10 kg•27 h))，CA 为过氧化氢酶活性 (O2 %/3 min)，AP 为碱性磷酸酶活性 (PNP mg/(10 kg•5 h))，PR 为蛋白酶活性（氨基氮g/(10kg•16 h))，AM 为淀粉酶活性 (淀粉分解 %/(l0g•16 h ))

土壤脲酶（有机质、碱解氮、有效钾密切相关，许景伟，王卫东，李成． 不同类型黑松混交林土壤微生物酶及其与土壤养分关系的研究[J ]． 北京林业大学学报，2000 ，22(1) :51，但在菜园土壤上，于忠祥等发现脲酶活性仅与水解氮显着相关，与有机质呈显着负相关，于忠祥，汪维云． 合肥郊区菜园土壤酶活性研究[J ]． 土壤通报，1996 ，27(4) :179 – 181）
多酚氧化酶（与全氮含量呈极显着负相关，与有机质和有效磷呈显着负相关，表明多酚氧化酶活性愈大，土壤养分含量愈低，孙翠玲，郭玉文，佟超然等． 杨树混交林地土壤微生物与酶活性的变异研究[J ]． 林业科学，1997 ，33(6) :488 - 496）
过氧化氢酶（与有机质、全氮、全钾呈极显着正相关，是影响土壤肥力的一个关键酶，孙翠玲，郭玉文，佟超然等． 杨树混交林地土壤微生物与酶活性的变异研究[J ]． 林业科学，1997 ，33(6) :488 - 496）
转化酶（反映土壤呼吸强度，酶促作用产物—葡萄糖是植物、微生物的营养源。土壤的肥力水平和生物学活性强度在转化酶上反映得最明显，与土壤有机质、全氮、全钾、碱解氮、速效磷、有效钾均呈显着相关，孙翠玲，郭玉文，佟超然等． 杨树混交林地土壤微生物与酶活性的变异研究[J ]． 林业科学，1997 ，33(6) :488 - 496）
酸性磷酸酶（与土壤中全氮、碱解氮、全钾、有效钾及速效磷的含量呈正相关，与全磷呈负相，孙翠玲，郭玉文，佟超然等． 杨树混交林地土壤微生物与酶活性的变异研究[J ]． 林业科学，1997 ，33(6) :488 - 496）
脱氢酶
三苯甲基四氮唑氯化物法（有改进TTC法）顿咪娜，胡文容。脱氢酶活性检测方法及应用

土壤微生物指标：

(4)土壤中细菌 真菌和 PAHs 降解菌的计数、［12］采用平板稀释法 细菌采用牛肉膏蛋白胨培养基，真菌采用马丁氏培养基PAHs降解菌数量的［13］测定，采用MPN方法
微生物组成和多样性（在很大程度上决定了生物地球化学循环、土壤有机质的周转及土壤肥力和质量）
微生物生物量（被认为是表征土壤质量变化最敏感最有潜力的指标，是表征土壤肥力特征和土壤生态系统中物质和能量流动的一个重要参数，所有的微生物种群数量一般随着土壤深度的增加而降低，其中真菌数量的降低幅度较细菌高）
微生物活性（细菌数量很大程度上与土壤有机质含量成正相关）
土壤微生物多样性（物种多样性、遗传（基因）多样性、生态多样性以及功能多样性）王菲，杨官品等．微生物标志物在土壤污染生态学研究中的应用．生态学杂志，2008， 27 (1) : 105- 110
微生物商（Cmic/Corg）Balota EL， Colozzi-Filho A， Andrade DS， Dick RP． Microbial biomass in soils under different tillage and crop rotation systems．Biology and Fertility of Soils， 2003， 38: 15-20
微生物呼吸强度和微生物的代谢商(qCO2) 为某一时刻 CO2 释放速率与 MBC 的比，反映了单位生物量的微生物在单位时间里的呼吸作用强度，它可以同时表示微生物量的大小和活孙波， 赵其国， 张桃林等． 土壤质量与持续环境． Ⅲ:土壤质量评价的生物学指标． 土壤， 1997， 29 (5): 225-234，龙健， 黄昌勇， 滕应等． 矿区重金属污染对土壤环境质量微生物学指标的影响．农业环境科学学报， 2003， 22 (1):60-63

土壤动物指标：

对土壤过程有显着影响的主要以无脊椎动物为主，它们依靠传播接种微生物等方式来加速营养物质的分解和还原，促进土壤大孔隙的形成，并促进团粒结构的形成和稳定

蚯蚓粪便能增强土壤酶活性

土壤水分：空气烘箱法

土壤酸碱度（对微生物数量影响显着，真菌数量在酸性土壤中多，细菌和放线菌数量在中性或碱性土壤中较多）

Ⅸ 在测定土壤中脱氢酶时（TTC法）,在制作标准曲线时应注意什么问题

注意事项：ttc见光分解，应避光。最好现配现用，如果需要储藏则应贮藏与棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。

Ⅹ 土壤酶活的测定中土壤要怎样进行预处理

用生物化学技术能快速地检测土壤酶活性，使土壤酶学研究在60年代后期至80年代比较热门，其中尿酶、磷酸酶、脱氢酶在土壤中的含量和变化规律研究较多。但土壤酶测定方法用于土壤微生物研究的一个致命弱点是不能直接的反映土壤实际微生物状况。Visser等对酶检测用于土壤微生物群落和土壤质量评价提出了怀疑。Skujins(1978)认为脱氢酶本身的生物化学特征决定了它不可能以胞外酶状态存在于土壤中。为了解决土壤酶测定中的评判问题，Beck（1984）提出了土壤微生物如微生物量（microbialbiomass）、还原酶（rectase）、水解酶（hydrolase）的适宜指标，然而，这些指标从来没有被广泛采用。Beck（1984）和Trasar-Cepedaetal.（1998）认为把酶用于土壤质量评价指标是值得怀疑的，而且缺乏常规可行的酶测定手段，存在药品昂贵等问题