‘壹’ 鞭毛虫感染如何检查出来
1.神经症状:如失眠,头痛,乏力,眩晕,眼发黑,出汗,神经兴奋性增强,肌腱反射亢进等较为常见.
2.甲状腺机能失调:曾有人发现部分(15.5%)蓝氏贾第鞭毛虫病患者的甲状腺机能有改变,其中以甲状腺机能亢进占大多数,基础代谢增高16%~20%,部分患者可增高30%,因而也会产生甲状腺机能亢进的症状.
二胆道系统症状:蓝氏贾第鞭毛虫在胆道系统寄生,可以引起胆囊炎及胆管炎.主要症状为上腹部疼痛,食欲不振,消化不良,恶心,嗳气,胃部烧灼感,肝脾肿大,有压痛,进食油腻时加重,有时可出现黄疸.
三胃肠道症状:
1.十二指肠炎型:有似十二指肠溃疡样疼痛,伴有纳差,低血压等.X线检查多显示球部变形,甚至有溃疡征.抗虫治疗后可以消除上述症状.
2.急性或慢性阑尾炎型:症状与一般阑尾炎相似.切除的阑尾,呈炎性病变,粘膜有时可见溃疡,绒毛间可发现大量滋养体.
3.结肠炎型:主要症状有腹部钝痛,阵阵加剧,伴恶心,呕吐,腹泻,常被误诊为痢疾.
4.直肠乙状结肠炎型:与一般直肠乙状结肠炎同.用乙状结肠镜检查,可见弥漫性充血,水肿,严重者有圆形溃疡,溃疡表面覆有渗出性假膜.拭子检查可见大量滋养体.无特殊病理改变.
‘贰’ O104:H4大肠杆菌检测方法
上面说的其实都是错的,因为使用平板分离出的大肠杆菌(并且通过各种生化试验证实它是大肠杆菌)只能确定它就是大肠杆菌,并不能证明它是O104:H4
O104:H4的含义是:菌体抗原为O104,鞭毛抗原为H4。
因此正确的做法是先分离出可疑的菌落(就是大肠杆菌菌落),然后分别使用O104血清和H4血清分别对它进行玻片凝集试验,如果发现证实为大肠杆菌的菌落培养物可以被O104血清和H4血清凝集,就说明你所分离出的目标菌落为O104:H4大肠杆菌
‘叁’ 简述细菌检测的方法及优缺点
简述细菌检测的方法及优缺点:
可以直接用显微镜观察其运动情况。另外,鞭毛是细菌的运动器官,因此还可以通过检测细菌鞭毛的存在来间接判断细菌是否具有动力。记忆中的方法有这些:
1.使用显微镜
可以用普通的光学显微镜,通过一些特殊的方法观察菌液中细菌的活动情况。有条件的话还可以使用一些比较高端的显微镜,比如相差显微镜等。
2.使用半固体培养基进行培养
有鞭毛的细菌可沿穿刺线扩散生长,穿刺线周围会变模糊;无鞭毛的细菌只能沿穿刺线生长,周围澄清透明。
3.鞭毛染色
使用特殊染料染色,以方便在显微镜下观察。
4.免疫学方法
通过抗原抗体反应,检测细菌鞭毛的存在。
‘肆’ 那些方法可鉴别细菌是否有鞭毛
初步:观察其菌落边缘是否光滑,若较粗糙,可能有鞭毛
验证:在半固体培养基中穿刺培养一段时间,观察其生长状况,若呈雾状则有鞭毛,否则没有.
