当前核酸检测方法准确性

‘壹’ 核酸检测是怎样检测的

众所周知，新型冠状病毒肺炎（COVID-19）是一种烈性呼吸道传染病，其病原体为新型冠状病毒。若想证实已出现的感染症状是由本病毒所引起，最准确的方法是从患者体内分离出活病毒，并进行病毒培养。

然而，此方法并不适合大面积应用，在此次疑似病例的确诊工作中，也并不适用。这是因为病毒培养所需时间较长，需要的场所条件也很高（P3级实验室），时效性远远跟不上临床需要。

而核酸检测作为病原学的检测手段之一，效率很高，一般情况下几个小时就可以知道结果。因此，在此次疫情中，临床上取得病原学证据的主要方式并不是病毒培养，而是核酸检测。

核酸是遗传信息载体，是对DNA（脱氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）的统称。病毒则主要由遗传物质和蛋白质组成。而新型冠状病毒正是一种RNA病毒，其遗传物质是单链RNA。核酸检测的原理，正是检测在被测者的咽拭子等样本中，是否存在病毒的RNA。如果存在，说明被病毒感染。那么，我们是否已经获悉了病毒的RNA呢？

△RNA与DNA（图片来源网络）

在武汉疫情初期，中国疾病预防控制中心应用宏基因组学技术，在短时间内完成该病毒的鉴定，并获取了全基因组序列。在病毒全基因组序列公布后，实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）试剂被快速研发。

随后，核酸检测试剂盒被应用于临床，并为确诊新冠肺炎提供病原学证据。那么，应用试剂盒进行核酸检测，究竟是怎样的一个过程呢？

首先，检测人员需要在试剂的帮助下，将样本中的核酸提取出来。再把已经分离出来的核酸加到核酸扩增试剂中，然后将其放到核酸扩增仪内，一般两个小时内就会有结果。

事实上，在操作步骤中，扩增是很重要的一环。扩增的意义在于能让微量的遗传信息成指数增加。只要样本中有核酸基因片段，就能用PCR法加以放大，从而更清晰地与病毒全基因组序列实现比对。

实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法已在临床实验室应用多年，检测体系成熟，具有特异性强、灵敏度高、检测周期短和可定量检测的优点，而且还能对病毒感染程度和治疗效果进行动态监测。

中日友好医院呼吸与危重症医学科主任医师陈欣在记者采访中介绍道：核酸检测十分敏感，只要在被检者的分泌物样本中找到一部分病毒的核酸，就可以通过RT-PCR扩增的方式，整合成序列。

"虽然不确定核酸是否来自于活病毒，但对于有呼吸道感染症状的患者或疑似患者来说，如果其咽拭子有这种核酸，一般认为来源于活病毒的一部分，间接证实其体内存在着病毒的繁殖和感染。" 陈欣告诉记者。

核酸检测容易出现"假阴性"

虽然核酸检测有灵敏度高、检测周期短等优点，但也存在着一定的弊端。不同于从人体内直接分离出活病毒的方式，核酸检测采用的是一种间接的方式，有可能造成假阴性。

因为试剂盒存在最低检测限的问题，所以只有当采到的样本中，病毒的含量达到一定程度时才能检测出来。少数情况下，可能康复者并未康复，但由于样本中病毒载量低，故康复者核酸检测的结果呈阴性，也就是我们常说的"假阴性"。

因此，在《新型冠状病毒肺炎诊疗标准（试行第七版）》中，出院标准之一为连续两次痰、鼻咽拭子等呼吸道标本核酸检测阴性（釆样时间至少间隔24小时）。
而之所以选取呼吸道标本进行核酸检测，是因为新冠肺炎属于呼吸道传染病，故而优先考虑从呼吸道的分泌物中取得标本。呼吸道又分为上呼吸道和下呼吸道，前者主要包括鼻、咽、喉；后者主要包括气管、主支气管及肺内各级支气管。

