㈠ 细胞能量代谢分析系统检测效果怎样
主要有四种检测,效果都挺好的,方法步骤如下
一、胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法
胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的碱基,也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程,通过测定细胞的放射性强度,可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。
二、MTT检测法
MTT检测法主要反映细胞的能量代谢,是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法,其原理是在活细胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲(Formazan),生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比
三、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)检测法
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团,使C E成为一种良好的细胞标记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时,CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样,在一个增殖的细胞群中,各连续代细胞的荧光强度呈对递减,利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。
四、Br检测法
Br中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷,为胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活体注射或细胞培养加入,而后利用抗Br单克隆抗体,ICC染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。
㈡ 怎么判断细胞代谢水平
1.机体细胞中
与
比值升高.
2、
数量较多.因为
旺盛的细胞需要能量多
3、
的量多.细胞代谢旺盛时需要大量蛋白质进行生命活动,
于蛋白质的合成有关
4、
相对较大.因为
与
形成有关
5、核孔相对较多.细胞代谢旺盛时需要大量蛋白质进行生命活动,而
时的模版mRNA在
内形成后是通过核孔进入
的 可以好评吗?新年快乐哦!(右上角采纳)
(1)生物学检测法:又称生物活性检测,是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。生物活性检测法又可分为: 1、细胞增殖法; 2、靶细胞杀伤法; 3、细胞因子诱导的产物分析法; 4、细胞病变抑制法。
(2)免疫学检测法:细胞因子均为蛋白或多肽,具有较强的抗原性,可利用抗原抗体特异性反应的特性,用免疫学技术定量检测细胞因子,常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印迹法
(3)分子生物学方法:目前公认的细胞因子的基因均已克隆化,较容易地得到某一细胞因子cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。常使用斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR,细胞或组织原位杂交等。具有灵敏、快速等优点,甚至从l~10个细胞中就可检出其中的特异mRNA
㈣ 检测细胞增殖的方法有哪些
一、MTT比色:
MTT比色是一种目前被广泛采用的检测细胞生长和存活的方法,其原理是外源性MTT(四唑盐)可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成难溶的蓝紫色结晶物并沉淀在细胞中,而死细胞无此功能,DMSO(二甲基亚砜)能溶解细胞中的紫色结晶物,用酶联检测仪在490nm波长处检测其光密度值,可间接反映活细胞数量。在一定范围内,MTT结晶物形成的量与细胞数成正比,此方法已广泛用于检测细胞活力、观察细胞生长等方面,具有灵敏度高、重复性好、操作简便、经济、快速、易自动化、无放射性污染等特点,与细胞计数有良好的相关性。
二、rdU标记法
1.细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0期。
2.终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。
3.弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。
4.甲醇/醋酸固定10min。
5.经固定的玻片空气干燥,0.3%H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6.5%正常兔血清封闭。
7.甲酰胺100℃,5min变性核酸。
8.冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗(工作浓度1:50),阴性对照加PBS或血清。
9.按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数(LI)。
三、结晶紫法
1.体外细胞培养结束后,去培养液,加入11%的戊二醛固定,置于振荡器上摇20min。
2.固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。
3.置空气或烘箱37℃彻底干燥。
4.加入0.1%的结晶紫液对细胞染色,振摇30min。
5.用蒸馏水洗涤,至多余的结晶紫液冲洗干净。
6.置空气或37℃烘箱中彻底干燥。
7.加入10%的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。
8.1h后在酶标仪上测定光吸收度,波长595nm。
四、酸性磷酸酶法
1.96孔细胞培养板中培养细胞,去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次(如为悬浮细胞则用离心洗涤)。
