检测dna病毒用哪个方法好

❶ 关于乙肝DNA检测的问题{急！！！！！！}

传统检测乙肝的方法为“乙肝两对半”和“肝功能”检测，但是这两种检测方法均不能测定乙肝病毒在体内的含量及复制情况、传染程度，是否有必要继续服药，不能判定患者服用哪一类抗病毒药物才是对症。如果盲目给患者用药，恐因个体差异而引起治疗失败，致使病情延误。这也是一些乙肝患者久治不愈的主要原因。

乙型肝炎病毒DNA为乙型肝炎病毒核心的主要成分，临床上可应用斑点杂交法和聚合酶链反应法从被感染者血清中检测到它，阳性（＋）表示感染者血清中存在游离乙型肝炎病毒，具有传染性。另一方面，可检测血清中乙型肝炎病毒在体内的含量。DNA检测结果为临床诊断治疗提供了可靠的依据，成为临床治疗疗效判定的依据。
乙肝病毒DNA检测是通过一种较为先进的检测技术———聚合酶链反应（
即PCR检测方法），检测出存在于体内极其微量的乙肝病毒DNA基因的一种较新的检验方法。在临床上治疗乙肝病人，通过此检测能清楚的明确以下情况：
1、了解乙肝病毒在体内存在的数量。
2、是否复制。
3、是否传染，传染性有多强。
4、是否有必要服药。
5、肝功能异常改变是否由病毒引起。
6、判断病人是适合用哪类抗病毒药物。
7、判断药物治疗的疗效。
一般来讲，患有乙肝的病人，通过此检测能明确指导临床用药的方向，为科学合理的治疗乙肝提供坚实的保障。
感谢咨询！如果您还有不明白的地方，请来我院就诊。

