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乳糖吸光度检测方法

发布时间:2022-04-04 00:14:38

㈠ 1、 做乳糖检测究竟是用氨基色谱柱还是需要专门做乳糖的专用柱啊

从根本来说,做乳糖就是用的氨基硅烷键合硅胶色谱柱,但是普通的氨基色谱柱由于键合方式和规格的问题,做乳糖和蔗糖检测时基线非常不好,虽然也有检测器的因素在里面,建议还是用乳糖专用色谱柱好些。前段时间去药检所培训学习,看到他们用到成都摩尔科学仪器有限公司提供的赛分乳糖专用柱做的还很不错,因此我也把色谱柱型号抄写了下来,现在分享给你吧,希望能解决你的问题:Sepax Lac-Amino 5um 300x4.6mm(部件号:Z00008-4630)。

谢谢希望采纳!

㈡ 乳糖不耐受有哪些检测方法 低乳糖牛奶能解决乳糖不耐受吗

乳糖不耐受检测方法:

为了避免不适当饮奶对健康造成的损害,专家建议:最好在饮奶前检查自己是否耐受乳糖,然后选择不同类型的奶制品,检查的办法分三类。

1.临床诊断,医生根据患者腹痛、腹胀、腹泻等症状,确定其是否耐受乳糖。这种方法的缺点是不能发现隐性乳糖不耐受者。

2.在饮用牛奶后做“呼氢试验”。这种做法需要特殊仪器,如受试者有吸烟史或蔗糖不耐受症,测试结果会不准确。

3.在饮用牛奶后,测试尿液中半乳糖的浓度,这是目前国外最常用的一种方法,更为简便、经济、可靠。伊利在本次活动中选用的即为此种检测方法。

低乳糖奶可以解决乳糖不耐受:

在牛奶加工过程中,加入安全的乳糖酶,像体内乳糖被正常消化一样,乳糖被消化为葡萄糖和半乳糖。由于酶的消化,牛奶中的乳糖含量便下降,所以这样的牛奶被称作低乳糖牛奶。 由于低乳糖牛奶生产中,利用乳糖酶将乳糖消化成更利于吸收的葡萄糖和半乳糖,这类产品可以满足正常消费者、乳糖不耐受者、乳糖酶缺乏者饮用牛奶、充分吸收牛奶营养的需要。 由于乳糖的甜度较乳糖酶消化后的产物---葡萄糖和低聚半乳糖合起来的甜度低,所以,仔细品尝会发现,低乳糖牛奶甜度比正常牛奶略为甜一点。

㈢ 智能血糖监测手表的测量原理是怎样的

来自医惠购为您的解释:血糖仪的检测方法分为光化学法和电化学法原理。电化学法直接测试血糖试条反应区产生的微电流;光化学法测试血糖试条吸光度的变化值,其试条加样区必须直接接触光孔,从而可能导致对光孔的污染,因而,光化学法的血糖仪必须经常清洁光孔,否则污染后将导致测试结果的偏差。一般来说,光化学原理比电化学原理的血糖仪测试时需要的血样多。
同时,电化学法也分为两种,主要是根据试纸使用的两种酶。
葡萄糖氧化酶电极测量法Glucose Oxidase
原理:通过测量血液中的葡萄糖与试纸中的葡萄糖氧化酶反应产生的电流量测量血糖。市面上的主流机型大多为葡萄糖氧化酶测量法。
优点:相较生化仪和化学法测量更快(30秒以内),用血量更少(5微升以下)
缺点:由于空气中的氧含量比氢含量大得多,所以相较脱氢酶法而言试纸更容易受空气影响,所以要求在封闭干燥的环境下储存更严格,一般试纸从容器中取出后要在5分钟之内使用完毕,否则因试纸受潮而测量不准的可能性更大,桶装试纸一般要求开盖将试纸取出后立即盖紧罐盖,试纸开封后要求3个月内用完。
葡萄糖脱氢酶电极测量法PQQ-Glucos dehydrogenase
原理:通过测量血液中的葡萄糖与试纸中的葡萄糖脱氢酶反应产生的电流量测量血糖。
优点:除氧化酶的优点之外,由于空气中含氢气较少的原因,他还克服了氧化酶不易保存的缺点,一般开罐后可用到效期结束。
缺点:脱氢酶除对血液中的葡萄糖反应外,还会对血液中的麦芽糖、半乳糖、木糖产生反应,所以患者进食含上述糖类物质时用脱氢法测量容易产生假性血糖,所以一般医院不建议用脱氢法测量。