相应地，现在对疑似患者检测病毒核酸，标本的采集一般有两大类，上呼吸道标本和下呼吸道标本。

上呼吸道标本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子（NPS）、鼻咽吸取物（NPA）；下呼吸道标本主要包括痰液、气管吸取物、支气管肺泡灌洗液（BALF）等。

‘贰’ 新冠核酸检测增加肛拭子采样，是否能更加有效的检测出病毒

新冠核酸检测增加肛拭子采样，的确能更加有效的检测出病毒，一部分感染者粪便或肛拭子核酸阳性的持续时间比上呼吸道持续时间更长，对于重点人群可以选择肛拭子采样。

如果已经被集中隔离观察了，或者有发热或其他不适，消化道有不适表现，是入境人员和感染者密切接触人员就需要更加全面的检测，加上咽拭子，鼻拭子，还会使用到肛拭子检测，能更加的准确，更好的减少漏网之鱼。肛拭子和鼻咽拭子就是一样的了，本人或者家属可以在12小时或24小时内拿到结果。 目前各地的疫情形势仍然严峻，疫情还处于紧张的阶段，希望大家能主动接受采样和筛查，有序排队参加检测配合医护人员工作，坚决打赢这场疫情防控阻击战，迎接春天的到来。

‘叁’ 现在核酸检测都有什么方法

通过呼吸道或口腔内的痰液做检测

‘肆’ 做核酸检测的正确方法

5月11日，武汉市新冠肺炎疫情防控指挥部涉疫大数据与流行病学调查组印发紧急通知，决定以10天为期，在武汉市范围内开展全员新冠病毒核酸筛查。而在全国各地也有一些朋友好奇，核酸检测到底检测哪个部位？鼻咽拭子和口咽拭子有何不同？做核酸检测时有哪些注意事项？
首都医科大学附属北京地坛医院感染中核酸检测标本可以采集深部痰液、鼻咽拭子和口咽拭子。其中口咽拭子和鼻咽拭子统称为咽拭子，经口的为口咽拭子，经鼻的就是鼻咽拭子。

口咽拭子

鼻咽拭子
做核酸检测时，我们需要注意什么呢？
在做核酸检测前2小时尽量避免进食，以免引起呕吐；
采样前30分钟不应吸烟、喝酒、咀嚼口香糖等；
检测者需要正确佩戴口罩，检测前取下口罩，检测后立即戴好，可准备一个备用口罩，污染后方便及时更换；
在采集鼻咽拭子前检测者应告知采集人员是否鼻中隔弯曲及鼻腔手术史，过程中可能出现鼻部酸痒感，刺激打喷嚏，可立即用纸巾或手肘遮挡；
鼻咽拭子采集后可能出现少量鼻腔出血，一般不需要特殊处理，如出血量较多请及时到医院进行处理；
在采集口咽拭子时检测者头后仰，张口发出“啊”音，有助于暴露咽喉，但过程中会出现刺激性干咳、恶心、呕吐等症状，检测者可配合采集人员尽量放松、深呼吸；
核酸检测前后都需要注意手部卫生，可使用免洗手消毒液或免洗酒精擦拭双手。

血清抗体检测不受饮食影响 无需空腹
一般感染新冠病毒7-10天后，人体会产生针对病毒的特异性抗体。最先出现的是IgM抗体，随后会出现IgG抗体，所以检测这些特异性抗体，可以判断人体是否感染过病毒，而检测方法就是血清抗体检测。
血清抗体需要抽取检测者2-4mL的静脉血液进行检测，检测结果不受饮食和药物影响，因此检测前不需要空腹。
为落实好新冠肺炎疫情常态化防控，全国各地陆续公布“核酸检测机构名单”，推动重点人群“应检尽检”、其他人群“愿检尽检”。目前国家卫生健康委推出“核酸检测机构查询”服务，在国务院客户端上线，目前已有北京、天津、河北、辽宁、黑龙江、上海、江苏、安徽、福建、山东、河南、湖北、湖南、广东、广西、海南、四川、贵州、云南、宁夏、新疆生产建设兵团上传的1226家检测机构。

