这些是在索莱宝官网上借鉴的:(仅供参考)
纤维素酶活的活性检测方法
1. 纤维素CMC酶
1.0标题
用3.5一二硝基水杨酸法测定纤维素CMC酶活性单位。 2.0范围
生产分析和质量控制部门适用。 3.0原理
纤维素CMC酶(EC3.2.1.4)水解羧基纤维素分子中β-1.4葡萄糖苷键,释放出的还原糖(以葡萄糖计)与3.5二硝基水杨酸(DNS)反应,产生颜色变化,这种颜色变化与释放还原糖(以葡萄糖计)的量成正比关系,即与酶样品中的酶活性成正比。通过在550nm的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物)可以确定还原糖产生的量,从而确定出酶的活力单位。 4.0试剂
4.1无水醋酸钠(分析纯) 4.2冰醋酸(分析纯) 4.3 3.5-二硝基水杨酸 4.4无水葡萄糖
4.5四水酒石酸钾钠(分析纯) 4.6氢氧化钠(分析纯) 4.7重蒸苯酚(分析纯) 4.8无水亚硫酸钠(分析纯) 4.9叠氮化钠(分析纯) 4.10羧甲基纤维素钠 5.0仪器
5.1水浴锅(恒温)50±1℃ 5.2电热干燥箱80±1℃ 5.3 722型分光光度机计 5.4分析天平感量0.1㎎ 5.5一级玻璃制品 5.6电冰箱 6.0试剂的准备
6.1乙酸-乙酸钠缓冲溶液(PH=4.8)
溶液A:量取冰醋酸6ml,定容至1000ml,制成0.1M醋酸钠溶液。 溶液B:称取8.2g醋酸钠,溶解后容至1000ml,制成0.1M醋酸钠溶液。 以A:B=4:6的比例混合,低温冷藏备用。 6.2 DNS试剂:
溶液A:称分析纯NaOH 104g溶于1300ml水中,加入30g分析纯3.5一二硝基水杨酸。 溶液B:称分析纯酒石酸钾钠910g,溶于2500ml热水中,再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。
将A、B溶液混合,定容至5000ml,贮存于棕色瓶中,暗处放置一星期后可使用。 6.3 CMC溶液:用羧甲基纤维素钠(CMC)以PH4.8醋酸缓冲液配成1%的溶液。 7.0标准曲线制作:
7.1无水葡萄糖80℃烘干至恒重。
7.2准确称取1.000g溶于1000ml水中,加10mg叠氮化钠防腐,4℃冷藏备用。 7.3标准葡萄糖曲线制作
纤维素酶的作用原理
1、纤维素酶在提高纤维素、半纤维素分解的同时,可促进植物细胞壁的溶解使更多的植物细胞内溶物溶解出来并能将不易消化的大分子多糖、蛋白质和脂类降解成小分子物质有利于动物胃肠道的消化吸收熊谱成1996.
2、纤维素酶制剂可激活内源酶的分泌,补充内源酶的不足,并对内源酶进行调整,保证动物正常的消化吸收功能,起到防病,促生长的作用(张国立,1996).
3、消除抗营养因子,促进生物健康生长.半纤维素和果胶部分溶于水后会产生粘性溶液,增加消化物的粘度,对内源酶造成障碍,而添加纤维素酶可降低粘度,增加内源酶的扩散,提高酶与养分接触面积,促进饲料的良好消化.
4、纤维素酶制剂本身是一种由蛋白酶、淀粉酶、果胶酶和纤维素酶等组成的多酶复合物,在这种多酶复合体系中一种酶的产物可以成为另一种酶的底物,从而使消化道内的消化作用得以顺利进行.也就是说纤维素酶除直接降解纤维素,促进其分解为易被动物所消化吸收的低分子化合物外,还和其他酶共同作用提高奶牛对饲料营养物质的分解和消化.
5、纤维素酶还具有维持小肠绒毛形态完整,促进营养物质吸收的功能.
