b细胞增殖检测方法

❶ 成熟B淋巴细胞增殖性疾病必须做哪些检查才能确诊必须化疗治疗

这样的疾病一般是需要做病理切片的方法检查就可以确诊的。是否需要化疗的方法治疗。要遵医嘱的方法治疗。

❷ 细胞增殖的研究方法

细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

❸ 体液免疫中B细胞增殖分化的条件是什么

B细胞的激活有两种，一种是需要抗原和T细胞分泌的淋巴因子共同激活，又叫T细胞依赖激活(T cell dependent activation)，一种是由抗原直接激活，也叫非T细胞依赖激活(T cell independent activation)。

B淋巴细胞亦可简称B细胞，来源于骨髓的多能干细胞。B淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝（胚胎小鼠14天或通顺儿8-9周）的造血细胞岛（island of hematopoietic cells）中，此后B淋巴细胞的产生和分化场所逐渐被骨髓所代替。

成熟的B细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小结和脾脏的红髓和白髓的淋巴小结内。B细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体（免疫球蛋白），主要执行机体的体液免疫（humoralimmunity）。

介绍：

B淋巴细胞亦可简称B细胞。来源于骨髓的多能干细胞。禽类是在法氏囊内发育生成，故又称囊依赖淋巴细胞（bursa dependent lymphocyte）/骨髓依赖性淋巴细胞简称B细胞，是由骨髓中的造血干细胞分化发育而来。与T淋巴细胞相比，它的体积略大。这种淋巴细胞受抗原刺激后，会增殖分化出大量浆细胞。浆细胞可合成和分泌抗体并在血液中循环。

在哺乳类是在类囊结构的骨髓等组织中发育的。又称骨髓依赖淋巴细胞。从骨髓来的干细胞或前B细胞，在迁入法氏囊或类囊器官后，逐步分化为有免疫潜能的B细胞。成熟的B细胞经外周血迁出，进入脾脏、淋巴结，主要分布于脾小结、脾索及淋巴小结、淋巴索及消化道粘膜下的淋巴小结中，受抗原刺激后，分化增殖为浆细胞，合成抗体，发挥体液免疫的功能。

如今使用的大多数疫苗就是通过刺激这类B淋巴细胞产生抗体的。B细胞在骨髓和集合淋巴结中的数量较T细胞多，在血液和淋巴结中的数量比T细胞少，在胸导管中则更少，仅少数参加再循环。B细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原及表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。

B1细胞为T细胞非依赖性细胞。B2为T细胞依赖性细胞。B细胞在体内存活的时间较短，仅数天至数周，但其记忆细胞在体内可长期存在。

以上内容参考：网络-B淋巴细胞

❹ B细胞增殖必须两个条件吗

B细胞增殖分化的条件有两个：1.B细胞的BCR识别抗原表位，产生第一信号。第一信号不足以活化B细胞，如只有第一信号，只能产生免疫失能，不发挥效应。2.Th细胞与B细胞表面的共刺激分子共同作用产生第二信号。从而彻底活化B细胞。（Th细胞在B细胞的体液免疫中起两个作用，一个是与B细胞表面共刺激分子作用活化B细胞，一个是分泌细胞因子刺激B细胞）

❺ 成熟B淋巴细胞增殖性疾病必须做哪些检查才能确诊必须化疗治疗

印象：淋巴细胞约占有核细胞的71%，其中
B淋巴细胞
约占淋巴细胞的85%，表达
HLA-DR
，CD5、CD11C，CD19，CD20，CD22，CD23，其中CD5+CD23+CD19+细胞约占淋巴细胞的63.90%，髓系增殖受抑。
慢淋
的疗效总的来讲是比较好的，但并不是所有的患者诊断后都需要治疗，

