alk基因的检测方法

‘壹’ ALK基因检测有哪些方法

ALK基因的检测方法有很多种。包括检测DNA层面的FISH（荧光原位杂交），RNA层面的RT-PCR，以及检测蛋白的免疫组化方法。这几种方法都已通过许多临床试验验证。另外，近些年还有高通量基因测序的方法可以对包括EGFR,ALK,KRAS,ROS1等在内的一组基因同时检测的方法，这类方法目前还没有获得相应临床试验认证，仍旧处于研发阶段，对于结果需要谨慎解读。

‘贰’ 怎么检测ALK阳性非小细胞肺癌

根据肺癌组织的癌细胞病理特征分:非小细胞肺癌（NSCLC）约占85%,小细胞肺癌（SCLC）：约占15%。对于晚期非小细胞肺癌，推荐所有腺癌或含腺癌成分的非小细胞肺癌患者，在诊断时常规进行ALK融合基因或ALK融合蛋白检测。 对于小活检标本或者不吸烟的鳞状细胞癌患者也建议进行ALK检测。 2009年Shaw等将ALK基因重排阳性的肺癌列为非小细胞肺癌的一个特定分子亚型。 ALK融合型非小细胞肺癌不仅是基因序列层面的改变，ALK融合蛋白也是该类疾病中重要变异，因此将此类疾病统称为“ALK阳性非小细胞肺癌” 。ALK阳性非小细胞肺癌，是一类驱动基因明确的肺癌类型。这一类型的非小细胞肺癌，对于新型靶向药物--ALK抑制剂高度敏感。 中国非小细胞肺癌中ALK阳性率为3-11%,每年新发病例数约35000例。 对于基因突变阳性的ALK阳性非小细胞肺癌，靶向治疗无疑成为他们更好的治疗选择。

‘叁’ alk是什么意思

根据肺癌组织的癌细胞病理特征分:非小细胞肺癌（NSCLC）约占85%,小细胞肺癌（SCLC）：约占15%。

对于晚期非小细胞肺癌，推荐所有腺癌或含腺癌成分的非小细胞肺癌患者，在诊断时常规进行ALK融合基因或ALK融合蛋白检测。 对于小活检标本或者不吸烟的鳞状细胞癌患者也建议进行ALK基因检测。

ALK融合基因的产物是分子量为80 kD的融合肿瘤蛋白，其转化细胞的能力已得到公认。P80NPM-ALK通过使大鼠纤维母细胞发生锚非依赖性（anchorage independent）生长，增殖率明显增高。

它还可使Ba/F3细胞转变为IL3非依赖性。通过逆转录病毒将NPM-ALK转染小鼠骨髓细胞，这些小鼠随之发生了T细胞和B细胞性大细胞淋巴瘤。

非小细胞肺癌中唯一驱动突变：

其中一组研究人员开发了逆转录病毒cDNA表达库用于筛选新癌基因。他们转染了提取自一位预先筛选显示KRAS和EGFR突变阴性的62岁日本男性吸烟者肺腺癌的cDNA文库，并设计生成了转基因小鼠，在肺泡细胞中特异性表达EML4-ALK，由此生成了许多肺腺癌结节。

使用ALK抑制剂治疗这些转基因小鼠导致肿瘤负荷相比于未治疗的小鼠减小。大部分小鼠很快在1个月内死亡。使用相同ALK抑制剂治疗导致肺脏无EML4-ALK/3T3细胞浸润且生存期延长。此研究有力证实了EML4-ALK是非小细胞肺癌中唯一的驱动突变。

以上内容参考：网络-alk

‘肆’ 我能通过什么方法ALK基因检测

目前，在国内很多大型综合性医院和专科医院，已经能开展肺癌驱动基因的检测，这为ALK阳性肺癌患者找到更适合的“最佳”治疗方案奠定了基础。

‘伍’ 哪些肺癌需要接受ALK融合基因检测

各种条件允许的话，建议是所有肺鳞癌、肺腺癌的患者都做基因检测。首先最应该检测的是EGFR基因，其突变阳性的概率在我国非小细胞肺癌人中约占30%以上，等于1/3的病人一线就适合吃TKI药物。患者等待基因检测可能需要较长的时间（一周至两周），并且部分医院该部分是医保的，尤其需要强调的是这个等待是值得的，因为这个结果对下一步治疗至关重要。此外，还应该检测EML4-ALK融合基因，如果这个细胞发生融合基因表达阳性的话，另有靶向药物治疗，就是大众尚不熟悉的克唑替尼，但是发生率在我国加起来不过10%，我们优先做EGFR基因检测，再做EML4-ALK检测。
而不同基因检测的方法，所需要的时间也不尽相同。以检测ALK基因为例，采用Ventana IHC这种免疫组化方法大约1—2天就可以出结果；采用FISH（荧光原位杂交）时大概需要3—4天出结果；采用PCR（聚合酶链反应）这种比较复杂的分子生物学检测方法，则大约需要5—7个工作日出结果（国际上要求两周之内出基因检测结果）。