Ⅱ 纤维素酶含有几种成份,怎么测
纤维素酶是一种重要的酶产品,是一种复合酶,主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成,还有很高活力的木聚糖酶活力。由于纤维素酶在饲料、酒精、纺织和食品等领域具有巨大的市场潜力,已被国内外业内人士看好,将是继糖化酶、淀粉酶和蛋白酶之后的第四大工业酶种,甚至在中国完全有可能成为第一大酶种,因此纤维素酶是酶制剂工业中的一个新的增长点。
纤维素酶的应用
一、制酒
1、在进行酒精发酵时添加纤维素酶可显着提高酒精和白酒的出酒率和原料的利用率,降低溶液的黏度,缩短发酵时间,而且酒的口感醇香,杂醇油含量低。纤维素酶提高出酒率的原因可能有两方面:一是原料中部分纤维素分解成葡萄糖供酵母使用;另外,由于纤维素酶对植物细胞壁的分解,有利于淀粉的释放和被利用。
2、将纤维素酶应用于啤酒工业的麦芽生产中可增加麦粒溶解性,加快发芽,减少糖化液中单一葡萄糖含量,改进过滤性能,有利于酒精蒸馏。
二、酱油酿造
在酱油的酿造过程中添加纤维素酶、可使大豆类原料的细胞膜膨胀软化破坏,使包藏在细胞中的蛋白质和碳水化合物释放,这样既可提高酱油浓度,改善酱油质量,又可缩短生产周期,提高生产率,并且使其各项主要指标提高3%。
三、饮料加工
用纤维素酶处理豆腐渣后接入乳酸菌进行发酵,可制得营养、品味俱佳的发酵饮料。将纤维素酶应用于果蔬榨汁、花粉饮料中,可提高汁液的提取率(约10%)和促进汁液澄清,使汁液透明,不沉淀,提高可溶性固形物的含量,并可将果皮综合利用。目前,有报道已成功地将柑橘皮渣酶解制取全果饮料,其中的粗纤维有50%降解为短链低聚糖,即全果饮料中的膳食纤维,具有一定的保健医疗价值。
四、纤维废渣的回收利用
1、应用纤维素酶或微生物把农副产品和城市废料中的纤维转化成葡萄糖、酒精和单细胞蛋白质等,这对于开辟食品工业原料来源,提供新能源和变废为宝具有十分重要的意义。
此外,在果品和蔬菜加工过程中如果采用纤维素酶适当处理,可使植物组织软化膨松,能提高可消化性和口感。
2、将纤维素酶用于处理大豆,可促使其脱皮,同时,由于它能使细胞壁破坏,使包含其中的蛋白质、油脂完全分离,增加其从大豆和豆饼中提取优质水溶性蛋白质和油脂的获得率,既降低了成本,缩短了时间,又提高了产品质量。
3、植物纤维原料是地球上最丰富、最廉价而又可再生的资源,其主要成分是纤维素和半纤维素,纤维素和半纤维素的利用一直是国际国内的研究热点课题。利用的途径和整体思路是利用纤维素酶和半纤维素酶先将纤维素和半纤维素降解成可发酵糖,进而通过发酵制取酒精、单细胞蛋白、有机酸、甘油、丙酮及其他重要的化学化工原料。此外,纤维素、半纤维素通过纤维素酶的限制性降解还可制备成功能性食品添加剂,如微晶纤维素、膳食纤维和功能性低聚糖等。
Ⅲ 纤维素酶活力用什么方法测定
纤维素酶活力的测定 一、目的学习和掌握3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定纤维素酶活力的原理和方法,了解纤维素酶的作用特性。二、原理纤维素酶是一种多组分酶,包括C1 酶、CX 酶和�0�7�0�0-葡萄糖苷酶三种主要组分。其中C1酶的作用是将天然纤维素水解成无定形纤维素,CX 酶的作用是将无定形纤维… 3.C1 酶活力的测定 将5mg/mL 的原酶液稀释10~15 倍后用于测定C1 酶活力,以脱脂棉为底物。取4 支洗净烘干的20mL具塞刻度试管,编号后各加入50mg 脱脂棉,加入1.5mL 0.05MpH5.0 的柠檬酸缓冲液,并向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。将4 支试管同时在45℃水浴中预热5~10min,再各加入适当稀释后的酶液0.5mL,45℃水浴中保温24h。取出后立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS溶液以终止酶反应,充分摇匀后沸水浴5min,取出冷却后用蒸馏水定容至20mL,充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点,在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。 根据3 个重复光密度的平均值,在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量,按下式计算出C1 酶活力(U/g)。在上述条件下反应24h,由底物生成1�0�7�0�0mol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位(U)。 式中:24 为酶活力定义中的24h。 4.CX 酶活力的测定 将5mg/mL 的原酶液稀释5 倍后用于测定CX 酶活力,以CMC 为底物。 取4 支洗净烘干的20mL 具塞刻度试管,编号后各加入1.5mL 0.51%CMC 柠檬酸缓冲液,并向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。 