检测蛋白核酸抗体的方法汇总

① 核酸检测有哪些方法

新冠病毒核酸检测怎么做？

新型冠状病毒肺炎疫情期间，大家在做好个人防护的同时，对于疫情动态也十分关注。原本冬春交际时节就是普通感冒和流感高发的时间段，而控制疫情最重要的手段，就是从众多呼吸道患者中筛选出真正的新冠肺炎患者。那么，新冠肺炎是怎么诊断的呢？

新冠肺炎怎么诊断？
首先，新冠肺炎患者通常是有症状的，尽管有一些患者的症状很轻微。做了血常规以及胸部影像学检查，就可以提示是否有新冠病毒肺炎的可能性。当然，新冠肺炎的确诊还是要靠新冠病毒核酸的检测。不久之后还可能出现血液抗体的检测，以帮助确诊新冠肺炎。

新冠病毒核酸检测怎么做？
新型冠状病毒的核酸检测的取样方法既不需要开刀也不需要打针，只要“轻轻一抹”。

到了发热门诊或者是相应的检查室，医生会让病人张开嘴，用一个像棉签一样的拭子去擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物，也可以通过鼻腔取鼻咽后部的分泌物，然后放到试管里面，再交给检验科去做相应的病毒核酸的检查。

X光胸片是否能作为新冠肺炎的诊断手段呢？
其实X光胸片也是可以提示新冠病毒肺炎的。随着积累的病例的总结，可以发现新冠病毒肺炎在胸片上面的影像很淡薄，分布是周边的。因此在分布较好的胸片上也是可以看到的。

对于新冠肺炎最好、最敏感的影像学检查手段就是胸部CT。在胸部CT每个扫描后的层面，可以看到胸片看不到的某些角度以及更淡薄的影子，这样就可以早期提示患者可能患有病毒性肺炎。一旦出现这些特征，就要结合核酸的检测，对病人进行新冠病毒肺炎的确诊。

查血能否确诊新型冠状病毒肺炎呢？
有研究证明，新型冠状病毒肺炎患者的血液中查到病毒的核酸的比例较少，只有15%到20%。机体对新冠病毒入侵后，机体会产生特异性抗体，新冠病毒抗体IgM、IgG是可以在血液中检测到的。但是，病人感染新型冠状病毒后5天后才会先出现IgM，随后才会出现IgG。

目前，我们国家的科研人员做了大量的工作。对于新冠病毒血液检测的方面，现在我国的科研人员也在集中精力，加快提高检测的技术的优化，以提高它的特异性和敏感性。

② 核酸检验方法

核酸检测具体流程如下：
1. 核酸提取
使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。
2. 逆转录合成cDNA
逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。建议使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。
3. PCR扩增反应（使用二次扩增的套式PCR扩增方法）
PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板（DNA或cDNA）。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。
4. 扩增产物定性分析
扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。自动化核酸扩增仪使用酶联比色分析或荧光探针杂交等原理测定。
5.结果判定和完成报告单
（1）实验成立的条件：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。
（2）HIV核酸检测阳性：发现核酸阳性反应，应该重复采集样品进行复测，复测结果呈核酸阳性反应则判定为核酸阳性，复测结果为核酸阴性反应则判为不确定结果，需进一步随访检测。
（3）HIV核酸检测阴性：只可报告本次实验结果阴性。
（4）应在完成检测后5个工作日内发出检测报告。

③ 检测核酸纯度方法

最近重新研读了分子克隆第三版，有一个有趣的小发现，好像过去没听人说过。一般测核酸浓度都是用260nm的光吸收值来决定，同时用260/280的比值来判断有无蛋白质污染。理想的比值是1.8~2.0左右。分子克隆第三版专门提到这种判断核酸纯度的办法是不可靠的。原因在于蛋白质在260nm的消光系数比核酸小很多，即使有相当多的蛋白质污染，这个比值还是接近于理想的比值。另外，260/280比值尤其不能用于评判寡聚核甘酸的纯度，因为嘌呤的消光系数比嘧啶大好多，寡聚核甘酸嘌呤嘧啶组成很可能不平均，所以很可能出现很纯的样品260/280比值却比较小的情况。 