㈣ 乳糖不耐受有哪些检测方法

为了避免不适当饮奶对健康造成的损害,最好在饮奶前检查自己是否耐受乳糖,然后选择不同类型的奶制品。
1.临床诊断,医生根据患者腹痛、腹胀、腹泻等症状,确定其是否耐受乳糖。2.在饮用牛奶后做“呼氢试验”。3.在饮用牛奶后,测试尿液中半乳糖的浓度,这是目前国外最常用的一种方法,更为简便、经济、可靠。伊利在本次活动中选用的即为此种检测方法。

㈤ 乳糖不耐受怎么检查

病情分析: 可以检查的,你可以去医院进行一下特定的检查。 意见建议:目前,检测人体乳糖耐受能力的方法大致有三类:一是临床诊断;二是饮用乳糖后做“呼氢试验”,需用特殊仪器,如有吸烟史或蔗糖不耐受症,测试结果不准确;三是测试尿中半乳糖的浓度,查小便,如果怀疑还是去查一下更放心一些。

㈥ 请问如何检测“乳糖不耐受”

目前,检测人体乳糖耐受能力的方法大致有三类:一是临床诊断;二是饮用乳糖后做“呼氢试验”,需用特殊仪器,如有吸烟史或蔗糖不耐受症,测试结果不准确;三是测试尿中半乳糖的浓度,在西欧、北美和日本较为普遍。我国基本采用临床诊断法,造成许多隐性不耐受患者漏诊,可靠性较差。 针对这一现状,在全国小儿佝偻病防治科研协作组等的组织支持下,经过两年多努力,北京金域高科诊断技术有限公司王加义副研究员率领的团队经过数千次实验,终于掌握了一种评价人体乳糖耐受能力、指导公众科学饮奶的新技术——JY-Po-Color Gal尿半乳糖测定技术。 经权威机构查新检索,这一技术属国内首创。受试者只需收集饮用乳糖或牛奶后2至3小时间的5毫升尿液,十几分钟即可测试出乳糖耐受能力,可在家庭使用。

什么是乳糖不耐,如何进行诊断或化验

乳糖不耐症最主要的表现是饮奶后半小时至两小时,出现腹部不适、腹胀、腹痛、多屁、恶心、呕吐甚至腹泻等症状,这种现象在医学上称为乳糖不耐受症(简称“乳糖不耐症”)
乳糖不耐症:
牛奶中含有5%乳糖,乳糖必须在乳糖酶作用下,才能在小肠中分解成较小的葡萄糖及半乳糖,被人体吸收利用。
当缺乏乳糖酶时,乳糖便不能被分解消化,滞留在肠道,在细菌作用下发酵,形成过多的酸、水及有味气体,引起腹胀、腹痛、多屁、恶心、呕吐、腹泻等不适症状,即乳糖不耐症。
用来测验乳糖在消化系统吸收状况的最普通的方法有乳糖耐性测试、氢气呼吸测验和大便酸度测验。这些测验适用于医院、门诊和医务室的门诊病人。
乳糖耐性方法为被测试者在空腹(不吃东西)时,喝含乳糖的一种液体。每间隔两个小时采血液样品,测定其血液的葡萄糖(血糖)水平。血糖能很好的反映身体对乳糖的消化能力。
一般情况下,当乳糖到达消化系统,就被乳糖酶分解成葡萄糖和半乳糖。肝能将半乳糖转化成葡萄糖,葡萄糖进入血液使血液葡萄糖含量升高。如果乳糖没有被完全分解,血液里面葡萄糖的水平就不会提高,这样就能确珍人体对乳糖不耐性。
氢气呼吸测验是测量一个人呼吸中氢气的含量。一般情况下,非常少量的氢气能检测到。然而,未被消化的乳糖在结肠里被细菌发酵,产生各种气体,包括氢气。氢气被肠吸收进入血液,并被运送到肺,然后排放掉。在测验中,病人喝一种含有乳糖的饮料,然后按固定间隔测定呼吸。呼吸中氢气水平的升高表明乳糖没有很好的被消化。由于一些食品、药物和吸烟会影响测验的准确度,在测验前应该避免。该测验方法能应用于儿童和成年人。

㈧ 乳糖的微生物限度检验方法是什么

浓度梯度的设置,生物量做纵坐标,乳糖浓度做横坐标,进行检测。

㈨ 求助甘露糖含量检测方法步骤

糖的测定方法
一般有四种方法:
1、 直接滴定法。

原理为 糖还原天蓝色的氢氧化铜为红色的氧化亚铜。缺点:水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响。

