维生素a的检测方法

‘壹’ 如何知道自己是否缺乏维生素A

维生素A属于脂溶性维生素，是维持上皮组织细胞健全的一种维生素，缺乏的时候有可能会有皮肤干燥、粗糙，夜盲等。
检测是否有维生素A的缺乏可以血浆维生素A的检测。

‘贰’ 什么是维生素A检测呢

维生素A测定就是检测维生素A的含量。维生素A的化学名为视黄醇，是最早被发现的维生素。维生素A有两种。一种是维生素A醇，是最初的维生素A形态（只存在动物性食物中）；另一种是胡萝卜素，在体内转变为维生素A的预成物质（可从植物性及动物性食物中摄取）；维生素A的计量单位是USP单位、IU单位、RE单位等3种。

维生素A的测定方法：

1、原理：维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，产生蓝色物质，其深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620nm波长处测定其吸光度。

2、仪器实验室常用设备分光光度计回流冷凝装置。

3、试剂本实验所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水。

（1） 无水硫酸钠 Na2SO4；

（2） 乙酸酐；

（3） 乙醚 不含有过氧化物；

（4） 无水乙醇 不含有醛类物质；

（5） 三氯甲烷应不含分解物，否则会破坏维生素A，检查方法：三氯甲烷不稳定，放置后易受空气中氧的作用生成氯化氢和光气。检查时可取少量三氯甲烷置试管中加水振摇，使氯化氢溶到水层。加入几滴硝酸银溶液，如有白色沉淀即说明三氯甲烷中有分解产物；

（6） 25%三氯化锑-三氯甲烷溶液 用三氯甲烷配制25%三氯化锑溶液，储于棕色瓶中（注意避免吸收水分）；

（7） 50%氢氧化钾溶液（KOH） W/V；

（8） 维生素A标准液 视黄醇（纯度85% Sigma）用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1ml相当于1mg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度；

（9） 酚酞指示剂 用95%乙醇配制1%溶液。

‘叁’ 维生素A含量测定的方法有哪些

维生素A为用1g含270万单位以上的维生素A醋酸酯结晶加精致植物油制成的油溶液。维生素A胶丸为取维生素A，加精炼食用植物油（在0℃左右脱去固体脂肪）溶解并调整浓度后制成。2005版《中国药典》二部附录（VII J）收载了其含量测定方法。
文献报道的方法：
马莉等用RP-HPLC法测定维生素A的含量。仪器：岛津LC-10AT。色谱柱：Huupersil ODS（150mm×4.6mm）；流动相为96%甲醇；流速：1.0ml/min；检测波长：325nm；柱温：25℃。
黄双路等用盐酸溶解维生素A 胶丸的胶壳后，以环己烷萃取内容物，采用紫外分光光度法测定含量，最大吸收峰波长在326～329nm之间。
李枝端等用三点校正法测定维生素A的含量。维生素A醋酸酯测定波长：λ1=316nm，λ2=328nm，λ3=340nm；维生素A醇测定波长：λ1=310nm，λ2=325nm，λ3=334nm。

‘肆’ 用紫外分光光度法测定维生素A含量时，为什么采用三点校正法

因为含维生素a原料中常常混有许多杂质，包括异构体，氧化降解产物，合成中间体，副产物等有关物质，且含有稀释用油，这些杂质在紫外区也有吸收，导致在维生素a最大吸收波长处测得的吸光度并不是维生素a独有的吸收，为了消除其他物质引起的误差，所以采用三点校正法。
三点波长的选择原则：一点选在维生素a的最大吸收波长处，其他的两点各在这一波长两侧选一点。这两点有两种选择方法，第一种是等波长差法，即最大吸收波长为328nm，左侧一点为316nm，右侧一点为340nm.这是10版药典规定测定维生素a醋酸酯的方法。第二种方法是等吸收比法，即左右两波长处的吸光度相等等于最大吸收波长处吸光度的七分之六。10版药典规定测定维生素a醇时用此方法。