你所说的‘消光系数‘，是否就是吸光值的意思？如果你用连续波长测过核酸的吸光度时，就会发现，OD260,恰好是核酸吸光值最大的时候，从200-750,是一条曲线，260时是波峰，而280时，刚好是曲线下降到一半左右时的吸光值。而恰好280又是蛋白质的最佳吸收值。如果纯的核酸，那曲线就是标准的，260/280就是1.8-2.0之间，如果混有蛋白质，多肽，酚之类的杂质，那280时的吸收峰就变高了，曲线随之发生变形，而260时的吸收峰不变。就如你所说的“原因在 于蛋白质在260nm的消光系数比核酸小很多”，因此260的吸收峰几乎不变。但280时却不一样。这时相反，核酸的消化系数比蛋白质小的多，因此，一旦有污染，280上升很快。因此260/280在有污染的情况下就会变小。所以，用260/280的方法，还是比较可靠的。当然更可靠的，就是用200-750的波长，连续扫描。直接观察核酸的整条曲线，那比光靠260,280两个吸收值，肯定要准确很多。其实平时在我们检测时，我们也会检测230,320,两个值。至于这两值的作用，我稍后再说。其实有230,260,280,320,这四个点。基本上也能确定下这条曲线的该一段的形状了。

A 260 / A 280 的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者 2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A 320 一般是 0。（320差不多也就是那条曲线刚下降到0的时候）。所以，当我们检测260/280后，如果比值在1.8-2.0之间时，我们可以说其纯度可以，那OD260的值就有效。否则，OD260的值判为无效。你说的嘌噙与嘧啶的吸光值，确实没错。但一般情况下，我们测的都是基因组、tRNA，mRNA、cDNA，所以其CG含量都比较均匀。都适用于这种方法。然而，在测某些CG含量明显不均匀的情况下，比如人工合成的寡核苷酸、引物，在CG含量过大或者过小的情况下，我们就不能用260/280的方法了。不过一般自已合成的引物，都能保证纯度的，买来的引物，或者托公司合成的寡核苷酸，也不需要我们用OD值方法重新测一下。因为产品包装上写着多少个OD，序列长度，都非常详细，纯度也是有保证的。

当OD 260/ OD280值=1.8说明所提的DNA质粒的纯度比较高，所含的RNA或蛋白质污染很少，当 OD 260/ OD280值>1.8，说明有RNA污染，当OD 260/ OD280值<1.8时,说明所提的DNA中有蛋白质或者是抽提时用的苯酚未除净，楼主所体的质粒DNA的260/280在2.0左右，说明有一定的RNA污染，在提质粒DNA中，一般是在提完质粒后，加入TE溶液时加入一定量的RNA酶。抽提1.5ml大肠杆菌过夜菌液时，最后加入20ul的TE溶液时加入1.5ul浓度为10mg/ml的RNA酶，一般就可以完全去除质粒中所含的RNA污染

有关RNA的吸光度说明如下：260nm、320nm、230nm、280nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白质等有机物的吸光度值。OD260/OD280（R）体现了RNA中的蛋白质等有机物的污染程度，质量较好的RNA的R值应在1.8～2.0之间，当R<1.8时，溶液中的蛋白质等有机物的污染比较明显；当R>2.2时，说明RNA已经被水解成了单核苷酸。在对核酸进行吸光度检测时，需要注意稀释液应使用TEBuffer。

④ 在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质相对分子量的方法

最简单的就是电泳，核酸通过琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质通过SDS-PAGE

⑤ 用什么方法可以测定核酸、蛋白质、糖类或酶等生物大分子在细胞内的分布和含量

具体物质有具体的化学方法.
但可以用荧光抗体,即将待测细胞和这种抗体混匀,之后观察.抗体只能和某种待测物质结合,结合的部分发出荧光就可以观察到在细胞内的分布情况了.但制备抗体相对麻烦

