检测膜电位的简单方法

❶ 怎样检测线粒体膜电位

质泵存于线粒体内膜基质内质泵入膜间隙质跨膜转运使线粒体膜间隙积累量质形质梯度：线粒体膜间隙产量电荷线粒体基质产量负电荷形跨线粒体内膜跨膜电位 (ΔΨ)简称线粒体膜电位线粒体膜电位维持线粒体进行氧化磷酸化、产ATP前提维持线粒体功能所必需凋亡程重要变化即线粒体膜电位崩溃 (Rostovtseva et al., 2005)

❷ western blot能检测线粒体膜电位变化吗

我专门搞过一段时间线粒体功能检测，主要有以下流式细胞术检测方法供你参考：
1 以NAO标记线粒体表面心肌磷脂含量，评价线粒体质量
2 以 JC－1检测线粒体膜电势
3 以DiOC6（3） /PI双染检测线粒体膜电势和死亡细胞
4 以Mitotracker Green FM标记线粒体质量

Rodamin123和其他Radamin衍生染料不推荐，原因是荧光焠灭过快，而且对线粒体特异性染色程度较差，质膜系统基本都染

❸ 线粒体跨膜电位的测定方法有哪些

线粒体膜间隙产生大量正电荷、产生ATP的前提，是维持线粒体功能所必需, 2005)，质子跨膜转运使得线粒体膜间隙积累大量质子.质子泵存在于线粒体内膜，而线粒体基质产生大量负电荷，形成质子梯度，可将基质内质子泵入膜间隙，简称为线粒体膜电位。正常线粒体膜电位是维持线粒体进行氧化磷酸化，而凋亡过程中一个重要的变化即是线粒体膜电位的崩溃 (Rostovtseva et al，从而形成跨线粒体内膜的跨膜电位 (ΔΨ)

❹ 静息电位的测定方法

插入膜内的是尖端直径<1μm的玻璃管微电极，管内充以KCl溶液，膜外为参考电极，两电极连接到电位仪测定极间电位差。静息电位都表现为膜内比膜外电位低，即膜内带负电而膜外带正电。

❺ 膜电位测量电极和参考电极怎么区分

氟离子选择电极的膜电位的产生是由于：氟离子进入晶体膜表面的晶格缺陷而形成双电层结构。相关知识：一、膜电位将一个玻璃薄膜置于H+ 浓度不同的两溶液间，由于玻璃膜的水化作用，膜内外便形成双电层而产生电位差，该电位差称为膜电位。二、电位分析法的定义、分类和特点1、定义：利用测得电极电位与被测物质离子浓度的关系求得被测物质含量的方法叫电位分析法。2、分类：a、直接电位法：利用专用的指示电极――离子选择性电极，选择性地把待测离子的活度（或浓度）转化为电极电位加以测量，根据Nernst方程式，求出待测离子的活度（或浓度），也称为离子选择电极法。这是二十世纪七十年代初才发展起来的一种应用广泛的快速分析方法。b、 电位滴定法：利用指示电极在滴定过程中电位的变化及化学计量点附近电位的突跃来确定滴定终点的滴定分析方法。电位滴定法与一般的滴定分析法的根本差别在于确定终点的方法不同。3、特点：应用范围广――可用于许多阴离子、阳离子、有机物离子的测定，尤其是一些其他方法较难测定的碱金属、碱土金属离子、一价阴离子及气体的测定。因为测定的是离子的活度，所以可以用于化学平衡、动力学、电化学理论的研究及热力学常数的测定。a、测定速度快，测定的离子浓度范围宽。b、可以制作成传感器，用于工业生产流程或环境监测的自动检测；可以微型化，做成微电极，用于微区、血液、活体、细胞等对象的分析。

❻ RP的测定静息电位的方法

插入膜内的是尖端直径<1μm的玻璃管微电极，管内充以KCl溶液，膜外为参考电极，两电极连接到电位仪测定极间电位差。静息电位都表现为膜内比膜外电位低，即膜内带负电而膜外带正电。这种内负外正的状态，称为极化状态。静息电位是一种稳定的直流电位，但各种细胞的数值不同。哺乳动物的神经细胞的静息电位为-70mV（即膜内比膜外电位低70mV），骨骼肌细胞为-90mV，人的红细胞为-10mV。
静息电位的产生与细胞膜内外离子的分布和运动有关。正常时细胞内的K+浓度和有机负离子A-浓度比膜外高，而细胞外的Na+浓度和Cl-浓度比膜内高。在这种情况下，K+和A-有向膜外扩散的趋势，而Na+和Cl-有向膜内扩散的趋势。但细胞膜在安静时，对K+的通透性较大，对Na+和Cl-的通透性很小，而对A-几乎不通透。因此，K+顺着浓度梯度经膜扩散到膜外使膜外具有较多的正电荷，有机负离子A-由于不能透过膜而留在膜内使膜内具有较多的负电荷。这就造成了膜外变正、膜内变负的极化状态。由K+扩散到膜外造成的外正内负的电位差，将成为阻止K+外移的力量，而随着K+外移的增加，阻止K+外移的电位差也增大。当促使K+外移的浓度差和阻止K+外移的电位差这两种力量达到平衡时，经膜的K+净通量为零，即K+外流和内流的量相等。此时，膜两侧的电位差就稳定于某一数值不变，此电位差称为K+的平衡电位，也就是静息电位。其具体数值可按Nernst公式计算。
计算所得的K+平衡电位值与实际测得的静息电位值很接近，提示静息电位主要是由K+向膜外扩散而造成的。如果人工改变细胞膜外K+的浓度，当浓度增高时测得的静息电位值减小，当浓度降低时测得的静息电位值增大，其变化与根据Nernst公式计算所得的预期值基本一致。但是，实际测得的静息电位值总是比计算所得的K+平衡电位值小，这是由于膜对Na+和Cl-也有很小的通透性，它们的经膜扩散（主要指Na+的内移），可以抵销一部分由K+外移造成的电位差数值。

