胰岛素原检测方法

A. 请问关于胰岛素抵抗的检测,胰岛素和C肽检查

您好,您的问题非常的专业。我来尝试下解答您的问题。
首先您要知道胰岛素和C肽,它们是胰岛β细胞的分泌产物,而这两者都有共同的前体就是胰岛素原,一个分子胰岛素原经酶的作用最后裂解成三段,就是一个分子胰岛素(A.B链)和一个C肽(即C链)。胰岛素分泌后会被利用,而C肽不被肝脏破坏且半衰期长,所以临床上可以利用监测C肽水平来反映胰岛β细胞的功能情况,说到这里,您应该清楚胰岛素和C肽了。
再来看您的监测结果:餐前和餐后2小时您的胰岛素水平分别是52.16uU/ML和73.26uU/ML,C肽分别是1.96ug/ML和4.27ng/ml,根据C肽的情况来反映胰岛β细胞分泌情况,C肽水平增加到2.2倍,而胰岛素水平增加到1.4倍。再参照胰岛素正常值,无论您是在餐前还是餐后2小时都高于正常值。
到这里,分析了胰岛素和C肽,也分析了您的监测结果,我们来看您的问题。
从结果来看为什么会有胰岛素抵抗?
显而易见,您的胰岛素水平无论餐前餐后都高于正常值,也就是说在正常值范围内已经不能满足您的降糖效果了,您的胰岛β细胞必须分泌高量得胰岛素,就是您的机体对正常浓度胰岛素敏感度降低了,必须维持在一个高水平状态,这从您C肽2.2倍可以看出,餐后更加,所以说,您有胰岛素抵抗。这也是为什么糖尿病患者胰岛素结果比正常参考值高的原因。从另外一个角度可以看到,不使用外源性胰岛素,机体的胰岛β细胞长期超负荷工作会最终导致功能丧失。
建议:看到您有糖尿病史并且有过冠心病史,强烈建议您严格控制血糖,高血糖会给您心血管系统带来不可逆损伤。
希望的我的解答能帮助到您,谢谢!
若还有糖尿病及相关问题,欢迎能跟您做共同探讨和分享。

B. 利用重组基因的原理简述人源胰岛素的基本生产步骤

生物制法 首先剪切胰岛素基因 再创造大肠杆菌裂殖的有利环境 对大肠杆菌进行大规模培养 使之产生的治疗糖尿病的药物—胰岛素
基因制法 在基因工程人胰岛素的生产过程中 一般是先表达胰岛素原 然后对胰岛素原复性 复性后的胰岛素原通过酶切得到有活性的胰岛素 其中胰岛素原的复性效率是决定最终收率的关键因素 正确折叠与错误折益胰岛素原的分子量完全相同 结构非常相似 采用RT-HPLC可对其进行分离检定Sergeev等利用反相色谱建立了复性液中胰岛素原的检测方法 如果要对正确折叠与错误折盛胰岛素原的结构进一步说明 可将其用蛋白酶V8酶解 然后 用RR-HPLC-MS作肤图谱 Damn等用Saureus proteaseV8酶解胰岛素原 然后用R'FHPLC做肚谱图 并结合质谱法对重组胰岛素原的折受过程进行了监测

C. 如何利用大肠杆菌生产胰岛素 从基因工程角度说一下吧

生物制法：首先剪切胰岛素基因，再将胰岛素基因转入人的大肠杆菌内，再创造大肠杆菌裂殖的有利环境，对大肠杆菌进行大规模培养，使之产生大量的治疗糖尿病的药物——胰岛素。
基因制法: 在基因工程人胰岛素的生产过程中,一般是先表达胰岛素原,然后对胰岛素原复性,复性后的胰岛素原通过酶切得到有活性的胰岛素.其中胰岛素原的复性效率是决定最终收率的关键因素,正确折叠与错误折益胰岛素原的分子量完全相同,结构非常相似,采用RT-HPLC可对其进行分离检定.Sergeev等利用反相色谱建立了复性液中胰岛素原的检测方法.如果要对正确折叠与错误折盛胰岛素原的结构进一步说明,可将其用蛋白酶V8酶解,然后用RP-HPLC-MS作肤图谱.Damn等用S.aureus protease V8酶解胰岛素原,然后用R'FHPLC做肚谱图,并结合质谱法对重组胰岛素原的折受过程进行了监测.