或者电镜下观察
‘伍’ 细菌鉴定办法有哪些,常见细菌的鉴定办法就可以
细菌的鉴定通过分离培养获得的病原菌,必须达到不含有其他微生物的纯培养程度,才能进行系统鉴定。系统鉴定就是通过病原菌的形态结构、生长特性、抗原性和病原性等检测,并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型。微生物鉴定的程序通常是根据其形态,生长、生化特性等定种,最后根据抗原的免疫血清学检查定型。(一)形态学检查各种细菌的形态,在适宜的环境下是相对稳定的。但环境的改变,如培养基条件的改变,抗生素和化学药品的作用等,均可使细菌产生不规则的形态,并可出现细胞壁的缺陷和多样性。为此,在作细菌形态鉴定时,必须按被检菌的生长要求,选择适宜的培养基和培养条件,以及适宜的培养时间和检查方法,才能作出正确的形态学鉴定。形态学检查一般包括二方面:肉眼观察和显微镜检查。1.肉眼观察肉眼观察主要观察细菌在固体、液体、半固体,鉴别培养基上的生长情况。在固体培养基上要观察菌落形态、大小、颜色是否均匀一致,表面是光滑湿润,还是干燥无光或呈皱纹状,边缘是整齐还是不规则,菌落是隆起、扁平,还是乳头样,是透明、半透明或不透明。在液体培养基中,要观察培养基是否呈均匀浑浊,管底有无沉淀,液面有无菌膜,是否产气等。在半固体培养基上应观察细菌是否沿着接种线生长,是呈毛刷样生长还是均匀生长,上下生长是否一致。在鉴别培养基上,应观察其生长情况是否与预期的相一致,在血琼脂培养基上还要观察是否溶血及溶血圈的特点,在某些培养基上还要注意是否有臭味等。2.显微镜观察在作细菌个体形态学检查时,要根据被检菌的种类和检查项目,选用相应的染色方法,同时要注意选择适合的培养基以及细菌培养的时间,才能达到预期的目的。一般以18-24小时(生长时间长的细菌除外)的幼嫩培养菌为宜。例如,作革兰氏染色检查时,培养时间长的陈旧细菌,可能由阳性变为阴性。作细菌运动性检查时,液体培养基的幼嫩培养物(几小时到十几小时)最为适宜。作炭疽荚膜染色时,因炭疽杆菌在一般培养基上不形成荚膜,而在动物体内形成明显的荚膜,因此,应先接种小鼠,取死亡动物的病料作涂片标本镜检。作鞭毛染色时,以液体培养基为宜。芽胞的形成,因细菌种类不同,往往对培养条件如培养基、空气和培养时间等而异,但一般均要求较长时间。镜检时除注意其基本形态结构和大小(要用测微计测量)外,还应注意其排列状态、菌端形状、有无两极染色、有无形成芽胞和荚胞等。必要时可用电镜观察其微细结构。3.常用的几种染色方法涂片用的载玻片需用清洁液洗净、擦干、不留油质,否则培养物不能均匀地推开。被检材料如果是肉汤培养物,用铂金耳环取一滴,均匀涂抹于载玻片上,涂抹的范围约有手指甲大即可。随后,在酒精灯火焰上加热使之固定(即火焰固定);被检材料如果是固体培养物,先滴一滴水(常用生理盐水)于载玻片上,用铂金耳环取少许培养物,在水滴中混匀,培养物不宜太多,菌体看不清楚。脓汁、淋巴液、乳汁也按同样方法制备抹片。血液和病变组织,直接涂抹在载玻片上,组织抹片也不能太厚,否则看不见细菌,细菌培养物抹片用火焰固定,组织抹片常用甲醇或甲醛固定。
‘陆’ 食品中沙门氏菌的检测方法
食品中沙门氏菌的检测方法
利用抗原-抗体反应的显着特异性,来进行细菌的鉴别和血清学定型,已有半个多世纪的历史。细菌菌体或鞭毛抗原的特异性抗体的存在,使得人们可以建立一些快速方法来检测以食品为载体的病原。已经建立的沙门氏菌免疫学检测方法有许多种,大致可分为以酶标抗体(ELISA),荧光抗体染色(免疫荧光法),同位素标记抗体(放射免疫试验)为基础的方法及其它多种以抗体为基础,利用乳胶凝集、免疫传感器、免疫扩散及免疫色谱技术的方法。但常规中最广泛采用的是以双位点ELISA技术即夹心ELISA为基础的方法。此法改进后用有放射活性的同位素替代标记抗体,概括地说,是指以固定在固体基质上的“捕捉”抗体来捕捉目标抗原,经洗涤除去未结合的成分,加入第二种酶标抗体,此者结合在捕捉到的抗原的不同位点上,第二次洗涤后加入酶作用基质,并令其与颜色成分反应,然后用分光光度法即很容易检测到目标抗原。采用微量滴定板作为固态基质使反应形式标准化,并促成其自动化。
