‘壹’ 基因工程中标记基因是怎样工作的
您好:标记基因也和其它基因一样 正常表达
例如四环素抗性基因 表达之后 就可以抗四环素
人为添加四环素 就可以筛选出具有抗四环素的细胞 这样的细胞 目的基因就可能存在了
这就是标记基因的作用
‘贰’ 标记基因
“难道说目的基因能够激发标记基因表达???”
不是的,2个基因有分别的启动子。而抗药基因的启动子始终是处于激活状态。
标记基因这个名字起的不好,应该是筛选基因,比较好理解。
当目的基因和抗药基因在同一质粒时,抗药基因用来分离成功转染了该质粒的细菌。没有转染的细菌就不能存活。“这样所谓质粒的优越性又在哪里?” 这样很简便。不用一个一个细菌来检测是否有目的基因。
‘叁’ 有关标记基因的一点问题,有图片。
重组质粒含有抗卡那霉素基因(第一步),一般是编码乙酰化酶的。农杆菌转染重组质粒就可以存活于有卡那霉素的培养基。而没有转染的则不能。
通过此方法筛选成功转染的农杆菌,也就是带有目的基因的农杆菌。
‘肆’ 标记基因有什么作用使用标记基因如何能知道目的基因已插入
用于快速检测质粒是否转移进入了靶细胞
通常使用绿色萤光蛋白基因(多用于动植物细胞)或者抗性基因 (细菌)
DHFR基因(中国仓鼠卵巢细胞制备单抗,干扰素)
‘伍’ 标记基因到底有什么用
(1)抗虫棉基因是基因范畴,而且基因是片段来的不可以直接进入宿主细胞(容易降解)即需要把抗虫棉的基因先连接到质粒载体上(或病毒载体),保证基因的稳定性,进入宿主细胞后仍然可以完好存在
(2)质粒载体上带有复制启动子和转录启动子可保证,连接到载体上的抗虫棉基因可以正常复制和表达
(3)连接到抗虫棉基因的载体,看不见摸不着,你怎么能确定基因连接入载体呢?即使你确定了连接如载体,载体在进入宿主细胞后是否可以表达呢?这两个问题,最好的解决办法是在连接抗虫棉基因进入载体时候,同时连接一个标记基因,方便观察你构建好的载体是不是正确的,是不是能够表达,表达是不是稳定(4)得到可以稳定表达的细胞了,然后植物培养得到抗虫棉,再去用棉铃虫感染抗虫棉,如果观察到死亡,说明你抗虫棉基因不仅表达了,而且有功能,否则蛋白没有功能
因此,从以上几个不走来看,棉铃虫的作用和标记基因没有直接关系
如果还不清楚,先去搞清楚转基因植物是怎么得到的
‘陆’ 标记基因怎么标
标记基因是一种已知功能或已知序列的基因,能够起着特异性标记的作用。(在基因工程意义上来说,它是重组DNA载体的重要标记,通常用来检验转化成功与否;在基因定位意义上来说,它是对目的基因进行标志的工具,通常用来检测目的基因在细胞中的定位。)
所以标记基因不是被标记了的基因,是用来标记DNA的基因。
比如,在构建DNA载体的时候,需要一段抗青霉素基因来标记质粒,这样转入细菌后可以轻松的通过细菌有没有青霉素抗性知道质粒有没有被导入。
还有,若要标记基因的时候,把含这种基因的细菌放在含放射性同位素的培养基上培养,即可使DNA被标记。若是标记病毒的DNA把病毒放在被标记了的细菌上培育。
‘柒’ 标记基因作为重组DNA载体的重要标记的问题
在基因工程中当然会出现外源DNA没有整合到质粒上的现象。
受体是否具有青霉素抗性只能证明受体细胞获得了质粒,至于是有没有连接上外源DNA片段的质粒则是一般不知道的。因此一般使用双选法。即有一个标记基因是抗性基因,另一个基因常用的是lacZ基因。这样通过蓝白斑筛选可获得转入了重组质粒的细胞。
‘捌’ 标记基因的问题
问的问题太好了,这可能是你们上课时没有讲清楚。
实际上可以采用印章法。
将目的基因插入到四环素抗性基因所在的位置,就将四环素抗性基因破坏了,将这样的质粒导入受体细胞中,则受体细胞只能在含有氨苄青霉素的培养基上生长,而不能在含有四环素的培养基上生长,
将这些细胞培养在只含氨苄青霉素的培养基上,那么导入的不没有导入的都生长,然后用无菌布在该培养基上盖一下,再在另一个只含有四环素的培养基上印一下,看看哪些地方生长,如果在有四环素的培养基上生长的,说明没有插入目的基因,则原来在含氨苄青霉素的培养基上相应的位置的就不是我们所需要的,而另一些就是我们所需要的。
(我大概一年不上QQ了,没有时间)
‘玖’ 怎么理解标记基因请进来耐心看补充
标记基因都是很容易被转录和表达的基因。选择标记基因的一个原则就是很容易表达或者经过人为的诱导就能表达。因此,像你所举的这个例子,含有青霉素抗性基因一旦进入大肠杆菌,就能表达青霉素抗性。