检测细胞凋亡的方法比较

Ⅰ 细胞凋亡有哪些检测方法

1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙(AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。 4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。 IL-4 http://www.bio1000.com/experiment/immunology/237982.html 生物帮上面有这方面的介绍。

Ⅱ 流式细胞仪检测细胞凋亡的几种方法的比较

目的:探索运用流式细胞仪来检测细胞凋亡的方法.方法:采用流式细胞仪对DNA含量、磷脂酰丝氨酸、线粒体膜电位、钙离子浓度的检测,分析细胞凋亡情况.结果:DNA含量测定存在一定误差;磷脂酰丝氨酸测定能准确反映细胞早晚期凋亡情况;线粒体膜电位、钙离子浓度测定能准确反映凋亡细胞的生理指标,如果结合形态学分析将更为客观.结论:通过比较实验方法,为将来采用流式细胞仪检测细胞凋亡提供更准确的实验方法.

Ⅲ 细胞凋亡检测都有哪些方法我自己做了流式，感觉做不好，想咨询下哪些公司可以做。

流式检测凋亡的方法有很多种，不同的方法适用于不同的细胞类型。目前一个很大的误区就是滥用annexin V +PI来检测各种细胞的凋亡。这个方法是为了检测悬浮细胞，比如白细胞而设计的。贴壁培养，或者直接从组织分离得到的细胞不适合用这个方法检测。因为在处理细胞的时候回造成大量的假阳性。
贴壁细胞可以采用检测caspase活性的方法来反应凋亡，而且方法很简单。目前有caspase底物结合的荧光染料。直接加到细胞培养液里面。细胞摄取后，如果处于凋亡期，细胞内的caspase-3/7激活。，降解了底物，荧光染料释放后进入细胞核，染色DNA，这个细胞在流式检测时就是阳性细胞。
这种试剂盒Invitrogen出的，有好几种颜色可选

Ⅳ 检测细胞凋亡的三种常用方法，您知道几种

一、形态学观察方法

二、DNA凝胶电泳

三、酶联免疫吸附法

四、流式细胞仪定量分析

Ⅳ 检测细胞凋亡的方法有哪些

一、形态学观察方法
1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。
2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

二、DNA凝胶电泳
（一）检测原理
细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。

（二）结果判断
正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER）条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。

三、酶联免疫吸附法（ELISA）核小体测定
凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。

（一）检测步骤
1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；
2、在微定量板上吸附组蛋白体；
3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合；
4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合；
5、加酶的底物，测光吸收制。

（二）用途
该法敏感性高，可检测5*100/ml凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器，适合基层工作，但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。

四、流式细胞仪分析
（一）检测原理
细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。

（二）应用价值
流式细胞仪检测具有以下特点：
1）、检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确
2）、可以做许多相关性分析
3）、结合被检测细胞的DNA含量的分析，可确定凋亡的细胞所处的细胞周期

■检测形态学及细胞膜完整性的Hoechs-PI双染色法
细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性液增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间，利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪检测细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。
利用Hoechs-PI染色法，正常细胞对染料有抗拒性，荧光染色很浅，凋亡细胞主要摄取Hoecha染料，呈现强蓝色荧光，而坏死细胞主要摄取碘化丙啶（PI）而呈强的红色荧光。

■DNA片断原位标记法
凋亡细胞DNA片断原位末端检测技术是指在细胞（或组织）结构保持不变的情况下，用荧光素、地高辛或生物素标记的脱氧尿三磷酸（deoxyuridinetriphate，DUTP）和末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）相反应与凋亡细胞裂解后3.的羟基（－OH）端结合，经显色反应后检测DNA裂解点的技术。

DNA片段原位标记法有二种：
1、原位缺口转移（in situ nick-translation，ISNT）技术，它是利用DNA多聚酶I将标记的核苷酸连接到断裂DNA的3－OH端
2、原位缺口末端标记技术（in situ end labelling technique，ISEL），即TUNEL法，它是利用TdT将标记的DUPT接到3－OH端。研究证明，TUNEL法的敏感性远高于ISNT，尤其对早期凋亡的检测，TUNEL为合适。

■检测细胞膜成分变化的Annexin V 联合PI法
1、原理：在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）迁移至细胞膜外测。磷脂结合蛋白V（Annexin V）是钙依赖性的磷脂结合蛋白，它于PS具有高度的结合力。因此，Annexin V可以作为探针检测暴露在细胞外测的磷脂酰丝氨酸。故利用对PS有高度亲和力的Annexin V，将Annexin V标记上荧光素（如异硫氰酸荧光素FITC），同时结合使用PI拒染法（因坏死细胞PS亦暴露于细胞膜外测，且对PI高染）进行凋亡细胞双染法后用流式细胞仪即可检测凋亡细胞。

