抗体效价检测方法

❶ 如何检测western抗体效价

行.
以下为例：供参考
用Western blot检测MUC1核心肽多克隆
抗体特异性：将纯化的8R．MUCPT蛋白(2孔)经
SDS—PAGE后,转移至硝酸纤维膜上；5％脱脂奶粉封
闭4℃ 12 h；将硝酸纤维膜剪成2条,每1个上样孔
为1条,分别置于一抗为1：500稀释的兔抗8R—
MUCF1r血清和1：500稀释的MUC1核心肽单克隆抗
体中,室温2 h；PBS洗5 min×3次；二抗分别为
1：500稀释的过氧化物酶标记的羊抗兔IgG和1：500
稀释的过氧化物酶标记的羊抗鼠I ,室温2 h；PBS
洗5 min×3次；DAB显色.

❷ 抗体效价怎样检查

医院测抗体一般是用ELISA方法。灵敏度很高的。
在其他地方，还有血凝抑制试验，琼脂扩散试验，抗体蛋白纯化定量，抗体活性检测等。
根据要求不同，选择不同的方法，现在医院最常用。使用方便的就是ELISA试剂盒。
原理是:在反应板上包上抗原，然后加入检测样品液(血清，组织液等，需要处理一下)，如果检测样品中有抗体，就可以与抗原结合，再加入酶标记的抗抗体，就可以和样品中抗体结合，加入显色剂，显色后，检测，通过吸光度的多少，确定抗体的含量。

❸ 制备免疫血清时，为检测抗体效价，家兔最常用的采血方法是

正确答案:B
解析：制备免疫血清时，免疫家兔后，常采用耳缘静脉采血来检测家兔产生抗体的效价
。

❹ 求助ELISA测定抗体效价方法

我用的是间接ELISA，以下自我的毕业论文：
将抗原用包被液稀释至约10 ?g/mL；分别将阳性血清和阴性血清用TBS倍比稀释，稀释梯度从1：200，1：400至1：204800，二抗用的是HRP标记的羊抗兔IgG(1:5000稀释) 。酶标仪测定450nm处各个孔的吸光度(A450)，计算阳性血清与阴性血清的吸光度之比(P/N)，当P/N＜1.5时为阴性，当P/N≥1.5而＜2.1为可疑，当P/N≥2.1为阳性，将P/N≥2.1时所对应的抗体最高稀释倍数作为抗体的效价。

❺ 怎么查rh抗体效价

多采免疫双向扩散法
【基本原理】
*指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。
-将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。
*优缺点：简便，但敏感性较低，易出现假阴性结果。
免疫双向扩散法的操作步骤
*将玻璃板用水洗净后用75%乙醇冲洗，晾干后放在水平台上备用。
*将1%agar 融化后，置56℃水浴。
*在玻璃板上铺胶，约1.5mm 厚，凝固后打孔(直径 3rnm)，孔间距10mm。
l 抗血清(抗体预先作系列倍比稀释即ml 抗原样品，周围孔内每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝胶板置湿盒内，室温扩散24h。
*观察结果。
凝聚胺法测定孕妇血清IgG抗-A（抗-B）效价的方法待检血清与0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在试管内等量混合，放入37℃水浴1 h以破坏血清中的IgM抗体，吸取处理后的血清用生理盐水倍比稀释，稀释度分别为2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然后每管加入相应的3%～5%红细胞悬液，置37℃水浴30 min，观察是否凝集，不凝集者用生理盐水洗涤3次，然后加入低离子盐水介质(LIM液)，混匀，滴入2滴凝聚胺，混匀后3 000 r/min离心30 s，扣摇肉眼可见明显的凝集(无凝集者须重做)，再加入2滴重悬液，轻摇，观察凝集是否消失，凝集1 min内不消失者表示受检者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。

