检测是否表达蛋白质的方法

A. 鉴别蛋白质的方法有哪些

常见的蛋白质鉴定方法有：

一、最简单的方法就是对所要鉴定的物体进行灼烧

二、使用化学药剂进行化学反应来鉴定蛋白质

三、较为精准的方法是使用仪器进行蛋白质鉴定，如质谱仪等

在生物学研究中经常会遇到一些关于蛋白质鉴定的问题，如单一蛋白质或者简单混合物的鉴定；对单一蛋白质的序列分析等。这一类蛋白质鉴定，在精密度上要求较高，所以几乎都是采用质谱仪器，来对蛋白质进行精密鉴定。

质谱技术是鉴定蛋白质的其中一种平台技术。可用到的质谱仪有Thermo Fisher的Q Exactive质谱仪，LTQ Orbitrap Velos质谱仪，以及AB SCIEX的6500 Q TRAP质谱仪。所在鉴定机构的不同，在硬件品牌的使用上也会有不同。

蛋白质鉴定的流程一般分三大步：蛋白质提取、纯化、鉴定。这个流程是一个将蛋白质层层“解剖”的过程，从中我们可以对蛋白分子量进行测定，蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质进行鉴定，非变性质谱分析以及Pull-down靶蛋白质谱鉴定等，较为细致的去分析蛋白质中的各种物质、性质等。

B. 检测基因蛋白水平的表达有哪些方法

转录水平检测：RT-PCR，real-time PCR，northern blot
翻译水平检测：western blot
还有直接检测，如报告基因、融合荧光蛋白等。

C. 蛋白质表达检测有哪几种方法

有三种，第一是用DNA探针检测，看目的基因是否存在。第二种是用mRNA做探针，看是否有由DNA转录形成的mRNA，原理和前面是一样的，利用碱基互补配对原则。前面两种都是在分子水平检测，第三种是在个体水平直接检测的。比如：直接拿害虫去侵蚀抗虫棉

D. 检测基因表达的方法

主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)

一、外源基因转录水平的鉴定

基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平。

即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为探针，检测RNA链。和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。

如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。

二、外源基因表达蛋白的检测

表达蛋白的检测方法有三种：

1、生化反应检测法：主要通过酶反应来检测；

2、免疫学检测法：通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；

3、生物学活性的检测。

Western杂交是将聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分离抗原（Antigen）固定在固体支持物上（如硝酸纤维素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白质在凝胶中迁移率不同，据此可确定特定的抗原存在与否以及相对丰度，或者蛋白质是否遭到降解等。

蛋白质电泳后转到NC膜，放在蛋白质（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，温育，以封闭非特异性位点，然后用含有放射性标记或酶标记的特定抗体杂交，抗原-抗体结合，再通过放射性自显影或显色观察。

(4)检测是否表达蛋白质的方法扩展阅读

外显子与内含子表达过程中的相对性 从内含子与外显子的定义来看，两者是不能混淆的，但是真核生物的外显子也并非都“显”（编码氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外显子完全“不显”之外，几乎全部的结构基因的首尾两外显子都只有部分核苷酸顺序编码氨基酸，还有完全不编码基酸的外显子，如人类G6PD基因的第一外显子核苷酸顺序。

已发现一个基因的外显子可以是另一基因的内含子，所这亦然。以小鼠的淀粉酶基因为例，来源于肝的与来源于唾液腺的是同一基因。淀粉酶基因包括4个外显子，肝生成的淀粉酶不保留外显子1，而唾液腺中的淀粉酶则保留了外显子1的50bp顺序，但把外显子2与前后两段内含子一起剪切掉，经过这样剪接，外显子2就变成唾液淀粉酶基因中的内含子。

同一基因在不同组织能生成不同的基因产物来源于不同组织的类似蛋白，可以由同一基因编码产生，这种现象首先是由于基因中的增强子等有组织特异性，它能与不同组织中的组织特异因子结合，故在不同组织中同一基因会产生不同的转录物与转录后加工作用。

此外真核生物基因可有一个以一的poly(A)位点，因此能在不同的细胞中产生具有不同3’末端的前mRNA，从而会有不同的剪接方式。由于大多数真核生物基因的转录物是先加poly(A)尾巴，然后再行剪接，因此不同组织、细胞中会有不同的因子干预多聚腺苷酸化作用，最后影响剪接模式。

E. 检测蛋白质表达量的实验方法有哪些，western-blotting的原理，方法

蛋白质印迹（免疫印迹试验）即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息
蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所（Friedrich Miescher Institute）Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981所着《析物化》（Analytical Biochemistry）首称Western Blot蛋白免疫印迹（Western Blot）电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面

F. 如何检测一个细胞中的蛋白质表达量

实时荧光定量PCR检测mRNA的表达,然后westernblot检测蛋白表达量.
首先你确定拿到了这两种细胞系，通过PCR反应证明一个是野生型一个是突变型，即snp。然后用试剂盒提取RNA，设计引物，采用半定量或绝对定量的方法，测定mRNA表达水平；然后另取细胞裂解，提取总蛋白，用特异性抗体检测蛋白表达量。

G. 我们可以用什么办法检测食物中是否含有蛋白质

日常简单方法可以用烧灼，因为蛋白质烧灼了以后有一股特殊的味道，就比如说头发烧着了以后的味道就是蛋白燃烧的味道。

H. 检测蛋白质表达除了Western blot，还有什么方法

你能否说的详细一点呢？你想要怎么做？至少说，你想看的蛋白是体内的，还是外源转染进去的质粒表达的？
如果是体内的，western是比较好的方法；如果是分泌蛋白，则可以用ELISA；如果是外源转染进去的，则可以融合一个GFP什么的进去，看荧光就行了。还是得看你想怎么做，还有你的蛋白是什么状态的。
上面有人说RT-PCR，检测mRNA是一种间接的途径。如果此蛋白有转录后调控的机制，则mRNA的量不能反应蛋白的量。

I. 怎样用抗原-抗体的方法检验目的基因是否翻译出蛋白质原理是什么

检测目的基因是否进入到受体细胞的方法，一般包括分子水平检测和个体水平检测。其中分子检测有3个层次：1目的基因是否整合到受体细胞染色体dna上，2目的基因是否转录出mrna，3目的基因是否翻译出蛋白质。1和2都可以用dna分子杂交技术检测，3可以用抗体-抗原的方法检测。个体水平的检测包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否具有抗性及抗性的程度；基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较等。
stern杂交──蛋白质分子（抗原—抗体）之间的杂交。它是检测目的基因是否表达出蛋白质的一种方法。
具体做法是：
第一步，将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质；
第二步，将表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出抗体（一抗）；
第三步，从转基因生物中提取蛋白质，走凝胶电泳；
第四步，将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上；
第五步，将抗体（一抗）与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交，这时抗体（一抗）与目的基因表达的蛋白（抗原）会特异结合。
由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带，所以加入一种称为二抗的抗体，它可以与一抗结合，二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质，则结果为阳性。