口咽式核酸检测方法

‘壹’ 核酸检验方法

核酸检测具体流程如下：
1. 核酸提取
使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。
2. 逆转录合成cDNA
逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。建议使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。
3. PCR扩增反应（使用二次扩增的套式PCR扩增方法）
PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板（DNA或cDNA）。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。
4. 扩增产物定性分析
扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。自动化核酸扩增仪使用酶联比色分析或荧光探针杂交等原理测定。
5.结果判定和完成报告单
（1）实验成立的条件：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。
（2）HIV核酸检测阳性：发现核酸阳性反应，应该重复采集样品进行复测，复测结果呈核酸阳性反应则判定为核酸阳性，复测结果为核酸阴性反应则判为不确定结果，需进一步随访检测。
（3）HIV核酸检测阴性：只可报告本次实验结果阴性。
（4）应在完成检测后5个工作日内发出检测报告。

‘贰’ 做核酸检测的正确方法

5月11日，武汉市新冠肺炎疫情防控指挥部涉疫大数据与流行病学调查组印发紧急通知，决定以10天为期，在武汉市范围内开展全员新冠病毒核酸筛查。而在全国各地也有一些朋友好奇，核酸检测到底检测哪个部位？鼻咽拭子和口咽拭子有何不同？做核酸检测时有哪些注意事项？
首都医科大学附属北京地坛医院感染中核酸检测标本可以采集深部痰液、鼻咽拭子和口咽拭子。其中口咽拭子和鼻咽拭子统称为咽拭子，经口的为口咽拭子，经鼻的就是鼻咽拭子。

口咽拭子

鼻咽拭子
做核酸检测时，我们需要注意什么呢？
在做核酸检测前2小时尽量避免进食，以免引起呕吐；
采样前30分钟不应吸烟、喝酒、咀嚼口香糖等；
检测者需要正确佩戴口罩，检测前取下口罩，检测后立即戴好，可准备一个备用口罩，污染后方便及时更换；
在采集鼻咽拭子前检测者应告知采集人员是否鼻中隔弯曲及鼻腔手术史，过程中可能出现鼻部酸痒感，刺激打喷嚏，可立即用纸巾或手肘遮挡；
鼻咽拭子采集后可能出现少量鼻腔出血，一般不需要特殊处理，如出血量较多请及时到医院进行处理；
在采集口咽拭子时检测者头后仰，张口发出“啊”音，有助于暴露咽喉，但过程中会出现刺激性干咳、恶心、呕吐等症状，检测者可配合采集人员尽量放松、深呼吸；
核酸检测前后都需要注意手部卫生，可使用免洗手消毒液或免洗酒精擦拭双手。

血清抗体检测不受饮食影响 无需空腹
一般感染新冠病毒7-10天后，人体会产生针对病毒的特异性抗体。最先出现的是IgM抗体，随后会出现IgG抗体，所以检测这些特异性抗体，可以判断人体是否感染过病毒，而检测方法就是血清抗体检测。
血清抗体需要抽取检测者2-4mL的静脉血液进行检测，检测结果不受饮食和药物影响，因此检测前不需要空腹。
为落实好新冠肺炎疫情常态化防控，全国各地陆续公布“核酸检测机构名单”，推动重点人群“应检尽检”、其他人群“愿检尽检”。目前国家卫生健康委推出“核酸检测机构查询”服务，在国务院客户端上线，目前已有北京、天津、河北、辽宁、黑龙江、上海、江苏、安徽、福建、山东、河南、湖北、湖南、广东、广西、海南、四川、贵州、云南、宁夏、新疆生产建设兵团上传的1226家检测机构。

‘叁’ 核酸检测怎么做

核酸检测目前都是取咽拭子的方法（病毒感染口腔粘膜上皮后会寄宿于口腔粘膜上皮，通过采咽拭子达到取样目的），1 小时内送到专门检测室内进行。这个性质决定不可能每个患者想做就能立马做，比如大半夜来的患者就做不了，只能等待第二天仪器开机。

取咽拭子是一个高危的操作。据目前临床研究来看，新型冠状病毒感染肺炎的传播途径有三种，直接传播、气溶胶传播、接触传播。其中飞沫混合在空气中，形成气溶胶，吸入后导致感染。所以对于取样的人员而言，有被感染的风险。

核酸检测注意事项

1.请出示健康通行码。

2.测量体温。

3.如您有以下情况之一，请到发热门诊就诊：

(1)14天内有发热或呼吸道症状;

(2)14天内与新冠患者或无症状感染者有接触;

(3)14天内有病例报告社区的旅居史或居住史;

(4)聚集性发热。

4.请正确佩戴口罩，检测前取下口罩，检测后立即戴好。

5.请有序排队等候，保持1米距离。

6.做核酸检测前2小时尽量避免进食，以免引起呕吐。

7.采样前30分钟不应吸烟、喝酒、咀嚼口香糖等。

8.在采集口咽拭子时请头后仰，张口发出“啊”音，有助于暴露咽喉。

9.采集过程中会出现干咳、恶心、呕吐等症状，请配合采集人员，尽量放松、深呼吸。

‘肆’ 专家表示鼻咽拭子检出率更高，核酸检测拭子采集一般选用什么方法

核酸拭子检测是发现病毒存在的直接证据，新型冠状病毒肺炎病毒核酸检测呈阳性，表明受试者体内存在病毒，可能具有传染性。如果患者有发热、呼吸道症状或其他 NCP 临床特征，结合核酸检测阳性可诊断为 NCP，如果没有临床症状，核酸检测结果为阳性，可以判断为无症状感染者。

