抗原检测的方法图片

❶ 酶联免疫法的检测方法

双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：
一、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。
二、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
三、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
四、加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步法检测。
在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，显然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而可消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。 在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显着提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：
⑴将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
⑵加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
⑶加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。
⑷加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竞争吸附而影响包被效果。
间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性抗体。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。另外，在检测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。 竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：
⑴将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。
⑵待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。
⑶加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。一般情况，是通过方波伏安法，检测培养体系的峰电流，通过峰电流与抗原抗体的线性关系来最终确定体系的最终检测目标的浓度。
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。 血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：
⑴将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。
⑵加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。
⑶加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。
⑷加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。
⑸加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。 亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。
亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。 在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：
⑴已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；⑵酶标记的抗原或抗体（结合物）；
⑶酶的底物；
⑷阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；
⑸酶联物（结合物）及标本的稀释液；
⑹洗涤液；
⑺酶反应终止液。

❷ 核酸检测已经成为常态，抗原检测可代替核酸检测吗哪些人可以做

不可以代替核酸检测，第一，密切接触人员，第二，有相似症状的人，第三，怀疑自己被感染的人，第四处于隔离当中的人，第五，想要自行检测的人

❸ 免疫学的检测方法

免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫。

❹ 乙肝表面抗原的测定方法

中国最常使用的测定表面抗原的方法是酶联免疫吸附试验（ELISA），其次是放射免疫试验（RIA）。
ELISA简单、方便、快速，进口试剂盒可测到的血清表面抗原最低浓度为0.2ng/ml，国产试剂盒目前能达到0.5ng/ml。

❺ 国家为什么要采取抗原检测作为补充抗原的检测方法是什么

根据抗原和抗体的不同性质和反应条件的不同，抗原抗体反应呈现不同的形式，颗粒抗原呈现凝集反应。可溶性抗原呈沉淀反应；与补体结合时，细菌抗原呈溶菌反应，而红细胞抗原呈溶血反应。毒素抗原显示中和反应等。可溶性抗原与相应抗体结合产生的沉淀反应，可溶性抗原与相应抗体结合产生的凝集反应，抗原抗体结合激活的补体引起的细胞裂解反应，病毒与相应抗体结合引起的中和反应，免疫标记的抗原抗体反应。

具体方法是:第一步是在大肠杆菌中表达目的基因的蛋白质；第二步，免疫注射表达蛋白的动物，产生相应的抗体，并提取抗体(一抗)；步骤3，从转基因生物中提取蛋白质并进行凝胶电泳；第四步，将凝胶中的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上；第五步，将抗体(一抗)与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，然后抗体(一抗)会与目的基因表达的蛋白(抗原)特异性结合。因为这种抗原抗体结合不出现条带，所以加入了一种叫做二抗的抗体，它可以和一抗结合，二抗有一个特殊的标记。如果目标基因表达蛋白质，结果为阳性。

❻ HPV有哪些检查方法

当代社会女性的身体疾病越来越严重，种类也越来越多，女人总是先想着怎么照顾好家人以及孩子，却很少给自己做一个健康检查的计划。有时候为了家庭为了孩子就是身体有一点不舒服也没有放在心上，毕竟去趟医院就是就是一大笔的开销。今天小编就为您简单的说明一下女性疾病重的一种hpv那么女性hpv有几种检。

每个人的身体机制都是不一样的，就连医生有时候也无法坚定的给出一个不变的答案，很多的时候我们不能一概而论。如今社会的科技在发展，我们高科技的产品越来越多，面对很多疾病也会游刃有余的。所以我们不必压力山大，给自己一点希望，世界会还你一个奇迹!

❼ 可居家自检的新冠病毒抗原检测来了，检测试剂的原理是什么

国务院应根据新冠状病毒疾病的检测结果，对新冠病毒组进行抗原检测。该计划明确规定，如果社区居民有自检需求，可以通过零售药店、网上销售平台等渠道购买抗原检测试剂进行自检。COVID-19有四种主要的结构蛋白：S蛋白（S蛋白）、核衣壳蛋白（核衣壳蛋白、N蛋白）、膜蛋白（膜蛋白、M蛋白）和包膜蛋白（包膜蛋白、E蛋白）。

核酸检测在具备核酸检测能力的情况下仍然是主流。发放抗原测试盒，让人们自己测试，这样他们可以更快地知道测试者是否具有传染性，并尽早隔离传染性最强的患者。抗原检测和核酸检测应该相辅相成。核酸和抗原是重要的检测方法，它们有自己最适用的场合。例如，当没有核酸检测能力，例如远离检测点，或在半夜有发烧或感冒症状时，可以使用更方便的抗原检测。

❽ 检测乙肝表面抗原的方法都有什么具体一点点

去医院化验。有专门的一项叫乙肝抗体
然后抗原抗体都查了
仅仅抗体阳性不能确诊乙肝
如果抗原抗体都阳的话才行

❾ 新冠抗原自测产品正式上市，谁能测怎么测准确率如何

新冠抗原自测产品已经通过我国药监局的审批成功上市，抗原自测产品将为我国新冠防控防控工作带来更大的便利。

一、抗原自测产品的适用人群

这三类人群可以采用抗原自测试剂：1、不具备核酸检测条件有自我检测需求的个体。2、属于居家隔离、密接隔离、入境隔离或者管控区域内的个体。3、连续几天内有发热、咳嗽等症状的个体。抗原自测可以根据个体内是否有病毒抗原确定个体是否有感染新冠，抗原自测一般十几分钟就可以有结果，因此对于以上三个群体进一步诊断有着提效的作用。

❿ 抗原检测与核酸检测有哪些区别这两款产品的准确率如何

核酸检测由于对设备及采集人员的要求较高，因此准确率比抗原检测更有效。但抗原检测有比核酸检测更快的初步检验结果，适用于多人群的大规模基础诊断。

由于核酸检测对于病毒的感染性以及结果都有较为准确地预判和估计，因此现在我国在许多人群的筛查上都会使用核酸检测作为评估结果。但随着防控局势的逐步严峻，抗原检测也可以作为一种补充的检测方法。虽然抗原检测的准确率不高，但在大规模人群的初步筛选上，有非常好的表现和作用。

一：核酸检测由于对设备以及采集人员的要求较高，因此检测结果更加有效。

由于核酸检测具有早期诊断、灵敏度和特异性高等突出特点，是目前确诊新冠肺炎的重要标准之一，核酸检测使用的是实时荧光定量RT-PCR技术。这种技术对于目前新冠病毒的初期发现和判断有很好的作用和帮助。但缺点是高灵敏度的RT-PCR仪价格不菲，对相关实验室的洁净度和操作人员要求也较高，且检测时间较长，一个检测通常会需要4-6个小时才有结果。