⑴ 如何提取淀粉酶。。。单一的淀粉酶就行了。。。及其检验的方法
你好，如果是马上需要使用的话建议从网上的生物公司直接购买淀粉酶成品。想自己制作的话建议采集自己的唾液，里面就有唾液淀粉酶。不要将唾液加温，以免酶失活。检验方法可用淀粉遇碘变色的原理，用分光光度计测定酶是否存在，若酶存在，加入淀粉与碘的混合溶液后，因淀粉被淀粉酶分解成糊精，蓝色将会有所消退。若需提取单一的纯淀粉酶，可以使用电泳法确定唾液淀粉酶蛋白质的分子质量，再用柱层析法将它层析出来。这是一个很麻烦的过程，需要大量的实验，如果只是为了达成消化淀粉的目的的话，不妨直接使用唾液。如果需要考虑温度和消化质量的话，买成品是比较省时间的选择。
如还有问题，欢迎追问
⑵ 淀粉酶比活力测定
谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定
几乎所有植物中都存在淀粉酶，尤其是萌发的禾谷类种子，淀粉酶活性最强。主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。种子萌发时，淀粉酶活性随萌发时间迅速增加，将淀粉分解成小分子糖类，供幼苗生长。α-淀粉酶随机水解淀粉的α-1，4-糖苷键，作为淀粉分解的起始酶而起主要作用；其水解产物为麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原性糖；β-淀粉酶水解非还原端的第二个α-1，4-糖苷键，水解产物为麦芽糖，并能使一部分糊精糖化。本实验以萌发种子为材料，测定其中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性的差异。
【原理】
两种淀粉酶具有不同理化特性，α-淀粉酶不耐酸，在PH3�6以下迅速钝化；β-淀粉酶不耐热，在70℃下15Min则被钝化。据此，在测定时钝化其中之一，就可以测定出另一种酶的活力，本实验采用加热钝化β-淀粉酶测出α-淀粉酶活力，再与非钝化条件下测得的总淀粉酶活力比较，求出β-淀粉酶活力。淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原性糖能与3，5-二硝基水杨酸试剂反应，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖(或葡萄糖)浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
【仪器与用具】
分光光度计；离心机；恒温水浴器；研钵；具塞刻度试管25Ml 13支，刻度吸管1ml、2ml、5Ml各1支；容量瓶50Ml 2支。
【试剂】
麦芽糖标准液(1Mg／Ml)：称取100Mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100Ml。
DNS试剂(3，5-二硝基水杨酸)：精确称取3，5-二硝基水杨酸1g，溶于20Ml 12Mol／L NAOH溶液中，加入50Ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100Ml。盖紧瓶塞，勿使CO2进入。若溶液混浊，可过滤后使用。
0�1Mol／L PH5�6的柠檬酸缓冲液：A液(0�1Mol／L柠檬酸)：称取分析纯柠檬酸21�01g，用蒸馏水溶解并定容至1L；B液（0�1Mol／L柠檬酸钠）：称取柠檬酸钠29�41g用蒸馏水溶解并定容至1L；取A液55Ml与B液145Ml混匀，即为0�1Mol／L PH5�6的柠檬酸缓冲液。
1％淀粉溶液：称取1g淀粉溶于100Ml 0�1Mol／L PH5�6的柠檬酸缓冲液中。
【方法】
1.酶液提取称取25℃下萌发3～4天的小麦种子1�0g(芽长1�0～1�5CM)，置研钵中，加少量石英砂和2Ml蒸馏水，研磨成匀浆后转入离心管中，用7Ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管，提取液在室温下放置提取15～20Min，每隔数分钟搅动1次，使其充分提取。然后在3000r／Min转速下离心10Min，将上清液倒入50Ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液5Ml，放入50Ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度摇匀，即为淀粉酶稀释液。