❷ DNA血液病毒问题

乙肝病毒DNA定量检测已经走进大小医院和一些诊所，每一个乙肝患者在诊疗过程中，都要反复检测该指标。乙肝病毒DNA定量往往被描述成为判断乙肝传染性大小、病情严重程度以及治疗效果的“金指标”，其实这些认识都是片面的。乙肝病毒DNA定量检测为了解乙肝病毒在体内的变化增添了新的手段，弥补了以往乙肝病毒“两对半”检测的不足，只要抽血化验检测乙肝病毒DNA呈阳性，无论其他乙肝病毒检测结果如何，都说明患者体内存在复制状态的乙肝病毒，血液具有一定传染性，这对于评估治疗效果和了解病情变化有一定帮助。但是目前乙肝病毒DNA检测尚处于研究阶段，并非完美无缺。DNA定量只能在部分有条件的大医院检测，结果也只能用于参考，不宜当做确诊的“金指标”，在大小医院普及。 乙肝病毒DNA定量不能说明病情轻重 乙肝病毒DNA定量数值只能说明游离在血液中病毒的含量，病毒多少、含量高低与病情严重程度没有直接关系。乙肝病情严重程度必须通过检测肝功系列指标确定，这些指标包括：转氨酶、胆碱酯酶、胆红素、白蛋白、凝血酶原活动度、转肽酶、蛋白电泳等等，凝血酶原活动度、白蛋白、胆碱酯酶数值越低，说明病情越严重。病毒定量数值高低与病情无直接关系。相反，绝大多数无症状乙肝病毒携带者，尤其是少年儿童患者，乙肝病毒DNA检测都为阳性，乙肝病毒处于高复制状态，而他们的病情十分轻微，肝穿结果显示，他们的肝组织仅为轻度的非特异性炎症改变;而大多数肝硬化或肝癌患者的乙肝病毒DNA检测多为阴性，而病情却十分严重。乙肝病毒本身不引起肝细胞病变，感染的肝细胞仍然是长寿的，半衰期6～12个月或更长。乙肝病情轻重取决于很多因素，例如患者的免疫状态、遗传因素、病毒的变异等，病毒数量多少不是病情演变的决定因素。 乙肝病毒DNA定量说明疗效只在理论上有意义 从目前实际看，乙肝病毒定量是一个随时都在发生变化的不稳定数值，影响数值变化的因素很多，治疗时数值可能发生变化，不治疗时，数值也会发生变化。数值变化有可能是治疗效应，也有可能是自然变化或检验偏差。从目前实际情况看，乙肝病毒DNA定量检测还处于探索阶段，各种检测方法尚不完善，得出的数值左右漂浮，偏差很大。1.用于检测乙肝病毒DNA定量的方法不统一。目前使用的检测方法主要有：荧光定量PCR技术、竞争PCR技术、PCR酶联免疫吸附法、荧光标记物法和PCR酶联化学发光法。这些方法各有优缺点，使用的试剂来源于不同国家和地区，仪器设备也是五花八门，设立的标准曲线以及标准荧光等各不相同，得出的正常值各不相同。有的医院正常值定在103/ml以下，有的定在104/ml以下，有的定在105/ml以下，各个医院检测数值没有可比性。2.影响定量准确性的因素太多，导致结果的重复性差，其变异系数有时可达30％。极微量的核酸污染即可导致检测结果差异。为此定量检测尚局限于一些实验条件好的大医院，全面推广尚需时日。3.乙肝病毒DNA定量尚无国家统一标准，其正常值和异常值范围难以统一，各地、各单位检测数据没有可比性。4.同一位患者抽血检查乙肝病毒DNA，其定量数值每天都在变化，即便是患者不进行任何治疗，定量检测到的数值都在时刻变化之中。同一份血清在不同的时间检测，或在不同的实验室检测，其数值都会有所不同。以这种时刻都在自然变化数值来说明疗效，也是难以令人信服的。5.抽样误差无法避免，实验结果相差一个数量级（即10倍）是常有的误差。6.检测乙肝病毒DNA使用的PCR技术敏感性极高，实际操作中，极微量的核酸污染即可出现假阳性结果。7.实验室水平要求较高，实验室的隔离条件、清洁程度和仪器设备、试剂等不可能保证绝对的统一和规范，不少条件简陋的小单位，随便买一个PCR检测仪，就开始收费检查，其结果的准确性可想而知。 乙肝病毒DNA阳性决不意味着患者就是“毒王” 乙肝病毒要传染必须具备传染途径和条件，否则病毒数量再多，也不会传染。只要乙肝病毒复制指标，例如乙肝病毒DNA、乙肝病毒e抗原、乙肝病毒前S抗原、乙肝病毒核心抗体IgM等等，检测时出现阳性，都说明患者血液及体液含有复制状态的乙肝病毒。但是如果要让这些病毒传染给人，并且让人得上乙肝，并非一件容易的事。乙肝病毒DNA定量数值高，说明病毒复制活跃，血液具有传染性。但是无论病毒有多少，复制有多么活跃，要传染必须通过具体传染途径实现，接触乙肝患者不是乙肝的传播途径，传染性只针对输血、针刺、输液和垂直传播等途径，和乙肝患者共事、学习和工作不会导致乙肝的传播。对于成年人来说，乙肝病毒感染极少造成发病，绝大多数成年人感染乙肝病毒只是一过性的隐性感染。因为成年人具备正常的免疫功能，完全可以识别乙肝病毒，并迅速清除来犯之敌。小孩如果从来没有打过乙肝疫苗，体内没有形成有效的抗体，一旦接触乙肝病毒，危险性比成年人大得多。如果所有的新生儿和未受过乙肝病毒感染的成年人都及时接种乙肝疫苗，体内产生了表面抗体，具备了预防能力，无论怎样和乙肝患者接触，也不会得上乙肝。 PCR及斑点杂交技术检测病毒易出现偏差 开展PCR检测方法受到实验环境、试剂质量、实验器材等多方面因素的限制。一些地方不具备实验条件、试剂质量有问题、技术人员素质差，这样可能造成不少假阳性，形成冤假错案;也可能造成假阴性，而形成漏网之鱼。因此PCR检测方法尚不能做到普及和大众化，要注意由于检验误差带来的负面作用，更要注意有人利用这些技术，谋取经济利益。1998年以前，各地出现不少利用PCR方法检测性病的广告，这项不太成熟的技术，被大量盗用，给当时的性病治疗带了不少的混乱。因此，卫生部果断决定，终止PCR方法在临床上的使用。目前只有部分三甲医院经过严格审批后，可以使用PCR检测技术，但是也不作为常规临床检测，数据只供医师参考。