‘伍’ 核酸检测的方式都有什么

核酸检测主要有酸检测试剂、抗体检测两种方法，第一种方法通常是通过咽拭子进行PCR检测，基因扩增，然后再进行核酸检测。 而抗体检测是选择抽血，抽血的方法得出结果看，观察其抗体滴度是否升高，这种情况常常是指在抽血前常出现不能产生抗体的情况。

核酸检测是一种“进行时”检测，通过聚合酶链反应等方法检测病毒基因组中特定的核酸序列，从而判断被检测者此刻是否感染了病毒。

与核酸检测不同，新冠病毒抗体检测显示的是哪些人曾经被感染。抗体检测又被称为血清学检测，目的是检测血液样本中的抗体。人体感染病毒后，会产生IgM或IgG抗体。

被感染初期，人体会迅速产生IgM抗体，以抗感染；相比之下，产生IgG抗体的速度更慢，但IgG抗体保留时间更长。抗体检测就是检测血清中是否有这些特异性抗体，以确定被测试者是否曾被感染。

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六种人不宜做核酸检测

一、釆样前30分钟，对于有吸烟、喝酒、嚼口香糖等人群不宜做核酸检测，以免影响检测的准确度。

二、进食太饱的人不宜做核酸检测，否则容易发生恶心呕吐，影响采用结果的准确性。

三、核酸检测前有口服抗病毒和抗感染的药物的，应推迟做核酸检测，避免影响检测结果。

四、若是进行鼻拭子采样的话，对于鼻咽部有病症的急性期，如出血、水肿等人群可以暂不予检测。

五、刚进行核酸检测时出现恶心呕吐的人，应暂缓做核酸检测，需等检测者缓解后再予以进行。

六、被采样者用手或其他物品触及拭子采样冠、棉签的前端的不宜进行，否则容易造成污染，影响检测结果，需更换进行重做。

‘陆’ 怎么才能提高核酸检测的准确度呢

提高核酸检测的准确度在做检测前1-2个小时不要进食防止呕吐，也不要饮酒、吸烟、咳痰等，防止改变口腔内的菌群，造成检测结果的不准确。

南京市第一医院感染性疾病科护士长王娟说，“假阴性”可能是当时没有检测到病毒片段，也可能是当时确实未感染病毒，不能代表检测结果不准确。“所以我们医院从疫情初始，就一直做鼻咽拭子，相较口咽拭子的准确度更高一点。”王娟解释，这是鼻咽部的构造决定的，一些分泌物在鼻腔后壁会有一个弯曲，这里容易残留更多分泌物。

建邺区沙洲社区卫生服务中心院长潘琴也告诉记者，在社区医院，正是出于这种考虑，目前也在培训检测人员鼻咽拭子采样方法。“我自己实际体验了一下，确实鼻子会有酸酸的感觉，眼泪会不自主地流下来。但为了更好地进行检测，还是呼吁大家多多配合。”

(6)当前核酸检测方法准确性扩展阅读

核酸检测结果不一定要去医院取：

不一定。对于政府组织的机构的核酸检测，其结果由政府及时向检测对象公布，居民自己到医院检测的，可直接到该院的官网或微信公众号查询，或者微信搜索“国务院客户端”小程序，选择“便民服务”中“核酸检测证明”后，输入姓名及身份证号，就可以快速查询7日内的检测结果。也可以通过支付宝中的健康码查询。

江苏省人民医院护士长侯乐提醒：一般早晨9点前采样的当天16点左右即可拿到检测结果，下午采样的第二天获得检测结果，请大家根据自己需求合理安排时间。当前正值春运期间，核酸检测需求增多，请大家有序排队，做好个人防护。