D. 利用基因工程原理和大肠杆菌大量生产人类胰岛素的过程及原理

生物制法：首先剪切胰岛素基因，再将胰岛素基因转入人的大肠杆菌内，再创造大肠杆菌裂殖的有利环境，对大肠杆菌进行大规模培养，使之产生大量的治疗糖尿病的药物——胰岛素。
基因制法:
在基因工程人胰岛素的生产过程中,一般是先表达胰岛素原,然后对胰岛素原复性,复性后的胰岛素原通过酶切得到有活性的胰岛素.其中胰岛素原的复性效率是决定最终收率的关键因素,正确折叠与错误折益胰岛素原的分子量完全相同,结构非常相似,采用RT-HPLC可对其进行分离检定.Sergeev等利用反相色谱建立了复性液中胰岛素原的检测方法.如果要对正确折叠与错误折盛胰岛素原的结构进一步说明,可将其用蛋白酶V8酶解,然后用RP-HPLC-MS作肤图谱.Damn等用S.aureus
protease
V8酶解胰岛素原,然后用R'FHPLC做肚谱图,并结合质谱法对重组胰岛素原的折受过程进行了监测.我们的书上就是这么说的

E. 胰岛功能测定是包括什么参考值是多少

胰岛素功能检测包括：

1. C-肽;糖化血红蛋白;血红蛋白A1C;

2. 血清糖化蛋白（GSP）;

3. 胰岛素;胰岛素原;胰高血糖素等。

胰岛素功能检测参考值：

1. C-肽; 正常值 成人≤4.0μg/L 男1.5～5.0μg/L 女1.4～5.5μg/L。

2. 糖化血红蛋白;血红蛋白A1C正常值

   电泳法 占Hb总量的0.056～0.075 柱层析法 占Hb总量的0.06～0.09

   高压液相色谱法 HbA1a 0.016 HbA1b 0.008 HbA1c 0.03～0.06。

3. 血清糖化蛋白（GSP）; 正常值 果糖胺法 [2.5mmol/L。

4. 胰岛素; 6～24mIU/L。

5. 胰岛素原; 正常值 [0.2μg/L 或[0.3IRI。

6. 胰高血糖素 正常值 30～210ng/L。

胰岛功能检测解释：

胰岛素功能检查包括胰岛素、C肽、血糖测定。胰腺组织是人体内的重要内分泌器官，其分泌的胰岛素能促进肝脏、肌肉和脂肪等组织摄取和利用葡萄糖，是体内唯一降低血糖的激素。C肽是胰岛素时段下的肽段，不被肝脏蛋白酶所破坏，因此在检测胰岛素的同时测定血中的C肽含量，可以更真实地反映胰岛的分泌功能。血糖测定则是间接地反映胰岛素功能。

胰岛功能检查的作用：

是看看你的胰岛分泌胰岛素的功能怎么样，是不是受损了，是检查早期糖尿病的常用方法。胰岛功能检查应该是在早晨空腹的情况下,进食75g葡萄糖或100g面粉的馒头前后分别于空腹,餐后1小时,2小时,3小时抽静脉血测定四个时间点的血糖,胰岛素释放,C-肽值.胰岛功能检查有几项，包括胰岛素释放试验、C肽释放试验。做法：糖尿病人选用馒头餐或者口服75g葡萄糖，取血同时进行葡萄糖和胰岛素、C肽等的测定。作用是测定胰岛素的含量是绝对还是相对不足，确定糖尿病的情况，决定用药。