2、 高锰酸钾滴定法。

所用原理同直接滴定法。缺点:水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响,过程较为复杂,误差大。

3、硫酸苯酚法。

糖在浓硫酸作用下,脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定160min以上。

缺点:如果水样呈橙红色(大部分水样为黄色),会对比色法造成较大的干扰。

4、蒽酮法

糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的测定。

缺点:,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅。

综合比较;采用蒽酮法能将最为准确地测定尾水中糖的含量。

(一) 直接滴定法

Ⅰ、原理

v 一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合,立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀,这种沉淀很快与酒石酸钠反应,生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下,以次甲基蓝作为指示剂,用标液滴定,样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应,生成红色的氧化亚铜沉淀,待二价铜全部被还原后,稍过量的还原糖把次甲基蓝还原,溶液由蓝色变为无色,即为滴定终点。根据样液消耗量可计算出还原糖含量。
样品经除去蛋白质后,在加热条件下,以次甲基蓝做指示剂,滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液(用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液),根据样品溶液消耗体积计算还原糖量。

Ⅱ、仪器和试剂
1.仪器
酸式滴定管,可调电炉(带石棉板),250ml容量瓶。
2.试剂

1. 盐酸。

2. 碱性酒石酸铜甲液:称取15g硫酸铜(CuSO4·5H2O)及0.05g次甲基蓝,溶于水中并稀释至1000mL。

3. 碱性酒石酸铜乙液:称取50g酒石酸钾钠与75g氢氧化钠,溶于水中,再加入4g亚铁氰化钾,完全溶解后,用水稀释至1000 ml,贮存于橡胶塞玻璃瓶内。

4. 乙酸锌溶液:称取21.9 g乙酸锌,加3ml冰乙酸,加水溶解并稀释至100ml。

5. 亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾,用水溶解并稀释至100ml。

6. 葡萄糖标准溶液:准确称取1.0000g经过96℃±2℃干燥2h的纯葡萄糖,加水溶解后加入5ml盐酸,并以水稀释至1000L。此溶液相当于1mg/ml葡萄糖(注:加盐酸的目的是防腐,标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制)。

7. 果糖标准溶液:按⑹操作,配制每毫升标准溶液相当于1mg的果糖。

8. 乳糖标准溶液:按⑹操作,配制每毫升标准溶液相当于1mg的乳糖。

9. 转化糖标准溶液:准确称取1.0526g纯蔗糖,用100ml水溶解,置于具塞三角瓶中加5ml盐酸(1+1),在68℃~70℃水浴中加热15min,放置至室温定容至1000ml,每ml标准溶液相当于1.0mg转化糖。

Ⅲ、实验步骤
1.样品处理
⑴ 乳类、乳制品及含蛋白质的食品:称取约2.50~5.00g固体样品(吸取25~50ml液体样品),置于250 ml容量瓶中,加50 ml水,摇匀。边摇边慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液,加水至刻度,混匀。静置30 min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,滤液备用。(注意:乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等,使它们形成沉淀,经过滤除去。如果钙离子过多时,易与葡萄糖、果糖生成络合物,使滴定速度缓慢;从而结果偏低,可向样品中加入草酸粉,与钙结合,形成沉淀并过滤。)

⑵ 酒精性饮料:吸取100ml样品,置于蒸发皿中,用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,在水浴上蒸发至原体积1/4后,移入250ml容量瓶中,加水至刻度。

⑶ 含多量淀粉的食品:称取10.00~20.00g样品,置于250ml容量瓶中,加200ml水,在45℃水浴中加热1h,并时时振摇(注意:此步骤是使还原糖溶于水中,切忌温度过高,因为淀粉在高温条件下可糊化、水解,影响检测结果。)。冷后加水至刻度,混匀,静置,沉淀。吸取200ml上清液于另一250ml容量瓶中,慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液,加水至刻度,混匀,沉淀,静置30 min,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,滤液备用。

⑷ 汽水等含有二氧化碳的饮料:吸取100ml样品置于蒸发皿中,在水浴上除去二氧化碳后,移入250ml容量瓶中,并用水洗涤蒸发皿,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀后备用。(注意:样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。)

2. 标定碱性酒石酸铜溶液:吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液,置于150ml锥形瓶中(注意:甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀,应将甲液加入乙液,使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶),加水10 ml,加入玻璃珠2粒,从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液,直至溶液兰色刚好褪去为终点,记录消耗的葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液总体积,平行操作三份,取其平均值,计算每10 ml(甲、乙液各5 ml)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量或其他还原糖的质量(mg)。(注意:还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化,恢复成原来的蓝色,所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态,并且避免滴定时间过长。)