‘柒’ 幽门螺旋秆菌的检测
1.C14呼气试验:
C14呼气试验的原理:
由于C14非常稳定,因此经常作为标记物出现。在幽门螺旋杆菌C14呼气试验中,受检者口服尿素C14胶囊后,如果胃中有幽门螺旋杆菌,其产生的尿素酶能迅速将尿素分解为二氧化碳和氨气,二氧化碳经血液进入肺而排出体外,将排除的14CO2气体(带有标记物)收集后,在仪器上测量,即可判断胃内有无幽门螺旋杆菌。
C14呼气试验检测方法和流程介绍:
1.受试者需空腹进行检查。
2.口服14C尿素胶囊。
3.静坐25分钟左右。
4.向集气瓶(集气瓶内德液体变为无色或者时间达到3分钟以上停止呼气)或者二氧化碳吸收剂呼气(呼气3分钟,试纸变为金黄色为止)
5.交给医生植入仪器中进行检测。
C14呼吸实验检测标准:
C14正常值为小于100(dpm/mmol CO2)为阴性,大于100为阳性。例如:hp.阳性++ dpm=854,这份报告中,数值大于100,因此被判断为幽门螺旋杆菌阳性。
C13呼气试验原理介绍:
因为HP细菌内有尿素酶,当它在胃内遇到吞下的13C-尿素,就会把它分解成13CO2,13CO2经胃肠道吸收经血液循环到达肺后随呼气排出。我们只要收集呼出的气体,测定其中的13C标记的13CO2,就可准确地证明有没有HP感染。
正常人没有HP,13C-尿素不分解,13C-尿素经泌尿系统排出,呼出的气体中就没有13CO2。
而幽门螺旋杆菌感染者,体内有幽门螺旋杆菌,能够将13C-尿素分解,所以呼出的气体中就有13CO2
检测过程:
1.呼气要完全,左手手握试管,右手拿好瓶盖,向试管尽力吹气4-5秒钟,当吹气管离开玻璃管时,右手立即旋紧瓶盖。
2.呼气检测的时间要正确:
a.第一次在服药丸前(白帽)
b.第二次在服药丸后20分钟(蓝帽)
c.第三次在服药丸后30分钟(红帽)
3.整个过程约为45分钟
4.一般2个工作日就可取报告
C13呼气试验阳性标准:
测定结果为超级准DOB
诊断标准:
幽门螺旋杆菌诊断阳性:DOB>4.4
幽门螺旋杆菌诊断阴性:DOB<3.6
幽门螺旋杆菌治疗:
目前比较常用的幽门螺旋杆菌治疗方法,主要有三联疗法、四联疗法、卫悦可益生菌疗法、序贯疗法等几种,其中序贯疗法主要作为二线补救治疗。
‘捌’ 如何初步判断并进一步检验某一细菌是否长有鞭毛
1,观察菌落是否粗糙,粗糙,可能有
2,光镜,鞭毛染色法,染料沉积
3,电镜
4,暗视野,悬滴标本或水浸
5,琼脂半固体直立柱穿刺线
‘玖’ 肥达试验的原理、方法、结果判断及临床应用分别是什么CNKI改良的肥达试验又如何
肥达凝集试验检测伤寒杆菌
伤寒是由伤寒杆菌引起的急性肠道传染病,病理学改变主要是全身单核细胞巨噬细胞系统的增生性反应,尤以回肠下段淋巴组织病变最明显。临床特征为持续发热、相对缓脉、全身中毒症状、消化道症状、玫瑰疹、肝脾大及白细胞减少等。肠出血、肠穿孔为主要的严重并发症。以儿童及青壮年为多见,病后有持久免疫力。流行多发生在卫生条件不良的地区,以夏季和秋季多见。常见的实验室检查为肥达凝集试验。
[检测方法] 肥达凝集试验
[标本准备] 血清,静脉血3ml不抗凝。
[方法学原理] 用已知伤寒沙门菌菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原及甲、乙、丙3种副伤寒沙门菌鞭毛抗原的诊断菌液,与被检血清作细菌凝集反应。若被检血清中有抗体存在,可与相应抗原起反应,出现肉眼可见的凝集现象为阳性。
[试剂] 诊断菌液有伤寒O、H及副伤寒A、B、C,共5种。使用时用生理盐水稀释成每毫升含7~10亿个菌的悬液备用。