采样后立即离开现场，不要向采集点及周边地区吐痰、扔垃圾，检查员应注意试验前后的手卫生。可以用免洗手消毒液、免洗手酒精、消毒棉等擦手。鼻咽拭子采样和口咽拭子采样会使被采样者感到轻微不适，休息片刻即可缓解。因此，在取样过程中，被取样人应尽量配合取样人员，尽量放松，不要过度移动头部，以免取样拭子刮伤黏膜。

‘伍’ 鼻拭子、咽拭子、鼻咽拭子、口咽拭子区别

首先，需要说明的是，这两种方法的全称分别为口咽拭子和鼻咽拭子。如果规范操作，使用口咽拭子或鼻咽拭子采集标本的方法，在本质上并没有区别，都是为了采集到咽部标本，进行新冠肺炎病毒核酸检测，以判定被采样者是否感染了新冠肺炎病毒。

所不同的是，为了采集到咽部标本，一种是将采样工具通过口腔进入的方法采集口咽部标本，一种是将采样工具通过鼻腔进入的方法采集鼻咽部标本。因此，分别被称为口咽拭子、鼻咽拭子。

在采集口咽拭子的样本时，采样者是可以看见所要采样的咽部位置，但对口咽粘膜的刺激性较大，可能导致被采样者咳嗽、恶心，甚至呕吐等反应。而采集鼻咽拭子的样本时，对鼻咽粘膜的刺激性则相对较小，但采样者看不见采样的咽部位置，主要依靠手部感觉到的阻力来完成采样。

与鼻咽拭子相比，口咽拭子采样有时会因为刺激性反应，较难达到规范性采样要求。加上，由于我们的饮食、饮水和吞咽动作，会在一定程度上降低口咽部的病毒富集度，导致口咽拭子的阳性检出率低于鼻咽试子。实际观察和比较中，也发现鼻咽拭子的阳性检出率高于口咽拭子。

当然，影响样本阳性检出率，还有其他因素，如采样时机，通常病人发病后1周内采集的标本阳性检出率高，而超过10天以后，由于咽部含有病毒的细胞浓度降低，检出率也会随之降低，一般没有必要两种采样同时进行。

‘陆’ 核酸检测方法

核酸检测采用咽拭子检测，有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。

口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦，刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情，张口发出“啊——”的声音就可以了，检测过程并没有创伤风险，是非常安全的检测。

检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉，不过这些不适症状通常只需要半分钟到两分钟左右就可以完全缓解了。鼻咽拭子采样是将一根细棉签深入鼻孔，从下鼻道深入抵达鼻咽后壁，然后捻转棉签取样。棉签进入鼻腔的深度约为鼻尖到耳垂的距离。

(6)口咽式核酸检测方法扩展阅读：

核酸检测相关知识：

核酸检测是检测病毒的方法，它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测，可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染，以及推测是否具有传染性。

季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份，从而判断被检测者是否属于感染者。

新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了，只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分，可以尽早发现感染者，甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。

感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除，不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。

‘柒’ 核酸检测的方法

核酸检测主要是鼻拭子或咽拭子法，经由鼻孔或口腔插入取得上呼吸道分泌物标本后送实验室检测。核酸检测主要是指目前对于新型冠状病毒肺炎的一种确诊的实验手段，核酸检测一般分为鼻拭子、咽拭子或者肺泡灌洗液以及痰液，通过呼吸道的标本，我们在实验室里可以检测2019新型冠状病毒的核酸，从而作为临床诊断的一个重要的依据。那临床上目前最常采用的检测方法是鼻拭子或者是咽拭子，操作的时候由医护人员采用特制的长柄取样的棉签，经由鼻孔或者经由口腔插入到鼻腔及咽腔中，在咽喉壁或者鼻腔的粘膜上进行涂抹，取得上呼吸道分泌物标本，这个标本取出之后再送到实验室进行相关的核酸检测。在做的过程中患者不用紧张，可能会有一些轻微的不适例如恶心，相信配合好医护人员的话，能够很快完成这个检查，不会给您带来很大的影响。

‘捌’ 咽拭子是怎么一个采样法

咽试子是一种常见的呼吸道传染病的检测方法，尤其是在我国遭遇新冠肺炎疫情之后，咽拭子采集法是目前常用的针对病毒核酸的检测方法。如果咽拭子阳性，就代表着核酸检测阳性，很有可能确诊。

正常人的咽峡部培养应有口腔正常的菌群，而无法致其他病菌生长。咽部的细菌主要来自于外界，正常情况下不会致病，但在机体全身或局部抵抗力比较弱的时候，或者在其他外部因素的影响下，可能会出现感染。因此，咽拭子细菌培养能分离出致病菌，有助于对一些疾病的诊断，如白喉、新冠肺炎、急性咽喉炎。

现在全国各地的普通医院都可进行新冠病毒的咽拭子检测，价格不同，政策也不同，如果大家有需要，可以及时去当地的医院问询。亲爱的读者朋友们，你们明白了吗？

‘玖’ 核酸检测方法有哪些

核酸检测采用咽拭子检测，有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。

口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦，刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情，张口发出“啊——”的声音就可以了，检测过程并没有创伤风险，是非常安全的检测。

检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉，不过这些不适症状通常只需要半分钟到两分钟左右就可以完全缓解了。鼻咽拭子采样是将一根细棉签深入鼻孔，从下鼻道深入抵达鼻咽后壁，然后捻转棉签取样。棉签进入鼻腔的深度约为鼻尖到耳垂的距离。

(9)口咽式核酸检测方法扩展阅读：

核酸检测相关知识：

核酸检测是检测病毒的方法，它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测，可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染，以及推测是否具有传染性。

季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份，从而判断被检测者是否属于感染者。

新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了，只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分，可以尽早发现感染者，甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。

感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除，不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。

‘拾’ 现在核酸检测都有什么方法

通过呼吸道或口腔内的痰液做检测