‘陆’ 最全梳理ALK基因突变和对应的靶向药物

间变性淋巴瘤激酶（ALK）突变的形式有过量表达、与其他基因形成融合基因，发生点突变等等。ALK基因融合突变是非小细胞肺癌（NSCLC）常见的一种驱动基因，中国非小细胞肺腺癌中ALK融合突变阳性的比例为5.3%，在非小细胞肺腺癌、年轻患者（小于60岁）以及不吸烟的人群中发生率较高，ALK阳性的非小细胞肺癌被认为是一种分子亚型，相对应的靶向药物与EGFR分子亚型完全不同。

ALK融合基因突变主要在肺腺癌里常见，一般肺鳞癌患者ALK融合基因突变概率很低，有报道说1400个肺鳞癌患者里ALK融合基因的发生率为1.3%。考虑到ALK总体突变频率仅有5%，所以对于鳞癌患者也是可以做一下ALK检测的。由于非小细胞肺癌里的驱动基因突变一般是互相排斥的，或者说一山不容二虎，癌细胞也没有必要搞两个驱动突变。有研究说亚裔的EGFR、KRAS野生型的腺癌患者，ALK阳性比例高达30%-42%，因此如果发现EGFR和KRAS是野生型，是更有必要测下ALK基因的。

一、ALK融合突变的检测

图5：L1198F导致的劳拉替尼耐药对克唑替尼重新复敏

这是一个非常有意思的发现，即劳拉替尼这个药物也不是最后的一张牌，这个药物耐药了，也许之前被放弃的药物仍可以有效。所以也有说法ALK是一种钻石突变。但需要谨慎的是不是每一个劳拉替尼耐药的患者都这样。我们从图示看出患者同时存在C1156Y和L1198F突变，才造成了这种逆转。也许其他的突变位点如L1196M等和L1198F就没有这种协同效果。或者还有可能劳拉替尼耐药的原因是其他的旁路激活，如KRAS或EGFR等，具体的还是可以根据基因检测结果来谨慎分析和对待，不过现在的测序技术抽血测ctDNA检测ALK的这些激酶突变总可能会有阴性，ArmsPCR等检测方法也还没有相应的产品，暂时只能尽量地取耐药后的新发组织样本，进行二代测序检测。

编者：翱宇

参考文献：

1、冯勤杨欣林冬梅，ALK阳性非小细胞肺癌的诊断，中国肺癌杂志2 0 1 5年2月第1 8卷第2期。

2、蒋涛周彩存，中国肺癌杂志2015年2月第1 8卷第2期

3、Alice T, J Clin Oncol.2013 Mar 10; 31(8): 1105–1111

4、Clin Cancer Res. 2014March 1; 20(5): 1204–1211

5、Ou SH , et al. Ann Oncol,2014, 25(2): 415-422.

6、Zhang I，Lancet Oncol. 2015Oct;16(13): e510-21

7、Ther Adv Med Oncol. 2016Jan;8(1)：32-47

8、Shaw AT et al, N Engl J Med. 2016 Jan7;374(1):54-61

‘柒’ ALK基因检验的qPCR的ALK融合基因检测手段效果怎么样

同FISH和ventana免疫组化一样，是获得CFDA批准的ALK检测方法之一。~~

‘捌’ ALK基因检测是怎样通过分子诊断来完成的

ALK基因检测鉴于分子诊断指导临床治疗决策的重要性，需要多学科的策略来获取、保存、处理肿瘤组织，用以满足各水平的分子检测。这些检测包括DNA序列或拷贝数分析、基于RNA的基因表达或序列变异分析、基于组织切片的荧光原位杂交（FISH）/显色原位杂交（CISH）/免疫组织化学检测等。在中国获批的三种方法是 Ventana IHC/ RT-PCR/FISH.

‘玖’ ALK基因检测是什么

摘要 ALK基因变异是非小细胞肺癌的一种分子亚型，该亚型的人群特征多发于年轻，肺腺癌，非吸烟人群。ALK基因检测是一种对ALK基因是否正常的一种诊断方法。

‘拾’ 目前为止世界范围之内基因检测测序最安全最便捷最准确的方式有哪些

如果是想用靶向药物的话，检测EGFR突变。Arms法检测EGFR基因更加准确，所需的标本量少，但检测费用比较贵。如果有突变，广州市医保可以申请“吉非替尼“的特定门诊，获批准的话，自付3300就可以长期服药，5个月后可以申请赠药。厄洛替尼的广州市医保申请不需要有基因突变，获批的话，自付4500左右，4个月后可以申请赠药。广州市医保承认的基因检测医院有广东省人民医院、中山大学附属第一医院、中山大学附属肿瘤医院。如果你不是广州市的。可以去你所在省份的首府的最大的肿瘤医院或综合医院的胸外科、肿瘤科、化疗科或呼吸内科咨询。另外用PCR方法检测ALK基因，是另外一种靶向药物。如果检测出T790M突变，就是另外一种靶向药物了。