[检测步骤
1.取lOmm×lOOmm试管5排,每排8支。
2.另取15mm×lOOmm试管1支,加生理盐水4.75m1及患者血清0.25ml混合,成为1:20稀释血清。
3.每排第l管内各加1:20稀释血清0.5ml。
4.在剩余的2.5ml稀释血清(1:20)中加人生理盐水2.5ml,成为1:40稀释血清。
5.再取1:40的血清,分别加入每排第2管中,每管0.5ml。在剩余的2.5ml稀释血清(1;40)中,加入生理盐水2.5ml,成为1;80稀释,再加入每排第3管中,每管0.5ml,如此操作,直至加完每排第7管为止。
6.每排最后1管各加生理盐水0.5ml,作为不含血清的菌液对照。
7.取5种菌液充分摇匀,每种菌液加1排,血清最终稀释度分别为1;40、1;80、1:160直至1:2 560。振荡混合,置37C水浴16~20h后观察结果。
[结果判断] 先观察液体部分清晰程度,然后轻轻摇动试管,观察管底有无凝块浮起:
1.液体澄清、管底有凝块、细菌完全凝集者(100%凝集),为栅++++。
2.液体微混浊、管底有明显凝块、细菌大部分凝集者(75%凝集),为+++。
3.液体较混浊、管底有明显凝块、细菌中度凝集者(50%凝集),为++。
4.液体混浊、管底无凝块、细菌轻度凝集者(25%凝集),为+。
5.液体混浊、无凝集现象,为阴性。
6.对照管均匀混浊无凝集现象。
7.被检血清出现++凝集的最高稀释倍数为凝集效价。如第3管出现仲凝集,则判为1:160阳性;如各管均无凝集现象,则判为
[正常参考值] 伤寒沙门H凝集效价1:80以下,伤寒沙门菌O凝集效价及各型副伤寒沙门H凝集效价均在1:40以下。
[注意事项]
1.过去曾预防接种伤寒、副伤寒疫苗者,H抗体效价明显升高,并持续数年,而O抗体低于正常值。
2.以往患过伤寒病或曾接种伤寒疫苗,新近又感染流行性感冒或布鲁病,可产生高效价H抗体,O抗体则较低,但H抗体很快消失,此种反应称回忆反应。
3.由于人们在日常生活中可能发生隐性感染而产生抗体,尤其在流行地区正常人的凝集效价可稍高,故在判断结果时应考虑本地区正常人群的自然凝集效价水平作为参考。
4.沙门菌属各菌种之间有某种共同抗原,在凝集试验中可能出现类属交叉凝集反应,但效价较低。
5.阴性结果不能完全排除伤寒的可能,应注意有10%左右已确诊为伤寒者在整个病程中抗体效价始终不升高。这可能与早期应用抗生素、药物抑制、免疫耐受和缺陷有关。
6.肥达反应特异性不高,机体免疫功能紊乱、结核、败血症、病毒性肝炎及部分血吸虫患者可出现假阳性反应。
7.溶血、菌液过浓等均会影响结果。菌液过期或产生自凝者不宜使用。
[临床意义]
L肥达反应通常第1周阳性率仅10%,第2周约50%,第3、4周可达80%-90%,阳性率逐周上升,可达70%~90%,但假阳性率亦达10%~20%。
2.接种伤寒疫苗者亦可出现阳性反应,早期应用抗菌药物治疗者可出现阴性反应。
3.检验结果分别以O、H、A、B、C表示凝集试验中伤寒杆菌菌体抗原、鞭毛抗原、甲乙丙鞭毛抗原的相应特异性抗体,双份血清抗体效价O≥1:80及H≥1:160者亦有诊断价值。由于伤寒杆菌和副伤寒杆菌具有部分相同的菌体抗原,所以仅有O抗体的升高不能区分伤寒及副伤寒,须依靠HOAB抗体加以区别。
4.接种伤寒疫苗或患过伤寒者,发热可引起回忆反应而出现假阳性结果。仅有O抗体阳性,而H抗体阴性可能是疾病早期;仅有H抗体阳性而O抗体阴性,提示曾经预防接种或患过伤寒。
‘拾’ 鞭毛染色法准确鉴定细菌是否具有鞭毛,要注意哪些细节