‘柒’ 核酸检测需要注意什么怎样能保证准确率

在做核酸检测的过程当中，为了保证它的准确率，首先我们应该注意的是检测之前两小时尽量不要进食也不要喝饮料，将自己的嗓子清好，在检测的过程当中记得张口发出啊的声音，而且还要准备好自己的身份证件。
在去年春节的时候，我国就因为新冠疫情而各个领域都放缓了脚步，随之而来的就是大面积的核酸检测，因为只有核酸检测才能够发现哪些人患有新冠肺炎，这也是目前最为准确的一种方式，在新冠疫情防控的过程当中发挥了至关重要的作用，如果没有核酸检测根本就不知道疫情的分布，现在我国已经将疫情控制得非常好，但是仍然有一些中高风险地区的人们需要做核酸检测，目前核酸检测一共有三种，分别是捅鼻子、捅喉咙、还有一种是肛门拭子，这三种方法当中捅喉咙的方式准确率比较大，肛门试纸也是最近新出来的一种。
我们应当积极的配合工作人员的核酸检测，不求为疫情作出贡献，也不要给他们添麻烦。

‘捌’ 抗原检测与核酸检测有哪些区别这两款产品的准确率如何

核酸检测由于对设备及采集人员的要求较高，因此准确率比抗原检测更有效。但抗原检测有比核酸检测更快的初步检验结果，适用于多人群的大规模基础诊断。

由于核酸检测对于病毒的感染性以及结果都有较为准确地预判和估计，因此现在我国在许多人群的筛查上都会使用核酸检测作为评估结果。但随着防控局势的逐步严峻，抗原检测也可以作为一种补充的检测方法。虽然抗原检测的准确率不高，但在大规模人群的初步筛选上，有非常好的表现和作用。

一：核酸检测由于对设备以及采集人员的要求较高，因此检测结果更加有效。

由于核酸检测具有早期诊断、灵敏度和特异性高等突出特点，是目前确诊新冠肺炎的重要标准之一，核酸检测使用的是实时荧光定量RT-PCR技术。这种技术对于目前新冠病毒的初期发现和判断有很好的作用和帮助。但缺点是高灵敏度的RT-PCR仪价格不菲，对相关实验室的洁净度和操作人员要求也较高，且检测时间较长，一个检测通常会需要4-6个小时才有结果。

‘玖’ 各种新冠病毒的检测方式，哪种最为准确

各种新冠病毒的检测方式，肛拭子是最准确的。

新冠病毒出现之后，医院很快就推出了检测的方式，而其中全球使用最多的检测方式主要有三种。其中有两种是主流的检测方式，那就是鼻拭子或者咽拭子。主要是通过把一个长长的棉签深入到呼吸道之中，然后取样进行检测。因为新冠病毒在呼吸道停留的时间是比较久的，检测到样品的机会就更大，检测结果也就比较准确。

在做新冠病毒检测的时候，很多人会频繁的清理喉咙，或者嚼口香糖，希望保持口腔的清洁，但是这完全没有必要，频繁的吞咽反而会让新冠病毒停留时间变短，存在检测不到病毒的可能性。因此在做新冠病毒的检测之前，最好不要喝水、不要清嗓子、不要抽烟、不要嚼口香糖，佩戴好口罩，等待进行检测即可。检测的过程是非常快速的，一般几秒钟就可以完成，所以不要对于长棉签有太大的恐惧感，不然反而会耽误检测的进度。

‘拾’ 核酸检验方法

核酸检测具体流程如下：
1. 核酸提取
使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。
2. 逆转录合成cDNA
逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。建议使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。
3. PCR扩增反应（使用二次扩增的套式PCR扩增方法）
PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板（DNA或cDNA）。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。
4. 扩增产物定性分析
扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。自动化核酸扩增仪使用酶联比色分析或荧光探针杂交等原理测定。
5.结果判定和完成报告单
（1）实验成立的条件：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。
（2）HIV核酸检测阳性：发现核酸阳性反应，应该重复采集样品进行复测，复测结果呈核酸阳性反应则判定为核酸阳性，复测结果为核酸阴性反应则判为不确定结果，需进一步随访检测。
（3）HIV核酸检测阴性：只可报告本次实验结果阴性。
（4）应在完成检测后5个工作日内发出检测报告。