隐性突变的定量检测方法

㈠ 基因突变检测方法

基因突变检测方法：
PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。
异源双链分析法（HA）
HA法直接在变性凝胶上分离杂交的突变型一野生型DNA双链。由于突变和野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一突起，在非变性凝胶中电泳时，会产生与相应的同源双DNA不同的迁移率。该法与SSCP相似，所不同的是SSCP分离的是单链DNA，HA法分离的是双链DNA，也只适合于小片段的分析。
突变体富集PCR法（mutant-enriched
PCR）本法的基本原理是利用ras基因家族某个密码子部位存在已知的限制性内切酶位点，如K-ras基因第12密码子的BstNI位点，第13密古巴子有BgⅠⅡ位点。用链续二次的巢式PCR来扩增包括K-ras第12、13密码子的DNA片段，在两次扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段，野生型因被酶切而不能进入第二次PCR扩增，而突变型则能完整进入第二次PCR扩增并得到产物的富集。

㈡ 如何采用遗传互补试验验证植物显性突变基因和隐性突变基因的生物功能

【摘要】目的：探讨核苷酸切除修复交错互补基因1(ERCC1)在人结直肠癌中的表达水平，分析其与铂类药物化疗敏感性及生存时间的关系.方法：以西安交通大学第一附属医院行结直肠癌根治术患者45例和剖腹探查术患者18例的标本为材料，采用免疫组织化学Elivision法检测其ERCC1表达水平.其中40例复发、转移及晚期患者行草酸铂为基础方案化疗.所有入组患者随访6年.结果：肿瘤组织中ERCC1的阳性率为52.08%，低于对照组.病理分级与ERCC1的阳性率之间有关（P=0.040），病理分级越高，ERCC1阳性率越低，表达强度越弱.ERCC1阴性者铂类药物化疗有效率为60.00%(12/20)，而阳性者则为25.00%(5/20)，二者之间具有统计学差异（P=0.025）；Cox回归分析显示ERCC1表达为结直肠癌患者独立预后因子（P=0.048）.结论：ERCC1表达可作为预测结直肠癌患者对铂类药物敏感性及预后判断的指标之一.

㈢ 常用的基因突变检测方法有哪些

1、焦磷酸测序法

测序法的基本原理是双脱氧终止法，是进行基因突变检测的可靠方法，也是使用最多的方法。但其过程繁琐、耗时长，灵敏度不高，对环境和操作者有危害，故在临床应用中存在一定的限制。

焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析，其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美，而速度却大大的提高。

焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力。为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行单核苷酸多态性研究和临床检验提供了非常理想的技术操作平台。

2、微数字聚合酶链反应

该方法为将样品作大倍数稀释和细分，直至每个细分试样中所含有的待测分子数不超过1个，再将每个细分试样同时在相同条件下聚合酶链反应后，通过基因芯片逐个计数。该方法为绝对定量的方法。

3、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术

聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。该法一般用于检测已知的突变位点。

因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中兇手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。

由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1976年，台湾科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。

PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右）。

DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

4、高效液相色谱法

该方法是基于发生错配的杂合双链DNA与完全匹配的纯合双链DNA解链特征的差异而进行检测的，可检测出含有单个碱基的置换、插入或缺失的异源双链片段。

与测序法相比，该法简单、快速，不仅可用于已知突变的检测，还可用于未知突变的扫描。但只能检查有无突变，不能检测出突变类型，结果判断容易出错。

5、单链构象异构多态分析技术

依据单链DNA在某一种非变性环境中具有其特定的第二构象，构象不同导致电泳的迁移率不同，从而将正常链与突变链分离出来。与测序法相比，灵敏性更高。

㈣ 如何判断是显性突变与隐性突变

在遗传病中，先找2个患同种病的个体，子代有不患病的个体，表示该病显性遗传，若无，再找子代患病，亲本不患病，则该病隐性遗传。

㈤ 基因突变中是显性突变还是隐性突变是怎样判断的

显性突变：aa→Aa
隐性突变：AA→Aa
（1）对于性细胞：
如果是显性突变,可通过受精过程传递给后代,并立即表现出来.
如果是隐性突变,当代不表现,只有等到第二代突变基因处于纯合状态才能表现出来. （2）对于体细胞：
如果显性突变,当代表现,同原来性状并存,形成镶合体.突变越早,范围越大,反之越小. 如果是隐性突变,当代不表现.
一般较多的是隐性突变.
常染色体遗传：与性别和性染色体无关,与常染色体有关,即基因位于常染色体上的遗传,特点：男患＝女患
伴性遗传：与性别和性染色体有关,常见的是伴X遗传：男患多于女患（伴X隐）；女患多于男患（伴X显）,还有伴Y遗传：男传子,子传孙

㈥ 怎么用自交法验证是显性突变还是隐性突变

教材定义的是:
如果是显性突变,即aa→Aa，
如果是隐性突变，即AA→Aa。
所以自交后，无论是显性突变还是隐形突变，都是突变成Aa,
都会在子代出现性状分离，
Aa与Aa自交后代中，AA:Aa:aa=1:2:1。在子代中，
如果原性状占子代所有性状中的1/4，即可判断原性状为aa，之前的突变为显性突变;

㈦ 高中生物。如图。怎么判断突变是显性突变还是隐性突变

这是发生在X染色体上的显性突变。
野生型的基因型是XaXa和XaY，
突变型的雌蝇的基因型是XAXa（注意：突变只能一个基因突变），
这只突变雌蝇与野生型雄蝇交配，也就是
XAXa与XaY，
下一代是XAXa（突变型）、XaXa（野生型）、XAY（致死）、XaY（野生型）。
你自己看一下是不是与题意一致。

㈧ 怎样判断显隐性突变

表现出原来没有的性状的突变是显性突变
突变后自身不表现的性状，但后代表现了，即为隐性突变

㈨ 确定某种突变是显性突变还是隐性突变的方法有什么

无中生有为隐形，记为无语

㈩ 怎样鉴定隐性突变

如果是隐性突变，有几种方法检测。
1、自交，让突变个体自交。出现隐性性状则发生了隐性突变
2、如果是植物，可用单倍体育种技术。
3、如果显性配子和隐性配子表现出不同的特性，我们可以用花粉鉴定的方法