鞭毛是细菌的运动“器官”,细菌是否具有鞭毛,以及鞭毛的数目和附着于细菌的位置是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤细。除了很少数形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛的存在外,多数细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到。要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛,必须用鞭毛染色法。
鞭毛染色的基本原理是在染色前先用媒染剂处理,使它沉积在鞭毛上,使鞭毛直径加粗,然后再进行染色。
1、实验材料
①鞭毛染色液。
②菌种。有鞭毛的细菌。
③其他。玻片、接种环、吸管等。
2、注意事项
①良好的培养物是鞭毛染色成功的基本条件,不宜用陈旧培养物作鞭毛染色的菌种材料,因为老龄细菌鞭毛容易脱落。
②玻片应光滑、洁净,不可带油迹。不洁净的载玻片可经含适量洗衣粉的水中煮沸约20min,取出后用清水充分洗净,沥干水后置95%酒精中处理,用时取出在火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。
③挑取菌时,尽可能不带培养基。
④配制合格的染色剂(尤其是B液 )、充分洗去A液再加B液、掌握好B液的染色时间均是鞭毛染色成败的关键。(1)改良Ryn鞭毛染色法
①玻片的处理。要求用新的载玻片,用前须在95%酒精中浸泡24h以上,用时从酒精中取出,以干净纱布擦干后使用。
②在玻片上滴蒸馏水两滴。1张玻片上可同时制2个涂片。
③用接种环挑取血平板上菌少许,将细菌点在玻片上的蒸馏水滴的顶部,一般只需点一下,只允许极少量的细菌进入水滴,不可搅动,以免鞭毛脱落。
④玻片置室温自然干燥 。
⑤滴加染液于玻片上染色。
⑥约10—15min后,用自来水缓慢冲去染液,冲洗时应避免染液表面的金属光泽膜滞留在玻片上,影响镜检。
⑦玻片自然干燥后,镜检时应以涂片的边缘开始,逐渐移向中心。原因是边缘细菌较少且相互分开,鞭毛容易观察。细菌密集的地方鞭毛被菌体挡住,不易观察。
结果:菌体和鞭毛均染成淡紫色。
(2)硝酸银染色法
①活化菌种。冰箱中保存的菌种,通常要连续移种1—2次后,接种于新配制的营养琼脂斜面(表面较湿润、基部有冷凝水),28—32°培养10—14h,取斜面和冷凝水交接处培养物作染色材料;或点种于新制备的营养琼脂(含8—10g/l的琼脂 )平板中央,28—32°培养18—30h,让菌种扩散生长,取菌落边缘的菌苔(不要取菌落 中央的菌苔 )作染色材料。
②制备菌液。取斜面或平板菌种培养物数环于盛有1—2ml无菌水的试管中,制成轻度浑浊的菌悬液用于制片。也可用培养物直接制片,但效果往往不如先制备菌液好。
③制片。取一滴菌液于载玻片的一端,然后将玻片倾斜,使菌液缓缓流 向另一端,用吸水纸吸去玻片下端多余菌液,室温(或 162温室)自然干燥 。干后应尽快染色。
④染色。滴加硝酸银染色A液,染3—5min,用蒸馏水充分洗去A液。用B液冲去残水后,再加B液覆盖涂片染色约数秒至1min,当涂面出现明显褐色时,立即用蒸馏水冲洗。若加B液后显色较慢,可用微火加热,直至显褐色时立即水洗。自然干燥 。
⑤镜检。用油镜观察。观察时,可从玻片的一端逐渐移至另一端,有时只在涂片的一定部位观察到鞭毛。
结果:菌体呈深褐色,鞭毛显褐色。
(3)改良的Leifson染色法
①活化菌种同硝酸银染色法。
②制片。用记号笔在载玻片反面将玻片分成3—4个等分区,在每一小区的一端放一小滴菌液。将玻片倾斜,让菌液流到小区的另一端,用滤纸吸去多余的菌液。室温或37°, 自然干燥 。
③染色。加Leifson染色液覆盖第一区的涂面,数分钟后,加染液于第二区涂面,如此继续染第三区、第四区。在染色过程中注意观察,当整个玻片都出现铁锈色沉淀、染料表面出现金色膜时,直接用水轻轻冲洗(不要先倾去染料再清洗,否则背景不清 ),染色时间大约10min。
④镜检。自然干燥后,油镜检查。
结果:菌体和鞭毛均呈红色。