❻ 如何检测细胞的增殖活性，简要描述实验步骤

细胞增殖检测方法 细胞增殖检测通常是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。目前细胞增殖检测主要分为五类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞数量检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP 浓度检测。在这些方法中作何选择，主要取决于所研究的细胞类型和研究方案。 1. DNA合成检测 这是目前实验室中检测细胞增殖最准确可靠的方式。该法是将放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育，这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记，经洗脱后可用闪烁计数器检测。该方法耗时长，而且有个明显的弊端就，即使用和处理放射性物质既麻烦又不安全。不过，可以使用5-溴-2-脱氧尿苷BrdU来进行类似实验，因为BrdU也同样可以掺入到新合成的DNA中。但这样就需要进行额外的实验步骤，先孵育特异性BrdU单抗和带标记的二抗，然后再进行比色法、化学发光检测或荧光信号检测等步骤。该方法的优点就是不再需要放射性物质。BrdU标记很适合免疫组化IHC、免疫细胞化学IC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。 2. 代谢活性检测 检测细胞群体的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。在细胞增殖过程中脱氢酶的活性会增加，因此其底物四唑盐或Alamar Blue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。可以通过低配置或高配置的分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。 四种最常见的四唑盐是：MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在标准的细胞培养基中是不溶的，而且其生成的甲臜晶体需要溶解在DMSO或者异丙醇中。因此，MTT主要作为终点检测方法。其他三种盐与Alamar Blue一样，都是可溶且无毒。它们可以作为连续监控手段来跟踪细胞增殖的动态改变。其中XTT的效率较低，需要添加额外的因子；WST1更灵敏有效，与其他盐相比能够更快显色；Alamar Blue的灵敏度也很高，只要微孔板的孔中有100个细胞就能够检测到。四唑盐和Alamar Blue氧化还原染料能够用于多种仪器和高通量研究，非常方便。它们适用的检测仪器包括：标准分光光度计、荧光分光光度计和酶标仪等。

❼ 检测细胞增殖的方法有哪些

一、MTT比色：
MTT比色是一种目前被广泛采用的检测细胞生长和存活的方法，其原理是外源性MTT（四唑盐）可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成难溶的蓝紫色结晶物并沉淀在细胞中，而死细胞无此功能，DMSO（二甲基亚砜）能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联检测仪在490nm波长处检测其光密度值，可间接反映活细胞数量。在一定范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比，此方法已广泛用于检测细胞活力、观察细胞生长等方面，具有灵敏度高、重复性好、操作简便、经济、快速、易自动化、无放射性污染等特点，与细胞计数有良好的相关性。
二、rdU标记法
1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。
2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封闭。
7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
三、结晶紫法
1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。
2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。
3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。
4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。
5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。
6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。
7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。
8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。
四、酸性磷酸酶法
1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。
2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。
5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。

❽ 如何分析B细胞的功能

1.可以进行淋巴细胞增殖功能的检测，抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS，对小鼠有作用)刺激B细胞发生增殖。
2.应用抗B细胞特异性表面标志（mIG）的抗体，借助免疫荧光法可检测B细胞总数及亚群，主要用于判断原发性或继发性免疫缺陷患者的体液免疫功能。
3.ELISPOT法检测单个B细胞分泌的特异性抗体。
4.分子生物学方法的应用，如BCR基因重排检测，一般用于对血细胞恶性变如白血病、淋巴瘤等的诊断。
以上还很不全面，仅供参考。

❾ 检测细胞增殖的种类以及方法步骤

主要有四种，方法步骤如下

一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法
胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。
二、MTT检测法
MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比
三、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使C E成为一种良好的细胞标记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。
四、Br检测法
Br中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Br单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。

❿ 成熟B淋巴细胞增殖性疾病必须做哪些检查才能确诊

微小残留白血病的检测非常严格，如果检查是严格准确的，残留白血病细胞的数量在10-4（即1万个细胞里没有看到1个白血病细胞）以下，那么复发是几率就非常小。但无论任何检查，都需要根据孩子的具体情况而定。匹多莫德的用法，一般在中国性期是每天2次，每次一袋，这样用2周后，改为每天1袋，再用1-3月。如果孩子不是处于中国性期，也可以直接开始每天1袋的用法。 北京儿童医院-血液科-郑胡镛主任医师 查看原帖>