2�麦芽糖标准曲线制作取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表18-1加入试剂：
表18-1制作麦芽糖标准曲线配方表
试剂管号1234567麦芽糖标准液（ml)00.20.40.81.21.62.0蒸馏水（ml)2.01.81.61.20.80.40麦芽糖含量（mg)00.20.40.81.21.62.03,5-二硝基水杨酸（ml)2222222摇匀，置沸水浴中煮沸5Min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20Ml。以1号管作为空白调零点，在540nM波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
3�酶活力的测定取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表18-2进行操作。
表18-2酶活力的测定配方表
操作项目管号Ⅰ-1Ⅰ-2Ⅰ-3Ⅱ-1Ⅱ-2Ⅱ-3淀粉酶原液（ml)1.01.01.0000钝化β-淀粉酶置70℃水浴中15Min,取出后在流水中冷却淀粉酶稀释液（ml)000111DNS试剂（ml)2.0002.000预保温40℃恒温水浴中保温10Min1%淀粉溶液（ml)(40℃)1.01.01.01.01.01.0保温40℃恒温水浴中准确保温5MinDNS试剂（ml)02.02.002.02.0摇匀，置沸水浴中5Min，取出后冷却，加蒸馏水至20Ml，摇匀，在540nM波长下比色，记录测定结果。
4�结果计算 用Ⅰ-2、Ⅰ-3吸光度平均值与Ⅰ-1吸光度值之差，在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(Mg)，再按下式计算α-淀粉酶的活力(Aα)，淀粉酶活性以每克鲜重所含麦芽糖毫克数(Mg／g·Min)表示：
Aα＝CαVTFW×t×V1（18-1）
Ⅱ-2、Ⅱ-3吸光度平均值与Ⅱ-1吸光度值之差，在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(Mg)，按式18-1计算(α＋β)-淀粉酶的活性AT�
AT＝CT×VTFW×t×V1
式中A:淀粉酶活性，Aα为α-淀粉酶的活性，AT为淀粉酶总活性，主要是α、β-淀粉酶的活性；
Cα:α-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量(查标准曲线求值，以下同)；
CT:(α＋β)淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量；
V1:显色所用酶液体积(Ml)；
T:酶作用时间(Min)；
VT:样品稀释液总体积(α-淀粉酶为50Ml，α＋β淀粉酶为500Ml)；
FW:样品鲜重(g)。
【思考题】
1.萌发种子和干种子α-淀粉酶和β-淀粉酶活力有何差异�这种变化有何生物学意义�
2�实验中设置对照的意义何在�
3�α-淀粉酶和β-淀粉酶性质有何不同�作用特点有何不同
⑶ 测定酶活力需要控制哪些条件
最适测定条件与条件的优化
国际临床化学联合会（ifcc）和中华医学会检验分会均推荐选择在“最适条件”下测定酶活性浓度。所谓最适条件是指能满足酶促反应速度达到最大反应速度所需的条件。包括：①合适的底物和最适底物浓度；②理想的缓冲液种类和最适离子强度；③反应液的最适ph；④最适反应温度；⑤合适的辅因子、激活剂浓度；⑥若是酶偶联反应，还需要确定指示酶和辅助酶的用量；⑦合理的测定时间，包括延滞期尽量短暂，有足够的线性期；⑧合适的样品与反应试剂的比例；⑨足够的检测范围；⑩尽量去除各种抑制剂等。
1．底物浓度
除选择适合的底物外，在实际应用中更多考虑的是底物浓度。由于[s]与反应速度v成双曲线关系，在酶活性测定时，要求[s]达到一定水平以保证酶活性与酶量成正比。[s]范围一般选择在10～20km为宜，此时反应速度基本达到最大反应速度，测定的误差在可接受范围。
2．酶浓度
在反应条件一定时，酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说，只有[s]>>[e]时，酶才能被底物分子饱和，反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时，应将标本适当稀释后再加以测定。
3．温度
