㈠ 检测转基因生物是否转录出mRNA,应通过何种分子杂交方法实现
检测目的基因是否导入用的是DNA-DNA分子杂交,检测是否转录用DNA-RNA分子杂交,检测是否翻译用抗原-抗体杂交。
前两者都是通过一条被标记的DNA单链作为基因探针来实现的。这个探针具体的做法就是:用目的基因转录出的mRNA为模板,以被放射性同位素标记的脱氧核苷酸为原料,用逆转录的方法合成一条被标记的DNA,然后把模板的mRNA给水解掉,这样就得到一条被标记的DNA单链,这就是探针。它的特点就是可以和目的基因转录的mRNA互补配对(即能形成杂交带),所以把探针放在受体细胞中如果发现有杂交带产生,就说明目的基因转录了。
另外,这个探针也可以用来做DNA-DNA分子杂交,即检测目的基因是否导入,方法:先取出受体细胞中DNA然后高温变性成单链,把探针放进去,然后降温复性,如果形成杂交带说明,这些DNA中有能和探针互补的DNA片段,即目的基因。因为这个探针本身就是由mRNA逆转录来的,它的碱基序列与目的基因的一条链完全相同,当然就可以和另外一条链刚好互补了。
这样可以吗?