3. 样品溶液预测:吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液,置于150 ml锥形瓶中,加水10 ml,加入玻璃珠2粒,控制在2 min内加热至沸,趁沸以先快后慢的速度,从滴定管中滴加样品溶液,并保持溶液沸腾状态,待溶液颜色变浅时,以每两秒1滴的速度滴定,直至溶液蓝色褪去,出现亮黄色为终点。如果样品液颜色较深,滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色(如亮红),记录消耗样液的总体积。(注意:如果滴定液的颜色变浅后复又变深,说明滴定过量,需重新滴定。) 当试样溶液中还原糖浓度过高时应适当稀释,再进行正式测定,使每次滴定消耗试样溶液的体积控制在与标定碱性酒石酸酮溶液时所消耗的还原糖标准溶液的体积相近,约在10ml左右。当浓度过低时则采取直接加入10ml样品溶液,免去加水10ml,再用还原糖标准溶液滴定至终点,记录消耗的体积与标定时消耗的还原糖标准溶液体积之差相当于10ml试样溶液中所含还原糖的量。

4. 样品溶液测定:吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液,置于150 ml锥形瓶中,加水10 ml,加入玻璃珠2粒,在2 min内加热至沸,快速从滴定管中滴加比预测体积少1 ml的样品溶液,然后趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至终点。记录消耗样液的总体积,同法平行操作两至三份,得出平均消耗体积。

5. 计算
样品中还原糖的含量(以某种还原糖计)按下式计算。
X=〔A/(m×V/250×1000)〕×100
式中:X--样品中还原糖的含量(以某种还原糖计),单位 g/100g;
A—碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各半)相当于某种还原糖的质量,单位 mg;
m--样品质量,单位 g;
V--测定时平均消耗样品溶液的体积,单位 ml;
计算结果保留小数点后一位。

注意:

滴定结束,锥形瓶离开热源后,由于空气中氧的氧化,使溶液又重新变蓝,此时不应再滴定。

(二)高锰酸钾滴定法

v 原理 将样液与一定量过量的碱性酒石酸铜溶液反应,还原糖将二价铜还原为氧化亚铜,经过滤,得到氧化亚铜沉淀,加入过量的酸性硫酸铁溶液将其氧化溶解,而三价铁盐被定量地还原为亚铁盐,用高锰酸钾标准溶液滴定所生成的亚铁盐,根据高锰酸钾溶液消耗量可计算出氧化亚铜的量,再从检索表中查出氧化亚铜量相当的还原糖量,即可计算出样品中还原糖含量。

(三)硫酸苯酚法

Ⅰ、原理

糖在浓硫酸作用下,脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定160min以上。

多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。

Ⅱ、试剂

1. 浓硫酸:分析纯,95.5%

2. 80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。

3. 6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配)

4. 标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia),或分析纯葡萄糖。

5. 15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。

6. 5%三氯乙酸(5%TCA):25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。

7. 6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。

8. 6mol/L 盐酸

Ⅲ、操作。

1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。

2.样品含量测定:

①取样品1克(湿样)加1ml 15%TCA溶液研磨,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液于10毫升离心管中,再加少许5%TCA溶液研磨,倒上清液,重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意:总的溶液不要超出10毫升。(既不要超出离心管的容量)。

②离心,转速3000转/分钟,共三次。第一次15分钟,取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。(测肝胰腺样品时,每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。)

③水浴,在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀,在96℃水浴锅中水浴2小时。

④定容取样。水浴后,用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液,以蒸馏补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。

Ⅳ、注意

(1)此法简单、快速、灵敏、重复性好,对每种糖仅制作一条标准曲线,颜色持久。

(2)制作标准线宜用相应的标准多糖,如用葡萄糖,应以校正系数0.9校正μg数。

(3)对杂多糖,分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。

(4)测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如:小于0.1之下可以考虑取样品时取2克,仍取0.2ml样品液,如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。

(四)蒽酮法

Ⅰ、实验原理

糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的测定。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖和己糖,而且可以测所有的寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应。所以,用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量。此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅。故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差,但测定单一糖类时,则可避免此种误差。

Ⅱ、试剂:

蒽酮试剂,0.20 g蒽酮溶入100 mL 95%浓硫酸中,冰箱保存;

Ⅲ、方法:

样品2.0 mL加5.0 mL蒽酮试剂,混匀,然后水浴煮沸10 min,取出冷却至室温,在620 nm处测定其吸光度,根据标准曲线计算水样中糖的浓度。(标线以葡萄糖为标样)

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