‘伍’ 为何不直接以紫外可见分光光度法测定维生素A的含量,而要采用较为繁琐的三点校正法

其实很简单因为紫外线会破坏维生素啊，测出来的当然不准，求采纳

‘陆’ 去医院怎么查各种维生素

去医院就诊想检查是否缺乏维生素，通常通过抽血化验的方法来检查，抽血化验可以检测维生素B12、维生素C、维生素D等维生素是否缺乏。另外还能够检测微量元素是否缺乏，包括铁离子、钾离子、钠离子、锌离子等都是可以通过抽血化验来进行检测的。如果化验结果提示缺乏维生素的话可以给予相应的补充，以避免由于维生素的缺乏而导致一些疾病，例如缺乏维生素A而出现的夜盲症或者缺乏维生素D导致的佝偻病等。通常来说，一般只要是饮食正常的人，吸收消化功能正常的话，通常不需要额外的补充维生素。

‘柒’ 维生素a测定是检测什么

维生素A测定就是检测维生素A的含量。维生素A的化学名为视黄醇，是最早被发现的维生素。维生素A有两种。一种是维生素A醇，是最初的维生素A形态（只存在动物性食物中）；另一种是胡萝卜素，在体内转变为维生素A的预成物质（可从植物性及动物性食物中摄取）；维生素A的计量单位是USP单位、IU单位、RE单位等3种。

常见的检测维生素A的方法主要有比色法、紫外分光光度法、近红外光谱法和高效液相色谱法。

比色法测定维生素A的原理是基于维生素A能和各种酸反应，生成蓝紫色到桃红色的有色化合物，其中维生素A与三氯化锑-三氯甲烷溶液（或三氟醋酸-三氯甲烷溶液）生成的蓝色化合物在620nm波长处有特征吸收，是应用较早的一种灵敏的方法。

随着紫外分光光度法和高效液相色谱法等的发展，该方法已很少用于定量检测，仅用于定性检测。紫外分光光度法的原理是根据维生素A在325或328nm波长处有最大吸收而进行定量检测的。

近红外光谱法则基于维生素A在1721和1872nm波长处有两个较稳定的特征吸收峰。

高效液相色谱法通常是基于维生素A在紫外区的特征吸收以及维生素A的天然荧光特性。

(7)维生素a的检测方法扩展阅读

维生素A主要用于防治夜盲症、干眼病，也用于烧伤后皮肤的局部化脓性感染。人体摄取的维生素A成人不能超过3mg/天，儿童不能超过2mg/天。

若服用大剂量维生素A，因为排出比不高而会发生急性维生素A过多症，主要症状为短期脑积水与呕吐，部分可有头痛、嗜睡与恶心等症状。幼儿长期服用大剂量维生素A后，会发生维生素A过多症状，主要是肝脾肿大、红细胞和白细胞均减少、骨髓生长过速以及长骨变脆，易发生骨折等。

瑞典一项最新研究表明，血液中含有高浓度维生素A的中年男性在他们老年时期发生骨折的概率要比那些血液中维生素A含量低的人群高得多。因此，对人体而言，维生素A不可或缺，也不可滥用，只要保证饮食含有丰富的维生素A或胡萝卜素的食物，即可有效地预防维生素A缺乏，而无须额外服用维生素A补充剂。