❸ HBV-DNA检测方法有哪些

斑点杂交法是传统的老方法，检测成本低，但是检测的灵敏度不高，而且准确度也不高，只能定性检测乙肝病毒DNA，不能定量；PCR法是基因检测中使用最多的方法我国是一个肝炎大国，其中乙肝病毒携带者都占四川人口的十分之一，政府为了改变现状，下决心大力宣传普及乙肝知识，卓有成效，以前的许多乙肝盲现在也知道HBV-DNA了，但是还有许多人可能了解不够全面，今天肝病专家就开展一次知识普及课堂，专门说明，希望广大朋友能对此有一个全面的认识。？目前我们常用的只有两种方法，一种是斑点杂交法，还有一种是PCR法。我们下面对这两种方法进行详细的说明。推荐阅读：乙肝病毒DNA的正常值是多少一、斑点杂交法此方法是传统的老方法，检测成本低，但是检测的灵敏度不高，而且准确度也不高，只能定性检测乙肝病毒DNA，不能定量。也就是说只能检测患者体内的乙肝病毒DNA是阴性还是阳性，而不能检测出机体内乙肝病毒的数量。推荐阅读：什么是乙肝病毒定量检查二、PCR法PCR法是基因检测中使用最多的方法，是聚合酶链式反应的简称，是一种酶促反应。此方法可以在短时间内将待测基因扩增到上百万倍，这样可以大大提高基因诊断的准确度，保证此检查方法的灵敏度。分为三步，第一是对待测的基因进行PCR，然后电泳此结果，接下来就是对此结果进行分析。

❹ 煮沸法提取病毒dna与离心柱法哪种好

自然界中无论是植物、动物还是病毒，DNA作为大部分生物的遗传物质，在遗传中起着不可替代的作用，为了研究生物的基因，就需要将DNA从细胞中提取出来，这个过程有很多方法可以实现，目前比较常用的有苯酚氯仿抽提法、离心柱法和磁珠法，实验室就这三种提取方法进行了梳理和比较，总结出各方法的优缺点供广大科研工作者参考。
1.苯酚氯仿抽提法
苯酚氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶KEDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，变性降解核蛋白，使DNA从核蛋白中游离出来。而DNA易溶于水，却不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。利用萃取原理，根据蛋白核酸溶于不同的试剂层，将枪头伸入不同液层内抽取所需的成分，经多次洗涤后获得纯化核酸。
该方法的缺点是由于使用了苯酚、氯仿等试剂，毒性较大，长时间操作对人员健康有较大影响，而且核酸的回收率较低，损失量较大，由于操作体系大，不同实验人员操作重复性差，不利于保护RNA，很难进行微量化的操作。优点是采用了实验室常见的试剂和药品，做起来成本比较低廉。
2.离心柱法
离心柱法主要原理是将对核酸有吸附作用的官能基团固定在离心柱模上，通过加入不同的裂解试剂、洗涤试剂并反复离心，以达到核酸与杂质分离的目的，获得纯化的核酸。离心柱法DNA提取它的优点是比传统的酚氯法提取的纯度高，有利于RNA保护，而且能进行微量操作，以其低廉的价格和相对便捷的操作，渐逐取代了传统DNA提取方法，被高校科研所等市场普遍接受。
离心柱法DNA提取的缺点是需要较多的样本，耗材多，对于珍稀样本无能为力，特别是在法医、考古等领域显得力不从心。同时离心柱法DNA提取需要反复离心，不便于高通量、自动化操作，与现代生物学实验的高通量、自动化要求格格不入，特别是在基因诊断、疾病检测、转基因检测等领域，离心柱法DNA提取需要大量的操作人员及仪器设备。当面对突发疫情时，更是需要有高通量的DNA提取设备与方法才能更有效准确的监测疫情、控制疫情。为此需要一种新的DNA提取方法解决这个实际难题。在这个时代潮流需求的驱动下，磁珠法DNA提取应运而生。
3.磁珠法
磁珠法的原理是在磁珠表面修饰有对核酸有吸附作用的特定活性官能基团，通过不同的裂解液结合液洗涤液在特定的条件下能够与目的物质进行特异性结合，同时利用磁珠自身的磁性，在外磁场的作用下可以方便的实现定向移动与富集，从而达到核酸与杂质分离的目的，进而实现对目标物质的分离纯化，获得纯化核酸。
磁珠法是纳米科技与生物技术的完美结合，具有其他DNA提取方法无法比拟的优势，主要体现在：
a.能够实现自动化、高通量操作，配合96孔的核酸自动提取仪，在以往做一个样品的提取时间内可同时实现对96个样品的处理，效率直接提高96倍，满足了当前生物学高通量操作的要求，使得在大规模疫情爆发时能够进行快速筛查原因，这个优点是其他方法难以赶超的。
b.操作简单、用时短，整个提取流程只有裂解、结合、洗涤、洗脱四步短时间内即可完成。
c.安全无毒，不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂，对实验操作人员的伤害少，保护了实验人员的身体健康。
d.磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。
e.灵敏度高，适合法医样本等痕量DNA提取。
随着当代生物学的高速发展及核酸提取仪的大量普及，为了满足时代要求，专业研制磁珠法DNA提取，并开发了多系列磁珠法DNA提取的系统化方案，为广大科研工作者提高试验效率，简化试验过程提供强有力的技术支持和产品保障，磁珠法DNA提取也将成为现代分子生物学的主流。