2、结果判断：正常活细胞Annexin V 、PI均低染；凋亡细胞Annexin V高染、PI低染；坏死细胞Annexin V/PI均高染。

3、应用价值：细胞发生凋亡时，膜上的PS外露早于DNA断裂发生，因此Annexin V联合PI染色法检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏。又Annexin V联合PI染色不需固定细胞，可避免PI染色因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL法因固定出现的DNA片段丢失。因此，Annexin V联合PI法更加省时，结果更为可靠，是最为理想的检测细胞凋亡的方法

Ⅵ 几种凋亡细胞检测方法的比较

在细胞凋亡的基础研究领域,如有关凋亡信号转导、基因调控等方面的研究,以及在细胞凋亡的应用研究领域,诸如将细胞凋亡作为化疗药物的筛选模式、检测肿瘤组织切片中凋亡细胞数以评价肿瘤预后等,都涉及到凋亡细胞的识别与检测这一基本问题,因此,选择合适的检测凋亡细胞的方法便成为各个实验室必须解决的问题.本文结合相关文献及在研究中的体会,就凋亡细胞与坏死细胞的区别、几种常用凋亡细胞检测方法适用范围及应用中的影响因素、结果分析等简述如下.

Ⅶ 细胞凋亡检测方法都有什么呢

这个问题应该是生物免疫学方面的问题。细胞凋亡检测方法有很多种，我们最常见的就是染色光镜观察法，把细胞放到特定的染色剂中，一段时间后在光镜下观察，可以看到凋亡细胞呈团块状。还有一个方法是DNA观察，正常的细胞DNA是完整的排列，凋亡的细胞DNA排列是断裂的，这一点可以明显的观察到，靠这个方法也可以判断。用透射电镜观察，凋亡细胞形状是新月形的。

Ⅷ 细胞凋亡检测方法有哪些

细胞凋亡的形态学检测

1 光学显微镜和倒置显微镜

(1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体.

贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落.

(2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等.凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态.

2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜

一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况.

常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI.三种种染料与DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区.紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光.

Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释,终浓度为10 ug/ml.

DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色.储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为10 ug/ml.

结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体(图1).

3 透射电子显微镜观察

结果评判:凋亡细胞体积变小,细胞质浓缩.凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象(cavitations)的空泡结构(图2);Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体.

Ⅸ 求细胞凋亡的一些系统的检测方法，最好全！谢了！

Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒

产品说明：
凋亡是一种程序性的细胞死亡，与细胞的坏死有生化和形态等方面的不同。磷酯酰 丝氨酸(phosphatidylserine, PS)是细胞膜的一种组成成分，在正常细胞主要分布在细胞膜内侧；细胞发生凋亡的早期，PS会外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。Annexin V 对PS有高度的亲和力，可以选择性结合和标记PS 。本试剂盒采用重组人Annexin V-EGFP融合蛋白，来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的PS，标识出凋亡细胞。由于坏死细胞和凋亡晚期细胞，其膜内侧的PS也可以被Annexin V结合，通常用另一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)进行双重染色，以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡晚期的细胞。用Annexin V-EGFP和PI染色后，正常的活细胞不被Annexin V-EGFP和PI着色；凋亡早期的细胞仅被Annexin V-EGFP着色，PI 染色呈阴性；坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被Annexin V-EGFP和PI着色。用流式细胞仪或荧光显微镜直接观察PS外翻这一细胞凋亡的重要特征，是一种快速简便的细胞凋亡经典检方法。

操作方法：

染色液的配制：

1) 取适量4x Annexin V结合液，用双蒸水稀释至1xAnnexin V结合液。后续工作均使用1x Annexin V结合液。
2) 将20 μl Annexin V-EGFP加入1 ml Annexin V结合缓冲液中，即配成10次测试的 Annexin V染色液。
3) 将5 μl PI加入5 ml Annexin V结合缓冲液中，即配成10次测试的PI染色液。