不同的酶最适温度可以不同，多数酶的最适温度在37～40℃，高于或低于最适温度，酶活性都降低。目前，酶活性的测定温度尚未统一，但常规实验室多使用37℃。温度对酶促反应的影响程度通常用温度系数(q10)表示。温度系数指温度每升高10℃，化学反应速度增加的倍数。q10通常为l～2。由温度系数得知，温度的变化对酶活性有着重要影响，因此要求酶活性测定要在恒温条件下进行，温度波动要控制在±1℃。
4．离子强度和ph值
在最适ph时，酶的活性最强，高于或低于最适ph，酶的活性都降低，多数酶的最适ph在5～8之间。在测定酶活性时，要求缓冲液具有足够的缓冲容量，以便使ph值保持稳定。血浆或血清标本含有多种缓冲溶质，具有较强的缓冲能力。为了防止血浆或血清标本缓冲溶质对反应液酸碱度的影响，使ph不致偏离设定值，标本用量不宜过大，血浆或血清标本体积／反应液体积≤1／10为宜。
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辅助因子
某些金属离子和维生素类辅酶是结合酶的辅助因子，例如zn2+是羧基肽酶的辅基，mo6+是黄嘌呤氧化酶的辅基，nadh是不需氧脱氢酶的辅酶。这些酶离开它们的辅基或辅酶就不能表现活性，因此在酶活性测定时，就要保证辅基或辅酶的供给。
6．激活剂
有些酶在有激活剂存在时才有活性或活性较高，例如mg2+是肌酸激酶的激活剂，cl-是淀粉酶的激活剂。因此在酶活性测定时，也要满足酶对激活剂的需要。
7．抑制剂
酶的抑制可分为不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制。重金属离子和砷化物对巯基酶的抑制、有机磷对羟基酶的抑制属于不可逆抑制；丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制、磺胺类药物对二氢叶酸合成酶的抑制属于竞争性抑制；哇巴因对na+，k+-atp酶的抑制属于非竞争性抑制。抑制剂使酶活性降低，在测定酶活性时，应避免抑制剂的影响。
综上所述，测定酶活性时，最适条件的选择应该遵循最适底物浓度、最适温度、最适ph值、满足辅助因子和激活剂、避免抑制剂的原则。
⑷ 淀粉酶的测定方法有哪些
植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解成麦芽糖。淀粉酶几乎存在于所有植物中，其中以禾谷类种子的淀粉酶活性最强。植物中有α–淀粉酶和β–淀粉酶，其活性因植物的生长发育时期不同而有所变化。通过本实验掌握淀粉酶的提取和测定方法。
原理：
α–淀粉酶和β–淀粉酶，各有其一定的特性，如β–淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α–淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下则发生钝化。通常提取液中同时有两种淀粉酶存在，测定时，可根据它们的特性分别加以处理，钝化其中之一，即可测出另一酶的活性。将提取液加热到70℃维持15 min以钝化β–淀粉酶，便可测定α–淀粉酶的活性。或者将提取液用pH3.6之醋酸在0℃加以处理，钝化α–淀粉酶，以求出β–淀粉酶的活性。
淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3，5–二硝基水杨酸试剂测定。由于麦芽糖能将后者还原生成3–氨基–5–硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比，故可求出麦芽糖的含量。以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
⑸ 淀粉酶活力测定还有哪些方法
淀粉酶可以催化淀粉分解成葡萄糖，所以首先建立已知浓度的葡萄糖标准曲线（葡糖浓度为横坐标、吸光度为纵坐标），然后令淀粉酶在一定条件下催化一定量淀粉反应，反应结束后检测反应完成液的吸光度（一般需染色剂染色），对比标准曲线即可换算出产物葡糖的量，然后可以计算出淀粉酶的活力
⑹ 影响酶促反应速度的因素有哪些 实验报告
pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率,紫外线、重金属盐、抑制剂都会降低酶的活性,使酶促反应的速度降低,激活剂会促进酶活性来加快反应速度,pH和温度的变化情况不同,既可以降低酶的活性,也可以提高,所以它们既可以加快酶促反应的速度,也可以减慢；酶的浓度、底物的浓度等不会影响酶活性,但可以影响酶促反应的速率.酶的浓度、底物的浓度越大,酶促反应的速度也快.