‘捌’ 维生素A和维生素E的化学检验方法

第一篇高效液相色谱法
2原理
样品中的维生素A及维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18反相柱将维生素A和维生素E分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。最小检出量分别为VA：0.8ng；α－E：91.8ng；γ－E：36.6ng；δ－E：20.6ng。
3试剂
实验用水为蒸馏水。试剂不加说明为分析纯。
3.1无水乙醚：不含有过氧化物。
3.1.1过氧化物检查方法：用5mL乙醚加1mL 10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。
3.1.2去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入纯铁丝或铁末少许。弃去10%初馏液和10%残馏液。
3.2无水乙醇：不得含有醛类物质。
3.2.1检查方法：取2mL银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇匀，再加入10%氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。
3.2.2脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天(不时摇动，促进反应)，经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50mL。当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。
3.3无水硫酸钠。
3.4甲醇：重蒸后使用。
3.5重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。
3.610%抗坏血酸溶液(m/V)：临用前配制。
3.71∶1氢氧化钾溶液。
3.810%氢氧化钠溶液(m/V)。
3.95%硝酸银溶液(m/V)。
3.10银氨溶液：加氨水至5%硝酸银溶液中，直至生成的沉淀重新溶解为止，再加10%氢氧化钠溶液数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。
3.11维生素A标准液：视黄醇(纯度85%)或视黄醇乙酸酯(纯度90%)经皂化处理后使用。用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1mL相当于1mg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。
3.12维生素E标准液：α－生育酚(纯度95%)，γ－生育酚(纯度95%)，δ－生育酚(纯度95%)。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1mL相当于1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素E的准确浓度。
3.13内标溶液：称取苯并〔e〕芘(纯度98%)，用脱醛乙醇配制成每1mL相当于10μg苯并〔e〕芘的内标溶液。
3.14pH1～14试纸。
4仪器和设备
4.1实验室常用设备。
4.2高压液相色谱仪带紫外分光检测器。
4.3旋转蒸发器。
4.4高速离心机
4.4.1小离心管：具塑料盖1.5～3.0mL塑料离心管(与高速离心机配套)。
4.5高纯氮气。
4.6恒温水浴锅。
4.7紫外分光光度计。
5操作步骤
5.1样品处理
5.1.1皂化
称取1～10g样品(含维生素A约3μg，维生素E各异构体约为40μg)于皂化瓶中，加30mL无水乙醇，进行搅拌，直到颗粒物分散均匀为止。加5mL 10%抗坏血酸，苯并〔e〕芘标准液2.00mL，混匀。加10mL1：1氢氧化钾，混匀。于沸水浴上回流30min使皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。
5.1.2提取
5.1.2.1将皂化后的样品移入分液漏斗中，用50mL水分2～3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用约100mL乙醚分两次洗皂化瓶及其残渣，乙醚液并入分液漏斗中。如有残渣，可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤入分液漏斗。轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。
5.1.3洗涤
5.1.3.1用约50mL水洗分液漏斗中的乙醚层，用pH试纸检验直至水层不显碱性(最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加)。
5.1.4浓缩
5.1.4.1将乙醚提取液经过无水硫酸钠(约5g)滤入与旋转蒸发器配套的250～300mL球形蒸发瓶内，用约10mL乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次，并入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器上，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中剩下约2mL乙醚时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹掉乙醚。立即加入2.00mL乙醇，充分混合，溶解提取物。
5.1.5将乙醇液移入一小塑料离心管中(4.4.1)，离心5min(5000rpm)。上清液供色谱分析。如果样品中维生素含量过少，可用氮气将乙醇液吹干后，再用乙醇重新定容。并记下体积比。
5.2标准曲线的制备
5.2.1维生素A和维生素E标准浓度的标定方法
取维生素A和各维生素E标准液若干微升，分别稀释至3.00mL乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算出该维生素的浓度。测定条件如下表所示。
表1
标 准 加入标准的量
s，μl 比吸光系数
波 长
λ，nm
视 黄 醇
γ－生育酚
δ－生育酚
α－生育酚 10.00
100.0
100.0
100.0 1835
71
92.8
91.2 325
294
298
298

浓度计算：


5.2.2标准曲线的制备
本方法采用内标法定量。把一定量的维生素A、γ－生育酚、α－生育酚、δ－生育酚及内标苯并〔e〕芘液混合均匀。选择合适灵敏度，使上述物质的各峰高约为满量程70%，为高浓度点。高浓度的1/2为低浓度点(其内标苯并〔e〕芘的浓度值不变)，用此二种浓度的混合标准进行色谱分析，结果见色谱图。维生素标准曲线绘制是以维生素峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标，维生素浓度为横坐标绘制，或计算直线回归方程。如有微处理机装置，则按仪器说明用二点内标法进行定量。
本方法不能将β－E和γ－E分开，故γ－E峰中包含有β－E峰。
5.3高效液相色谱分析
5.3.1色谱条件(推荐条件)
5.3.1.1预柱：ultrasphere ODS 10μm，4mm×4.5cm。
5.3.1.2分析柱：ultrasphere ODS 5μm，4.6mm×25cm。
5.3.1.3流动相：甲醇∶水＝98∶2。混匀。于临用前脱气。
5.3.1.4紫外检测器波长：300nm。量程0.02。
5.3.1.5进样量：20μL。
5.3.1.6流速：1.7mL/min。
5.4样品分析
取样品浓缩液20μL，待绘制出色谱图及色谱参数后，再进行定性和定量。
5.4.1定性：用标准物色谱峰的保留时间定性。
5.4.2定量：根据色谱图求出某种维生素峰面积与内标物峰面积的比值，以此值在标准曲线上查到其含量。或用回归方程求出其含量。
6计算