将4 支试管同时在50℃水浴中预热5~10min,再各加入稀释5 倍后的酶液0.5mL,50℃水浴中保温30min 后取出,立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS 溶液以终止酶反应,充分摇匀后沸水浴5min,取出冷却后用蒸馏水定容至20mL,充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点,在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。 根据3 个重复光密度的平均值,在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量,按下式计算出CX 酶活力(U/g)。在上述条件下,每小时由底物生成1�0�7�0�0mol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位(U)。 5.�0�7�0�0-葡萄糖苷酶活力的测定 取4 支洗净烘干的20mL 具塞刻度试管,编号后各加入1.5mL 0.5%水杨酸苷柠檬酸缓冲液,并向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。将4 支试管同时在50℃水浴中预热5~10min,再各加入酶液0.5mL,50℃水浴中保温30min,取出后立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS 溶液以终止酶反应,充分摇匀后沸水浴5min,取出冷却后用蒸馏水定容至20mL,充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点,在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。 根据3 个重复光密度的平均值,在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量,按下式计算出�0�7�0�0-葡萄糖苷酶活力(U/g)。在上述条件下,每小时由底物生成1�0�7�0�0mol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位(U)。五、结果计算 1.葡萄糖(G)标准曲线的制作(表2) 表2 标准曲线测定数据列表
Ⅳ 纤维素酶的检测方法
1 酶的活力测试方法现状:�纤维素酶是由霉菌等培养得到的一个自然的多组份混合物,它的生物催化作用可以使纤维素纤维发生水解,有效地控制水解速度和水解率可以得到纤维素纤维织物的不同处理要求,纤维素酶对纤维素纤维的作用分四个程序;渗入,内切,外切,糖化。�渗入决定于酶的分子量大小和纤维的内表面可及度,内切(在任意部位把纤维素苷键切断)主要决定于组份中Cx酶的活力,外切(在纤维素的一端顺序切下一个个双糖)主要决定于C1酶的活力,糖化决定于把多糖转化为单糖的葡萄糖酶Co的活力。多种组分的各自活力和协调构成了单位时间内纤维素纤维的降解糖化量,酶的活力测定对织物酶处理工艺设计有重要意义。� 酶的活力测定,有称作催化活力测定,测定方法有;滤纸崩溃法,总糖比色法,粘度法……等。滤纸崩溃法属于定性检测,总糖比色法重点反映C1与Co的协调作用,粘度法重点反映Cx与C1的协调作用,两者都可以用作定量测定。至今活力测定尚未有统一的方法,表示活力大小的计量单位更是多种多样,丹麦NOVODISK(诺和诺得公司)早期采用总糖比色法(AF187.2/1-GB 82-08-10)一分钟水解产生1μmol葡萄糖称为一个NCU活力单位(NCU=NOVO Cellulase Unit)。后来又采用粘度法(AF275/1-GB 1989-02-03)用一种活力为880EGU的内切葡聚糖酶,以其作用于CMC的粘度曲线为对比标准,测得的对应值以EGU/克作为一个内切酶活力单位(EGU=Endo Glucase Unit)。
Ⅳ 纤维素酶的测定方法一般是我想要详解
酶的本质大多数是蛋白质,用双缩脲试剂出现紫色络合物
Ⅵ 纤维素酶活力用什么方法测定
纤 维 素 酶 是 一 种 复 合 酶 。 酶 系 包 括 外 切 B-1.4- 葡 聚 糖 酶 ( ExoB-1.4glucanase,EC3.2.1.9 ) 内 切 B-1.4 葡 聚 糖 酶 ( Endo β -1.4-glucanase,EC1.2.1.4) 和纤维二糖酶。纤维素酶在一定温度和 PH 条件下, 将纤维素酶底物(滤纸或羟甲基纤维素钠)水解,释放出还原糖。在碱性,煮沸 条件下,3.5-二硝基水杨酸(DNS 试剂)与还原糖发生显色反应,其颜色的深浅 与还原糖(与葡萄糖汁)含量成正比。通过在 540nm 测定吸光度,可得到产生还 原糖的量,计算出纤维素酶的 FPA 酶和 CMCA 酶活力,以此代表纤维素酶的酶活 力。