⑥ 蛋白质表达检测有哪几种方法

有三种，第一是用DNA探针检测，看目的基因是否存在。第二种是用mRNA做探针，看是否有由DNA转录形成的mRNA，原理和前面是一样的，利用碱基互补配对原则。前面两种都是在分子水平检测，第三种是在个体水平直接检测的。比如：直接拿害虫去侵蚀抗虫棉

⑦ 核酸检测的方式都有什么

核酸检测主要有酸检测试剂、抗体检测两种方法，第一种方法通常是通过咽拭子进行PCR检测，基因扩增，然后再进行核酸检测。 而抗体检测是选择抽血，抽血的方法得出结果看，观察其抗体滴度是否升高，这种情况常常是指在抽血前常出现不能产生抗体的情况。

核酸检测是一种“进行时”检测，通过聚合酶链反应等方法检测病毒基因组中特定的核酸序列，从而判断被检测者此刻是否感染了病毒。

与核酸检测不同，新冠病毒抗体检测显示的是哪些人曾经被感染。抗体检测又被称为血清学检测，目的是检测血液样本中的抗体。人体感染病毒后，会产生IgM或IgG抗体。

被感染初期，人体会迅速产生IgM抗体，以抗感染；相比之下，产生IgG抗体的速度更慢，但IgG抗体保留时间更长。抗体检测就是检测血清中是否有这些特异性抗体，以确定被测试者是否曾被感染。

(7)检测蛋白核酸抗体的方法汇总扩展阅读：

六种人不宜做核酸检测

一、釆样前30分钟，对于有吸烟、喝酒、嚼口香糖等人群不宜做核酸检测，以免影响检测的准确度。

二、进食太饱的人不宜做核酸检测，否则容易发生恶心呕吐，影响采用结果的准确性。

三、核酸检测前有口服抗病毒和抗感染的药物的，应推迟做核酸检测，避免影响检测结果。

四、若是进行鼻拭子采样的话，对于鼻咽部有病症的急性期，如出血、水肿等人群可以暂不予检测。

五、刚进行核酸检测时出现恶心呕吐的人，应暂缓做核酸检测，需等检测者缓解后再予以进行。

六、被采样者用手或其他物品触及拭子采样冠、棉签的前端的不宜进行，否则容易造成污染，影响检测结果，需更换进行重做。

⑧ 核酸检测方法有哪些

核酸检测采用咽拭子检测，有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。

口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦，刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情，张口发出“啊——”的声音就可以了，检测过程并没有创伤风险，是非常安全的检测。

检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉，不过这些不适症状通常只需要半分钟到两分钟左右就可以完全缓解了。鼻咽拭子采样是将一根细棉签深入鼻孔，从下鼻道深入抵达鼻咽后壁，然后捻转棉签取样。棉签进入鼻腔的深度约为鼻尖到耳垂的距离。

(8)检测蛋白核酸抗体的方法汇总扩展阅读：

核酸检测相关知识：

核酸检测是检测病毒的方法，它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测，可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染，以及推测是否具有传染性。

季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份，从而判断被检测者是否属于感染者。

新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了，只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分，可以尽早发现感染者，甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。

感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除，不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。

⑨ 核酸检测的方法

核酸检测主要是鼻拭子或咽拭子法，经由鼻孔或口腔插入取得上呼吸道分泌物标本后送实验室检测。核酸检测主要是指目前对于新型冠状病毒肺炎的一种确诊的实验手段，核酸检测一般分为鼻拭子、咽拭子或者肺泡灌洗液以及痰液，通过呼吸道的标本，我们在实验室里可以检测2019新型冠状病毒的核酸，从而作为临床诊断的一个重要的依据。那临床上目前最常采用的检测方法是鼻拭子或者是咽拭子，操作的时候由医护人员采用特制的长柄取样的棉签，经由鼻孔或者经由口腔插入到鼻腔及咽腔中，在咽喉壁或者鼻腔的粘膜上进行涂抹，取得上呼吸道分泌物标本，这个标本取出之后再送到实验室进行相关的核酸检测。在做的过程中患者不用紧张，可能会有一些轻微的不适例如恶心，相信配合好医护人员的话，能够很快完成这个检查，不会给您带来很大的影响。