式中：X2——某种维生素的含量，mg/100g；
C——由标准曲线上查到某种维生素含量，μg/mL；
V——样品浓缩定容体积，mL；
m——样品质量， g。
用微处理机二点内标法进行计算时，按其计算公式计算或由微机直接给出结果。
7结果的允许差
同一实验室，同时测定或重复测定结果相对偏差绝对值≤10%。
第二篇比色法
8原理
维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，产生蓝色物质，其深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620nm波长处测定其吸光度。
9试剂
本实验用水均为蒸馏水。
9.1无水硫酸钠：同3.3。
9.2乙酸酐。
9.3乙醚：同3.1。
9.4无水乙醇：同3.2。
9.5三氯甲烷：应不含分解物，否则会破坏维生素A。
9.5.1检查方法
三氯甲烷不稳定，放置后易受空气中氧的作用生成氯化氢和光气。检查时可取少量三氯甲烷置试管中加水少许摇振，使氯化氢溶到水层。加入几滴硝酸银液，如有白色沉淀即说明三氯甲烷中有分解产物。
9.5.2处理方法
试剂应先测验是否含有分解产物，如有，则应于分液漏斗中加水洗数次，加无水硫酸钠或氯化钙使之脱水，然后蒸馏。
9.625%三氯化锑－三氯甲烷溶液：用三氯甲烷配制25%三氯化锑溶液，储于棕色瓶中(注意勿使吸收水分)。
9.71∶1氢氧化钾溶液。
9.8维生素A或视黄醇乙酸酯标准液：同3.11。其标定方法同5.2.1。
9.9酚酞指示剂：用95%乙醇配制1%溶液。
10仪器和设备
10.1实验室常用设备。
10.2分光光度计。
10.3回流冷凝装置。
11操作步骤
维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或用棕色玻璃仪器。
11.1样品处理：根据样品性质，可采用皂化法或研磨法。
11.1.1皂化法：适用于维生素A含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全部试验过程费时，且易导致维生素A损失。
11.1.1.1皂化：根据样品中维生素A含量的不同，称取0.5～5g样品于三角瓶中，加入10mL 1∶1氢氧化钾及20～40mL乙醇，于电热板上回流30min至皂化完全为止。
11.1.1.2提取：将皂化瓶内混合物移至分液漏斗中，以30mL水洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗。如有渣子，可用脱脂棉漏斗滤入分液漏斗内。用50mL乙醚分二次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。振摇并注意放气，静置分层后，水层放入第二个分液漏斗内。皂化瓶再用约30mL乙醚分二次冲洗，洗液倾入第二个分液漏斗中。振摇后，静置分层，水层放入三角瓶中，醚层与第一个分液漏斗合并。重复至水液中无维生素A为止。
11.1.1.3洗涤：用约30mL水加入第一个分液漏斗中，轻轻振摇，静置片刻后，放去水层。加15～20mL 0.5mol/L氢氧化钾液于分液漏斗中，轻轻振摇后，弃去下层碱液，除去醚溶性酸皂。继续用水洗涤，每次用水约30mL，直至洗涤液与酚酞指示剂呈无色为止(大约3次)。醚层液静置10～20min，小心放出析出的水。
11.1.1.4浓缩：将醚层液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约25mL乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠两次，洗液并入三角瓶内。置水浴上蒸馏，收回乙醚。待瓶中剩约5mL乙醚时取下，用减压抽气法至于，立即加入一定量的三氯甲烷使溶液中维生素A含量在适宜浓度范围内。
11.1.2研磨法：适用于每克样品维生素A含量大于5～10μg样品的测定，如肝的分析。步骤简单，省时，结果准确。
11.1.2.1研磨：精确称2～5g样品，放入盛有3～5倍样品重量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。
11.1.2.2提取：小心她将全部均质化样品移入带盖的三角瓶内，准确加入50～100mL乙醚。紧压盖子，用力振摇2min，使样品中维生素A溶于乙醚中。使其自行澄清(大约需1～2h)，或离心澄清(因乙醚易挥发，气温高时应在冷水浴中操作。装乙醚的试剂瓶也应事先放入冷水浴中)。
11.1.2.3浓缩：取澄清提取乙醚液2～5mL，放入比色管中，在70～80℃水浴上抽气蒸干。立即加入1mL三氯甲烷溶解残渣。
12测定步骤
12.1标准曲线的制备
准确取一定量的维生素A标准液于4～5个容量瓶中，以三氯甲烷配制标准系列。再取相同数量比色管顺次取1mL三氯甲烷和标准系列使用液1mL，各管加入乙酸酐1滴，制成标准比色列。于620nm波长处，以三氯甲烷调节吸光度至零点，将其标准比色列按顺序移入光路前，迅速加入9mL三氯化锑－三氯甲烷溶液。于6s内测定吸光度，将吸光度为纵坐标，以维生素A含量为横坐标绘制标准曲线图。
12.2样品测定
于一比色管中加入10mL三氯甲烷，加入1滴乙酸酐为空白液。另一比色管中加入1mL三氯甲烷，其余比色管中分别加入1mL样品溶液及1滴乙酸酐。其余步骤同标准曲线的制备。
13计算