2.去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。
3.37℃,孵育1~4h。
4.加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。
5.在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度,将细胞培养板其中不含细胞,同样处理过的一孔作为空白对照,所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照,以细胞数为X轴,光吸收度为Y轴,可作直线回归,可推算出每孔中的细胞。
㈤ 细胞活性检测的方法有多少种 每种的原理是什么
简单说几个把
染色体法 主要在培养基中利用死活细胞对燃料亲和力不同 来判断
克隆形成实验 原理是单个细胞在体外增至六代后,后代形成的细胞群体 ,通过计算其克隆形成率 来判断
比色法 也是比较经典的 M,RR 活体细胞中的线粒体中的琥珀酸脱氢酶可以将M,rr还原成蓝紫色的结晶甲醋 死细胞无此功能
㈥ 如何检测细胞的增殖活性,简要描述实验步骤
细胞增殖检测方法 细胞增殖检测通常是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。目前细胞增殖检测主要分为五类:DNA合成检测、代谢活性检测、细胞数量检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP 浓度检测。在这些方法中作何选择,主要取决于所研究的细胞类型和研究方案。 1. DNA合成检测 这是目前实验室中检测细胞增殖最准确可靠的方式。该法是将放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育,这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记,经洗脱后可用闪烁计数器检测。该方法耗时长,而且有个明显的弊端就,即使用和处理放射性物质既麻烦又不安全。不过,可以使用5-溴-2-脱氧尿苷BrdU来进行类似实验,因为BrdU也同样可以掺入到新合成的DNA中。但这样就需要进行额外的实验步骤,先孵育特异性BrdU单抗和带标记的二抗,然后再进行比色法、化学发光检测或荧光信号检测等步骤。该方法的优点就是不再需要放射性物质。BrdU标记很适合免疫组化IHC、免疫细胞化学IC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。 2. 代谢活性检测 检测细胞群体的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。在细胞增殖过程中脱氢酶的活性会增加,因此其底物四唑盐或Alamar Blue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少,形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。可以通过低配置或高配置的分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度,从而衡量细胞的代谢活性,检测细胞增殖的情况。 四种最常见的四唑盐是:MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在标准的细胞培养基中是不溶的,而且其生成的甲臜晶体需要溶解在DMSO或者异丙醇中。因此,MTT主要作为终点检测方法。其他三种盐与Alamar Blue一样,都是可溶且无毒。它们可以作为连续监控手段来跟踪细胞增殖的动态改变。其中XTT的效率较低,需要添加额外的因子;WST1更灵敏有效,与其他盐相比能够更快显色;Alamar Blue的灵敏度也很高,只要微孔板的孔中有100个细胞就能够检测到。四唑盐和Alamar Blue氧化还原染料能够用于多种仪器和高通量研究,非常方便。它们适用的检测仪器包括:标准分光光度计、荧光分光光度计和酶标仪等。
㈦ 细胞活性检测的方法有多少种 每种的原理是什么
在目前的细胞活性检测方法中,MTT法是较早且较为经典的方法。但是,由于MTT法形成的甲物是非水溶性的,需要加有机溶剂溶解,这不仅增加了研究人员的工作量,也给实验带来了一定的误差。在这里我们向大家介绍一种国外最新检测方法—CCK-8法,它具有方便、灵敏、快速、无放射性、重复性好的特点。现在已广泛用于细胞增殖检测、细胞毒性检测、药物筛选、药敏试验等。
另外还将向大家介绍几种氧化应激和蛋白质抗体标记的新方法。
内容:
1、新型细胞活性检测方法介绍
2、国外氧化应激测定方法介绍
3、蛋白质抗体标记的新方法介绍
原理恕在下不知
㈧ 细胞的代谢是怎样进行的
在常温常压下,在酶的催化作用下进行的。
㈨ 求细胞周期检测方法:PI法操作步骤
1. 细胞培养:取对数生长期的细胞,按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内,进行所需的处理(比如加入药物),特定时间后终止培养,进行下一步的实验。
2. 细胞固定: 800rpm离心5min,收集细胞沉淀,弃上清,用预冷PBS洗涤两次,加入预冷75%乙醇,于4℃固定4h以上。
3. 细胞染色:1500rpm离心5min,弃上清,以3mL的PBS洗涤一次,加入400uL溴化乙锭(PI,50ug/mL),100ul RNase A(100ug/mL ),4℃避光孵育30min。
4. 流式分析: 以标准程序用流式细胞仪检测,一般计数2~3万个细胞,结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
㈩ 细胞活性检测的方法有多少种
细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、 3H 放射性同位素掺入法、 MTT 法等。其中 MTT 法以其快速简便,不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。但 MTT 法形成的 Formazan 为水不溶性的,需要加有机溶剂溶解,由于在去上清操作时会有可能带走小部分的 Formazan ,故有时重复性略差。为了解决这个问题,研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类:如 XTT 、 CCK-8 ( WST-8 )等。