❺ DNA检测的方法都有哪些

DNA检测
技术有很多，主要分为定性和定量方法。给你举几个：1，分子杂交技术，（包括southern杂交，northern杂交，基因芯片等）分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备，例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛（Dig）等。由于地高辛标记核酸探针，操作方便、灵敏度高，已标记的探针在4℃贮存可达两年之久，方便随时应用，所以现在常采用地高辛标记核酸探针，用光标记法将光敏Dig标记到探针上，制成光敏-Dig-核酸探针，再与固定在硝酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交，使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合，最后可用不同的检测方式进行检测，
发光检测
和显色检测均可，灵敏度可达10pg以下2，基于DNA结合蛋白的方法Threshold®
Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白，单链DNA（ssDNA）结合蛋白（SSB）和抗ssDNA
的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA
的单抗与变性的宿主细胞DNA结合最终形成复合物，通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝酸纤维素膜，在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉，最后放于有
尿素溶液
的读数仪，尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2
导致PH值发生变化，读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量，从而达到检测残余DNA含量的目的。3，PCR法，其中以实时定量PCR法最为突出荧光定量
PCR是基于PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，产物的增加可以通过荧光信号指示，通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量，通过加入已知浓度的
标准样品
绘制标准曲线，然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度，从而达到检测残余DNA含量的目的。此外，对DNA的定量技术也有很多，可以看下这篇文章《核酸定量技术及其在生物检测中的应用》

❻ 用DNA探针法检测基因,具体怎么操作越详细越好

DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的，如细菌的毒力因子基因探针和人类Alu探针。这些DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。以细菌为例，目前分子杂交技术用于细菌的分类和菌种鉴定比之G+C百分比值要准确的多，是细菌分类学的一个发展方向。加之分子杂交技术的高敏感性，分子杂交在临床微生物诊断上具有广阔的前景。细菌的基因组大小约5×106bp，约含3000个基因。各种细菌之间绝大部分DNA是相同的，要获得某细菌特异的核酸探针，通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法，即将细菌DNA切成小片段后分别克隆得到包含基因组的全信息的克隆库。然后用多种其它菌种的DNA作探针来筛选，产生杂交信号的克隆被剔除，最后剩下的不与任何其它细菌杂交的克隆则可能含有该细菌特异性DNA片段。将此重组质粒标记后作探针进一步鉴定，亦可经DNA序列分析鉴定其基因来源和功能。因此要得到一种特异性DNA探针，常常是比较繁琐的。探针DNA克隆的筛选也可采用血清学方法，所不同的是所建DNA文库为可表达性，克隆菌落或噬斑经裂解后释放出表达抗原，然后用来源细菌的多克隆抗血清筛选阳性克隆，所得到多个阳性克隆再经其它细菌的抗血清筛选，最后只与本细菌抗血清反应的表达克隆即含有此细菌的特异性基因片段，它所编码的蛋白是该菌种所特有的。用这种表达文库筛选得到的显然只是特定基因探针。
DNA探针可以用来诊断寄生虫病，现场调查及虫种鉴定，可用于病毒性肝炎的诊断，遗传性疾病的诊断，可用于改造变异的基因，可用于检测饮用水病毒含量。具体方法：用一个特定的DNA片段制成探针，与被测的病毒DNA杂交，从而把病毒检测出来。与传统方法相比具有快速、灵敏的特点。传统的检测一次，需几天或几个星期的时间，精确度不高，而用DNA探针只需一天。据报道，能从1t水中检测出 10个病毒来，精确度大大提高