荧光显微照相操作方法：

1) 培养细胞用所需方法处理以诱导凋亡。应同时设置阴性对照。
2) 对贴壁生长细胞，离心收取培养液内的悬浮细胞，并用胰酶消化贴壁细胞，合并两部分细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用冰冷PBS洗涤细胞后， 1000g离心5 min，弃上清，加入100 μl Annexin V染色液轻轻重悬细胞。室温(20-25℃)放置，孵育10~15 min。再加入PI染色液0.5 ml混匀。室温孵育5 min
3) 完成孵育后，1000g离心5 min，弃上清，轻轻重悬细胞于50~100μl Annexin V结合缓冲液中；取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
4) 荧光显微镜下，用蓝光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像。结合Annexin V-EGFP 的凋亡细胞的质膜将显示绿色光圈；膜结构不完整的坏死细胞和晚期凋亡细胞在整个核区被PI染成红色而质膜为Annexin V-EGFP阳性呈现为绿色光圈。
5) 培养于48孔板或96孔板内的贴壁细胞，也可进行原位染色。在凋亡诱导结束后，用冰冷PBS轻轻洗涤细胞，完全去除PBS，加入100 μl Annexin V染色液，室温孵育 10~15 min；吸除染色液，加入PI染色液0.5 ml混匀。室温孵育5 min。立即在倒置荧光显微镜下观察。

流式细胞分析操作方法：
1) 培养细胞用所需方法处理以诱导凋亡。应同时设置阴性对照。
2) 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用冰冷PBS洗涤细胞后，取5~10万重悬的细胞，1000g离心5 min，弃上清，加入100 μl Annexin V染色液轻轻重悬细胞。室温(20-25℃)放置，孵育10~15 min。
3) 再加入PI染色液0.5 ml混匀。室温孵育5 min。
4) 完成孵育后，立即进行流式细胞分析。采用488 nm双波长激发，测定~510 nm和>575 nm的发射，细胞应可分成三个亚群：活细胞仅有很低的荧光强度，凋亡细胞有较强的绿色荧光，坏死细胞（包括极晚期凋亡细胞）有绿色和红色荧光双重染色。

注意事项：
1) 该试剂盒只能检测活细胞，而不能用于切片、擦刮、固定或浸润细胞样品的检 测。如需对活细胞固定进行其它检测，可在本试剂盒标记完成后，用Annexin V结合缓冲液清洗细胞，再固定进行后续操作。
2) 细胞凋亡是一种持续变化的动态过程，选择合适的诱导时间对观察凋亡比较重要。
3) Annexin V和PI染色的活细胞应尽快检测。
4) 微生物污染的细胞样品或试剂可导致错误的观察结果。

Ⅹ 细胞凋亡的早期检测方法有哪些

1、PS（磷脂酰丝氨酸）在胞外膜分布的检测
PS从胞膜内侧转移到外侧现象是在细胞凋亡的早期即可发生标志。AnnexinV是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，能专一性的结合暴露在胞膜外侧的PS，使用荧光素标记的AnnexinV 蛋白（如Annexin V-FITC）即可检测细胞凋亡。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测（悬浮细胞和贴壁细胞都适用），可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。操作简便快速，10分钟就可完成检测。灵敏度高，可作为流式方法分析凋亡细胞的基础。
2、细胞内氧化还原状态改变的检测
正常状态下,谷胱甘肽（GSH）作为细胞内的一种重要的氧化还原缓冲剂。细胞内有毒的氧化物通过被GSH还原而清除，氧化型的GSH又可被GSH还原酶迅速还原。这一反应在线粒体中尤为重要，许多呼吸作用中副产物的氧化损伤将由此被消化除。在细胞膜中有可被凋亡信号启动的ATP依赖的GSH转移系统。当细胞内GSH的排除非常活跃时，细胞液就由还原环境转为氧化环境，这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低，从而使细胞色素C（三羧酸循环中的重要组分）从线粒体内转移到细胞液中，启动凋亡效应器caspase的级联反应。
3、细胞色素C的检测
细胞色素C作为一种信号物质，在细胞凋亡中发挥着重要的作用。正常情况下，它存在于线粒体内膜和外膜之间的腔中，而不存在于胞浆内。凋亡信号刺激后可使其从线粒体释放到胞浆中，结合Apaf-1后而启动caspase级联活化反应，首先可激活caspase-9，后者再激活caspase-3和下游的其它caspase分子。凋亡发生的早期，细胞色素C泄漏到胞浆中，检测胞浆中细胞色素c的含量可反映细胞的早期凋亡。
4、线粒体膜电位变化的检测
在细胞凋亡的早期，线粒体在形态学上没有明显变化。但线粒体可发生很多生理生化的改变。例如在受到凋亡诱导后，线粒体的转膜电位发生变化，导致膜穿透性改变。MitoSensorTM是一种阳离子染色剂，对此膜电位改变非常敏感，可呈现出不同的荧光染色。正常细胞中，它在线粒体中形成聚集体，发出强烈的红色荧光。凋亡细胞中，因线粒体跨膜电位改变，它则以单体形式停留于胞浆中，发出绿色荧光。用荧光显微镜或流式细胞仪可清楚地分辨这两种不同的荧光信号。