❼ 如何使用JC-1检测线粒体膜电位

博凌科为生物科技-为你解答：线粒体膜电位的降低是凋亡的一个早期事件，5,5,6,6-tetrachloro-1,1,3,3- iodide (JC-1)可用于流式细胞术检测线粒体膜电位的变化。正常细胞的线粒体膜电位电压较高，可形成JC-1的聚集体，发出红色荧光，而线粒体膜电位降低的细胞，则会形成JC-1单体，发出绿色荧光。材料： 细胞悬液 完全细胞培养基 去极化药物：如0.1mM valinomycin或0.25mM carbonyl cyanide m-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP) in DMSO 1mg/ml JC-1储存液（溶于DMSO），分装成小包装，在－20℃可保存1年。 PBS 具有488nm激发光源的流式细胞仪，配备525－590nm带宽的滤镜。JC-1染色： 收集2105的细胞，用预温到37℃的新鲜完全培养基调整至1ml。制备阳性对照（以去极化药物处理过的细胞）。标本和阳性对照的染色步骤相同。 融化1管JC-1储存液，每1ml细胞悬液中通过边振荡边加的方式加入2.5L（终浓度：2.5ug/ml）。振荡细胞悬液直至标本形成均一的红紫色。 JC-1在水相容易形成聚集体，所以需要边振荡边加。未用完的JC-1不要再保存至－20℃。 37℃避光保存10分钟。 加入2ml PBS至细胞悬液中，500g室温离心5分钟，去上清。 以0.3ml PBS重悬细胞。上机取样，注意获取细胞的速度不要250至300细胞/秒。Fig1 HL-60 cells, (A) control and (B) depolarized (treated with 100 nM valinomycin), stained with 2.5 g/ml JC-1. Note the shift to the bottom and to the right by cells with depolarized mitochondria.Fig2 After incubation with 2.5 g/ml JC-1 at 37C, peripheral blood mononulear cells usually show a single population of monocytes, while here lymphocytes give rise to two separate peaks. This could indicate the presence of a functional heterogeneity within lymphocytes (A). Such a phenomenon, however, is not always present. Treating cells with valinomycin results in a loss of orange signal either from lymphocytes or from monocytes (B).

❽ jc-1检测线粒体膜电位时应注意什么

1）原理：JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm 的理想荧光探针。在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以产生橙色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体(monomer)，可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。

（2）材料与仪器
JC-1购自Sigma公司，分子量652.23，用DMSO溶解，储存浓度为5 mg/ml，终浓度稀释成10 µg/ml; 荧光显微镜，多功能荧光酶标仪

（3）步骤
① 接种细胞：96孔板，接种细胞数为每孔1.5万；或内置盖玻片的24孔板，每孔细胞数为9万。
② 处理：接种24小时后用有糖earle’s 液洗两遍, 给予相应处理（氧化应激或药物）。
③ JC-1孵育：用有糖earle’s 液洗1遍，并换上终浓度为10µg/ml JC-1培养箱孵育20 min.
④ 检测：用有糖earle’s 液洗2遍，盖玻片可在荧光显微镜下检测荧光变化，96孔板在多功能荧光酶标仪检测荧光值，检测JC-1单体时激发光设置为488nm，发射光设置为530nm；检测JC-1聚合物时，激发光设置为529nm，发射光设置为590nm

（4）注意点
稀释JC-1时要迅速，否则易聚集，不易溶解；建议用碧云天的JC-1线粒体膜电位检测试剂盒。

❾ 如何测量细胞膜电位需要什么仪器

膜片钳技术。不过这个东西很贵的……没有几百万弄不齐一套。
不过那东西一般是做测电流的。测电压……用电流钳比较好。
膜片钳技术是用微玻管电极(尖端直径约1 ～5μm)接触细胞膜而不刺入,然后在微电极另一端开口施加适当的负压,将与电极尖端接触的那一小片膜轻度吸人电极尖端的纤细开口,这样在这小片膜周边与微电极开口处的玻璃边沿之间,会形成紧密的封接( gigaohm seal) ,在理想的情况下其电阻可达数个或数十个千兆欧姆( l09Ω )以上的阻抗封接,使与电极尖开口处相连的细胞膜的小区域(膜片)与其周围的细胞膜在电学上完全分隔,如果在这一小片膜中只包含了一个或少数几个通道蛋白质分子,那么通过此微电极就可测出单一通道开放时的离子电流和电导,并能对单通道的其他功能特性进行分析。

❿ 流式细胞仪检测线粒体膜电位如何分析

一般是使用JC-1或者rhodamin123来测量的，前者是看红绿的比值，而后者是看绿色的强度。