❻ ELISA技术测定单克隆抗体效价方法有吗

ELISA 是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上，形成酶标抗体/酶标抗原，称为酶结合物。该酶结合物的酶在免疫反应后，作用于底物使之呈色，根据颜色的有无和深浅，定位或定量抗原/抗体。ELISA 法是免疫酶技术的一种，其特点是利用聚苯乙烯微量反应板(或球)吸附抗原/抗体，使之固相化，免疫反应和酶促反应都在其中进行。在每次反应后都要反复洗涤，这既保证了反应的定量关系，也避免了末反应的游离抗体/抗原的分离步骤。在ELISA 法中．酶促反应只进行一次，而抗原、抗体的免疫反应可进行一次或数次，即可用二抗(抗抗体)、三抗再次进行免疫反应。 目前常用的几种ELISA 方法有：测定抗体的间接法，测定抗原的双抗体夹心法和测定抗原的竞争法等。本实验采用间接法测定单克隆抗体效价。其主要过程为：首先将已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反应板的凹孔内，加待测抗体，保温后洗涤以除去未结合的杂蛋白质，加酶标抗抗体，保温后洗涤，加底物保温30分钟后，加酸或碱终止酶促反应，用目测或光电比色测定抗体含量。

❼ 抗体效价的检测方法

多采免疫双向扩散法
【基本原理】
*指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。
-将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。
*优缺点：简便，但敏感性较低，易出现假阴性结果。
免疫双向扩散法的操作步骤
*将玻璃板用水洗净后用75%乙醇冲洗，晾干后放在水平台上备用。
*将1%agar 融化后，置56℃水浴。
*在玻璃板上铺胶，约1.5mm 厚，凝固后打孔(直径 3rnm)，孔间距10mm。
l 抗血清(抗体预先作系列倍比稀释即ml 抗原样品，周围孔内每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝胶板置湿盒内，室温扩散24h。
*观察结果。
凝聚胺法测定孕妇血清IgG抗-A（抗-B）效价的方法待检血清与0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在试管内等量混合，放入37℃水浴1 h以破坏血清中的IgM抗体，吸取处理后的血清用生理盐水倍比稀释，稀释度分别为2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然后每管加入相应的3%～5%红细胞悬液，置37℃水浴30 min，观察是否凝集，不凝集者用生理盐水洗涤3次，然后加入低离子盐水介质(LIM液)，混匀，滴入2滴凝聚胺，混匀后3 000 r/min离心30 s，扣摇肉眼可见明显的凝集(无凝集者须重做)，再加入2滴重悬液，轻摇，观察凝集是否消失，凝集1 min内不消失者表示受检者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗体效价检测的其它方法
*环状沉淀试验，需较多的抗血清，现已很少用；
*对流免疫电泳，比琼脂免疫双扩散法敏感，较简便、实用；
*酶联免疫吸附试验 (ELISA)。
通常抗体效价低于1：128是没有问题的，有些孕妇高达1：256以上，而且抗体效价最好1个月查上一次，有时候会有所变化。

❽ 抗体效价测定的介绍

抗体效价测定是指测定抗体的物理状态及其在体内的滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。

❾ 抗体效价测定的方法内容

1．取小试管10支，分别标明1-10号，各管加生理盐水0.2ml，用刻度吸管吸取被检者血清0.2ml加入到第1管充分混匀，再用同一吸管从第1试管中吸出0.2ml加入到第2管，充分混匀后再吸取0.2ml加入第3管，以此倍量稀释。取第10管的0.2ml稀释液弃去。使成 1:2、1:4……。
2．然后各管再加等量含相应抗原的5%红细胞盐水悬液，振摇试管架使之混匀，置 37℃水浴中放置1h，以3000r/min离心15s，观察凝集结果并记录；对凝集强度为“1+”以下及不凝集者，用生理盐水洗涤3遍，末次吸干上清液；各加生理盐水2滴，取出每管加抗人球蛋白试剂2滴，以3000r/min离心15s，观察凝集结果并记录。出现凝集的最高稀释度的倒数为效价。例如右图表抗A血清效价测定结果为256。