胰岛功能检查步骤：

(1)试验应在上午7～11时之间进行。早8：30以前到医院、并顺便携带当天早晨第一次小便10ml送检。

(2)空腹坐位抽血后5分钟内饮入250ml含75g葡萄糖的糖水;对于部分糖尿病人，为减少对B细胞的强烈刺激，可以进食2两左右的(约100克)馒头代替葡萄糖;妊娠期妇女葡萄糖的用量为100g;儿童按1.75g/kg体重计算，但总量不超过75g。

(3)进食后0.5小时、1小时、2小时、3小时分别抽血检测血糖。常规口服葡萄糖耐量试验的同时，平行测定血样中的胰岛素浓度。根据5次血中葡萄糖水平(空腹时坐标点为0)绘制糖耐量曲线，同时根据5次血浆胰岛素水平绘制出胰岛功能曲线。

患糖尿病时，无论空腹血浆胰岛素水平，还是胰岛素释放试验分泌曲线均较常人有明显不同，1型糖尿病患者胰岛素分泌减少，空腹血浆胰岛素水平明显低于正常，其基值一般在5mu/L以下，服糖刺激后其胰岛素释放也不能随血糖升高而上升，常呈现无高峰的低平曲线，有些病人甚至不能测出。2型糖尿病患者空腹血浆胰岛素水平可正常，或稍低于正常，但往往会出现高峰时间延迟，如在服糖后2小时或3小时出现，呈分泌延迟高峰后移。其中尤其是肥胖型的糖尿病病人，血浆胰岛素释放曲线明显高于正常，但低于同体重的非糖尿病病人的释放曲线。进食后胰岛素分泌高峰后延(2～3小时)是2型糖尿病的特征。

不过胃切除术后或严重的肝病等，肠道迅速吸收葡萄糖，而肝脏不能相应快速摄取葡萄糖所致。以上两类病人不宜进行口服葡萄糖耐量试验，需采用静脉注射葡萄糖耐量试验。

F. 人胰岛素生产工艺

太深奥

G. 低血糖症的实验室检查有哪些

1. 空腹血浆胰岛素和血糖测定

非肥胖者空腹胰岛素水平高于24μU/ml 可认为是高胰岛素血症。

然而有时空腹胰岛素值即使正常，相对血糖值已增高。当空腹血糖低于2.8mmol/L，血浆胰岛素应降至10μU/ml 以下。血浆葡萄糖水平低于2.2mmol/L，胰岛素值将低于5μU/ml。胰岛素与血糖比值（I ∶ G）一般也降低。如I ∶ G 值增加或＞ 0.3 应怀疑有高胰岛素血症，I ∶ G＞ 0.4 提示胰岛素瘤可能。

2. 口服葡萄糖耐量试验（OGTT）

欲确定是否存在空腹低血糖，OGTT 没有意义。如糖耐量试验延长至4 ～ 5 小时，对于诊断餐后低血糖有一定价值。

3. 血浆胰岛素原和C 肽测定

正常血浆含有少量的胰岛素原，大部分胰岛素瘤患者血循环中胰岛素原水平增高。正常情况下，胰岛素原一般不超过免疫反应性胰岛素总量的22%，而85% 以上的胰岛素瘤患者的胰岛素原所占百分比超过25%。

用RIA 法测定的血浆胰岛素值称为免疫反应性胰岛素，这是因为胰岛素的多克隆抗体与胰岛素原等胰岛素类似物有交叉反应，再加上胰岛素的正常值较低，所以解释结果时要十分慎重。

C 肽测定可用于内源性和外源性高胰岛素血症的鉴别，C 肽和胰岛素是等摩尔质量分泌的，外源性高胰岛素血症时的血C 肽一般测不出来。C 肽水平高提示内源性高胰岛素血症。反之，低C 肽水平提示血浆胰岛素水平增高是外源性胰岛素所致。

4. 胰岛素抗体、胰岛素受体抗体测定

血浆中存在胰岛素抗体提示既往使用过胰岛素或自身免疫性胰岛素综合征。胰岛素的自身抗体依抗原的来源可分为内源性和外源性两种，依抗体的生物活性和作用效果有兴奋性与抑制性自身抗体之分。