式中：X——样品中含维生素A的量，mg/100g(如按国际单位，每1国际单位＝0.3μg维生素A)；
c——由标准曲线上查得样品中含维生素A的含量，μg/mL；
m——样品质量，g；
V——提取后加三氯甲烷定量之体积，mL；
100——以每百克样品计。

‘玖’ 人体维生素怎样检测

人体缺少维生素会有以下几个症状，要是有这几个症状就说明缺少维生素。

1、皮肤粗糙

体内缺乏维生素会令皮肤粗糙,甚至还会长痘痘。此时,应该保持规律、均衡的饮食生活习惯,并及时补充维生素B、C、E等。比如多吃瘦肉、鱼、鸡蛋、牛奶等食物。当体内有足够的维生素后可使毛细血管畅通,并不断供给皮肤所需要的营养,以促进健康和柔嫩肌肤的成长。

2、口腔溃疡

口腔溃疡属于常见口腔疾病,常与人体中缺乏维生素有密切关系。这类维生素主要是维生素B群,其中重要的是维生素B2,维生素C,应及时补充。如果长时间不能痊愈,日常生活中需要注意饮食的调理。尽量保持清淡饮食,多吃些容易消化的食物,不可以吃辛辣刺激、生冷的食物,多吃新鲜的蔬菜水果。

3、掉发脱发严重

掉发、脱发严重也是体内维生素缺乏的表现。经常掉发脱发的人,可能是由于体内缺乏维生素B7造成的。维生素B7是一种维持人体自然生长、发育和正常人体机能健康必要的营养素。在缺乏后,容易引起神经功能失调,会使人头皮屑增多,出现掉发、少年白发等症状。

4、记忆力减退

记忆力逐渐减退并不是只有年龄增大这一条原因,如果营养不足、维生素缺乏也会影响到我们的记忆力。通常,可以对抗大脑老化,提高记忆力的维生素主要包括维生素B1、B6、B12和叶酸等。

此外,补充抗氧化维生素也可以帮助大脑对抗衰老,维生素C、维生素E和β-胡萝卜素可以消除大脑产生的自由基,避免大脑功能受损,尤其是维生素E格外重要,具有保护脑神经细胞、预防老年痴呆症的功能,是大脑的保护剂。

(9)维生素a的检测方法扩展阅读：

还有长皮疹，掉头发。如果脸上长鳞屑红斑性皮疹，头发掉得也异常多，说明人体可能缺乏维生素B7，这是一种水溶性维生素，容易流失，需要人体每日从饮食中摄取，如果有吃生鸡蛋习惯，更会雪上加霜，因为生鸡蛋的蛋白质会抑制人体吸收维生素B7。

肌肉抽筋。如果平时经常自觉腿部肌肉抽筋，这表明可能缺乏钾、钙、镁等矿物质。若同时是运动爱好者，大运动量会通过出汗令人体流失更多这些矿物质，从而加重症状。

参考资料来源：人民网-出现这些征兆,说明身体内缺乏维生素