❼ 什么是DNA检测

dna是一种很重要的遗传物质。脱氧核糖核酸（英语：deoxyribonucleic
acid，缩写为dna）又称去氧核糖核酸，是一种分子，可组成遗传指令，以引导生物发育与生命机能运作。主要功能是长期性的资讯储存，可比喻为“蓝图”或“食谱”。其中包含的指令，是建构细胞内其他的化合物，如蛋白质与rna所需。带有遗传讯息的dna片段称为基因，其他的dna序列，有些直接以自身构造发挥作用，有些则参与调控遗传讯息的表现。
dna检测是在核酸水平上的检测，常见的方法有pcr,基因芯片等等

❽ hpv检测有哪些常见的办法

随着HPV疫苗的上市，人们对HPV也越来越 重视。那目前应该用什么方式去筛查HPV?

三、基因检测

基因检测包括杂交捕获2代技术(HC-Ⅱ)、实时荧光定量PCR技术(Cobas 4800)、酶切信号放大法(Cervista
HPV)、基因芯片法。其中实时荧光定量PCR技术在DNA扩增时结合了特异探针的杂交，进一步提高了实验的敏感性和特异性。它可以实时利用荧光监测DNA扩增过程，使结果准确可靠，非常适合用于临床的大面积筛查。

人乳头瘤病毒(HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖.目前已分离出130多种，不同的型别引起不同的临床表现。

不同型的HPV所引起的疾病不同，目前的筛查方法，建议使用基因检测，可以明确感染是哪型的HPV，可以做相应的干预，也对自己的身体状况有比较清楚的认知。

❾ DNA损伤有什么检测方法

DNA损伤修复-检测方法
大部分DNA损伤修复都依赖于DNA的修复合成,所以对修复合成的测定常用来作为DNA修复的检测方法。常用的有以下几种：
放射自显影法
在细胞培养物中加入氚标记的胸腺嘧啶核苷等放射源,用放射自显影方法计数银颗粒数来测定修复合成过程中参入到DNA分子中的量。
液体闪烁计数法
用液体闪烁计数器测定培养物中的放射源因修复合成而参入到DNA分子中的量。这一方法适用于大批量样本。
超速离心法
一种应用比较广泛的方法，可应用于切除修复、复制后修复及链断裂修复方式的检测。一般是用氚标记溴脱氧尿嘧啶核苷等参入到修复合成的DNA分子中去以改变DNA分子的重量(BrdU的分子量比尿嘧啶核苷大),通过超速离心可以从沉降系数不同的各组分中收集修复合成中参入量不同的DNA片断,然后分别测定其放射性的强度来判断修复合成的多少。
病毒宿主细胞复活法
以SV40病毒、腺病毒、疱疹病毒、噬菌体等感染培养的人体细胞或细菌，然后以紫外线等处理以造成病毒DNA分子的损伤，因为病毒DNA分子损伤的修复是靠宿主细胞的修复酶系统，所以受损伤的病毒能否继续生存繁殖可间接地反映宿主细胞的修复功能。
姐妹染色单体互换(SCE)法
姐妹染色单体互换率的检测也能反映一部分DNA修复功能。人类中的某些先天性DNA修复缺陷疾病如布卢姆氏综合征患者的自发SCE显着增高;另一些如着色性干皮病则诱发SCE增高。这是由于DNA修复功能的缺陷导致染色体稳定性减弱所致。

❿ 检测胞内DNA病毒，用到荧光定量的时候，模板用病毒DNA ,还是病毒的cDNA谢谢了

理论上的差别不大。不过要点是你要知道模板的定量。

实际上在实验的过程中，还要考虑到PCR条件，比如DNA结构，是否有特殊的序列影响PCR效率等等（比如病毒DNA中，在PCR目标附近的序列，cDNA上就没有），所以用病毒DNA是最好的。