长期接受胰岛素治疗的患者可产生抗胰岛素抗体，此与制剂中的胰岛素与人胰岛素结构不同和制剂不纯有关，但使用单峰的人胰岛素或重组的人胰岛素仍可产生胰岛素抗体。此类抗体是产生胰岛素不敏感的重要原因之一。

5. 血浆磺脲药物及其尿中代谢产物测定

测定血浆磺脲药物或其尿中代谢产物可协助确定磺脲药物诱发的高胰岛素血症的诊断，氯磺丙脲因半衰期长，诱发的低血糖危险性较大。

6. 胰岛素抑制试验

无症状性空腹低血糖或不稳定性或边缘性高胰岛素血症，可用抑制试验鉴别是否为内源性胰岛素分泌过多所致。

用外源性胰岛素不能完全抑制胰岛素瘤C 肽和胰岛素原的释放，然而也有报道指出，某些胰岛素瘤患者的C 肽抑制试验可正常。正常人在应用外源性胰岛素后，血浆C 肽抑制约66%，但胰岛素瘤患者在血糖正常时，血浆胰岛素和C 肽不被抑制，而在低血糖时，可抑制内源性胰岛素和C 肽的分泌。

7. 刺激试验

对于可疑空腹低血糖者刺激试验的敏感性较I ∶ G 比值、C 肽、胰岛素原测定等方法低。一般常用的刺激试验包括甲苯磺丁脲、精氨酸和胰高糖素刺激试验，80% 的胰岛素瘤患者甲苯磺丁脲试验异常，74% 有精氨酸试验异常，58% 有胰高糖素试验异常。注射钙剂后能刺激胰岛素瘤患者的胰岛素分泌，但也有报道指出，胰岛素瘤患者注射钙剂后胰岛素分泌并不增加。

8. 先天性代谢疾病伴低血糖症的诊断方法

诊断方法很多，可根据需要选用。确诊有赖于病理诊断和酶缺陷的基因分析。

（1）血糖指数：血糖指数是指碳水化合物使血糖升高的相对能力。

与血糖指数低的碳水化合物相比，较高血糖指数的碳水化合物可使血糖升高至较高水平，且较迅速。依血糖指数不同，一般可将碳水化合物分成数种类型。直链淀粉对血糖和血胰岛素所引起的反应慢而弱，而支链淀粉可使血糖、胰岛素及胰高糖素明显升高。

（2）果糖耐量试验：口服果糖200mg/kg 后，正常人的反应与OGTT 相似，而遗传性果糖不耐受症由于果糖-1- 磷酸醛缩酶缺陷出现低葡萄糖血症、低磷血症及果糖尿症。

（3）胰高糖素试验：仅作用于肝磷酸化酶，对肌磷酸化酶无影响。

正常人在空腹肌内注射1mg 胰高糖素后，血糖升高，高峰见于45 分钟左右，血胰岛素与血糖值一致。胰岛素瘤者血糖高峰可提前出现，但下降迅速，并出现低血糖反应，血胰岛素分泌高于正常人。糖原累积病（GSD）Ⅰ型者无血糖高峰或小的高峰见于1 小时后，血乳酸显着升高，血pH 和HCO3- 下降。此试验亦可用于其他低血糖症的鉴别诊断。

（4）肾上腺素试验：GSD Ⅰ型者于注射肾上腺素后血糖增值不超过30%。由于GSD 亦可能累及中性粒细胞的糖代谢，故使用肾上腺素后，血中性粒细胞升高不明显。但用于GSDLb 诊断的简便方法是用佛波醇（phoorbol-myristate-acetate）刺激NAPDH 氧化酶的活性，协助GSDLb 及中性粒细胞功能异常的诊断。