望采纳
⑺ 唾液淀粉酶活力的测定方法
实验原理：
唾液淀粉酶能催化水解淀粉，生成分子较小的糊精和麦芽糖。本实验利用碘的呈色反应来测定唾液淀粉酶水解淀粉作用的速度，从而测定唾液淀粉酶活力的大小。
实验仪器和试剂：
1.仪器(1)多孔白瓷板(2) 50mL三角瓶(3)恒温水浴锅(4)烧杯(5) 500mL容量瓶(6) 100mL容量瓶(7)漏斗(8)吸管
2.试剂（1) 原碘液:称取碘11g、碘化钾22g，加少量蒸馏水完全溶解后，定容至500mL，于棕色瓶中保存。（2)稀碘液:吸取原碘液2mL，加碘化钾20g，用蒸馏水溶解，定容至500mL，于棕色瓶保存。
(3) 标准“终点色”溶液
①准确称取氯化钴40.2439g、重铬酸钾0.4878g，加蒸馏水溶解并定容至500mL。
②准确称取铬黑T 40mg,加蒸馏水溶解并定容至100mL。取①液80mL与②液10mL混合，即为终点色。冰箱保存。
(4) 2%可溶性淀粉溶液:称取烘干可溶性淀粉2.00g,先以少许蒸馏水混匀,倾入80ml沸水中，继续煮沸至透明，冷却后用蒸馏水定容至100mL。(需新鲜配制)
(5)稀释100倍的唾液用蒸馏水漱口，以清除食物残渣,然后让唾液流入量筒并稀释100倍,混合备用。
(6) 0.02mol/L、 pH6.8磷酸氢= _钠-柠檬酸缓冲溶液:称取磷酸氢二钠45.23g和柠檬酸8.07g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL，配好后用酸度计或精密试纸校正pH。
操作步骤：
(1) 将“标准色”溶液滴于白瓷板的左.上角空穴内，作为比较终点色的标准。
(2)在50ml 的三角瓶中，加入2%可溶性淀粉溶液20mL，加缓冲液5mL在37°C水浴中平衡约10min,加入0. 5mL稀释唾液，立即记录时间，充分摇匀。定时用滴管取出反应液约0.25mL，滴于预先充满此稀碘液(约0.75mL)的调色板空穴内，当空穴颜色由紫色变为棕红色，与标准色相同时,即为反应终点，记录时间T (min) 。
⑻ α–淀粉酶制剂活力测定方法
（1） 在比色试管中，加入1ml标准糊精溶液和3ml标准稀碘液，混匀，作为比较颜色的标准管。
（2） 在25mm×250mm试管中，加入2%可溶性淀粉溶液20ml，pH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液5ml，在60℃水浴中平衡约5min，然后加入预先用缓冲液稀释好的酶液0.5ml，立即计时并充分混匀。定时取出1ml反应液加入预先盛有3ml比色稀碘液的试管中，然后每隔1min重复此操作，当试管中的颜色与标准管颜色相同时，即达到终点（比色时两试管面向直射光线，凭肉眼观察），记录反应总时间。此反应应在3min之内达到终点，如反应时间不在此范围内，应重新调节样品或酶的稀释度在做。
（3） 计算α–淀粉酶活力 以1ml酶液于60℃、Ph6.0的条件下，在1h液化可溶性淀粉的克数为1个酶活力单位。
酶活力单位（g/ml）=(60/T×20×2%×N)÷0.5
式中，60—酶活定义中反应时间为60min；
T—反应时间（min）；
20—可溶性淀粉的毫升数；
2%—可溶性淀粉浓度；
N—酶液稀释倍数；
0.5—测定时所用酶液量（ml）。
⑼ 淀粉酶活力的测定有几种方法
第一种：相同条件下，分别将等物质的量的酶加入适宜条件的淀粉中，然后用碘液测定
第二种：相同条件下，分别将等物质的量的酶加入适宜条件的淀粉中，然后用斐林试剂进行还原糖的测定