（5）缺血运动乳酸试验：将上臂缠以血压计袖带，加压至200mmHg，令患者作抓握活动，持续1 分钟，测定试验前后血乳酸值。

正常人试验后血乳酸升高3 倍以上，Ⅲ型、V 型GSD 者不增加，但不能排除其他原因所致的乳酸生成障碍性疾病（如肌肉磷酸果糖激酶缺陷等）。

（6）可乐定治疗试验：如怀疑为GSD，常用可乐定（clonidine，0.15mg/d，或每天0.2mg/m2 体表面积）治疗数月，GSD 者（如Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ型）可增加身高，其作用机制未明。因此药还对体质性矮小及其他原因所致生长迟滞有效，故可能与其作用于中枢，促进GH 分泌等作用有关。

（7）其他试验：血、尿及脑脊液氨基酸组分析有助于氨基酸代谢病的诊断。血酮、血糖、血氮和肌酸激酶是各种低血糖症的基本检测项目。如有可能应尽量做病变组织的酶活性测定以及异常糖原颗粒、代谢底物等测定。用分子生物学方法鉴定酶基因的突变可肯定酶缺陷的种类和位点。

（8）铬粒素A（chromogranin A，CgA）：神经内分泌肿瘤的标志物之一，约90% 的APUD 肿瘤患者血清CgA 升高。中肠来源的类癌患者，血中CgA 可升高数十至数百倍，发生肝转移后，血CgA 增高更明显（RIA 法测定的CgA 误差30% ～ 40%）。

（9）其他APUD 激素和代谢物测定：可根据临床表现测定相应的肽类或胺类激素，但因花费昂贵，一般难于普及。多数情况下，可测定尿5- 羟吲哚乙酸（5-HIAA）及胃液中胰岛素、胰岛素原和C 肽，必要时可测定胃泌素。如欲判肿瘤的生长潜能、判断预后，可测定Ki-67 蛋白和增生细胞核抗原（PCNA）。

H. 胰岛素测定的测定标准：

①空腹时正常值为5～15mU/L，胰岛素依赖型则低于正常的下限或测不出，非胰岛素依赖型在正常范围或高于正常人。②胰岛素释放试验：胰岛素依赖型无高峰出现，呈低平曲线；非胰岛素依赖型高峰较正常为低，或高峰延迟。胰岛素在胰岛B细胞中合成。胰岛素合成的控制基因在第11对染色体短臂上。基因正常则生成的胰岛素结构是正常的；若基因突变则生成的胰岛素结构是不正常的，为变异胰岛素。在B细胞的细胞核中，第11对染色体短臂上胰岛素基因区DNA向mRNA转录，mRNA从细胞核移向细胞浆的内质网，转译成氨基酸相连的长肽——前胰岛素原，前胰岛素原经过蛋白水解作用除其前肽，生成胰岛素原。胰岛素原随细胞浆中的微泡进入高尔基体，由86个氨基酸组成的长肽链——胰岛素原在高尔基体中经蛋白酶水解生成胰岛素及C肽，分泌到B细胞外，进入血液循环中。未经过蛋白酶水解的胰岛素原，一小部分随着胰岛素进入血液循环，胰岛素原的生物活性仅及胰岛素的5%。

I. 胰岛功能测定包括什么参考值是多少

胰岛素功能检测包括：

1. C-肽;糖化血红蛋白;血红蛋白A1C;

2. 血清糖化蛋白（GSP）;

3. 胰岛素;胰岛素原;胰高血糖素等。

胰岛素功能检测参考值：

①C-肽; 正常值 成人≤4.0μg/L 男1.5～5.0μg/L 女1.4～5.5μg/L。

②糖化血红蛋白;血红蛋白A1C正常值。

③电泳法 占Hb总量的0.056～0.075 柱层析法 占Hb总量的0.06～0.09。

④高压液相色谱法 HbA1a 0.016 HbA1b 0.008 HbA1c 0.03～0.06。

⑤血清糖化蛋白（GSP）; 正常值 果糖胺法 [2.5mmol/L。

⑥胰岛素; 6～24mIU/L。

⑦胰岛素原; 正常值 [0.2μg/L 或[0.3IRI。

⑧胰高血糖素 正常值 30～210ng/L。